아산에이에프피모노 - 의약품 상세정보

1) 혈청희석용액

건강토끼혈청을 함유하는 인산완충식염액으로 피검혈청의 희석 및

항체감작혈구, 대조혈구, 흡수용혈구의 복원에 사용한다.

2) 항체감작혈구(동결건조)

항 a-페토프로테인 항체(mouse)를 고정닭적혈구에 감작하여 동결건

조한 것으로 사용시 혈청희석용액을 소정량 가하여 복원한다.

3)대조혈구(동결건조)

Mouse IgG감작 고정닭적혈구를 동결건조한 것으로 사용시 혈청희석

용액을 소정량 가하여 복원한다.

4) 대조용양성혈청(액상)

혈청희석용액으로 10배 희석조제된 a-페토프로테인 양성혈청으로

혈청희석배수 160배의 응집가를 나타낸다. 그대로 사용

5) 흡수용혈구(동결건조)

대조혈구, 감작혈구에서 동시에 양성을 나타낼때 사용하는 것으로

서 소정량의 혈청희석용액을 가하여 복원한다.

6) 피검혈청의 준비

피검혈청에 적혈구, 그외의 유형성분이 포함되어 있으므로 원심침

전으로 제거한다. 또 피검혈청은 불활성화(비동화)하지 않고 사용

한다.

1) 마이크로플레이트에 혈청희석용액을 드롭퍼를 사용하여 제1well에

50 ㎕(2방울), 제2 well, 제3 well, 제4 well에 25 ㎕(1방울)씩 떨어

뜨린다.

2) 다음에 마이크로피펫으로 피검혈청을 정확히 5 ㎕를 취하여 제1

well에 넣는다.(혈청희석용액 50 ㎕가 들어 있는 표층에 주입한다)

3) 제1 well에 Diluter를 넣어서 2ⁿ희석을 제4 well까지 실시한다.

4) 첨부된 스포이드로 제1well에 대조혈구를 제2 - 4 well까지 항체

감작혈구를 1방울(25 ㎕)씩 떨어뜨린다.

5) 플레이트를 Tray Mixer에 걸어서, 내용물을 잘 혼합하고 나서 실온

18-28℃에 수평으로 정치하여 1시간 후에 판정한다.

정성법에서 최종가를 얻지 못한 피검혈청에 대해서는 확인의 의미도

포함하여 정량법을 실시한다.

1) 마이크로플레이트에 혈청희석용액을 드롭퍼를 사용하여 제1 well에

50 ㎕(2방울), 제2 well에서 최종 well까지 25 ㎕(1방울)씩 적하한다.

2) 다음 마이크로 피펫으로 피검혈청을 정확히 5μl를 취하여 제1 well

에 넣는다.(혈청희석용액 50 ㎕가 들어 있는 표층에 주입한다.)

3) 제 1 well에 Diluter을 넣어서 2ⁿ희석을 최종 well까지 실시한다.

4) 첨부된 스포이드로 제 1 well에 대조혈구를, 최종 well까지 항체감

작혈구를 1방울(25 ㎕)씩 적하한다.

5) 이하의 ----------------------- 정성법과 동일하게 실시한다.

1) 각 검체마다 실시한 피검혈청과 대조혈구와의 반응(혈청희석배수

1:10 또는 최종희석배수 1:20)이 음성인 것을 확인한다.

2) 검사시 마다 혈청희석용액과 항체감작혈구 및 대조혈구가 음성인

것을 확인한다.(Medium 대조)

3) Kit마다 대조용양성혈청에 대하여 실험한다.

이미 10배로 희석되어 있으므로 제 2 well이하에 혈청희석용액을

떨어 뜨리고, 다음에 제 1well에 대조용양성혈청을 50 ㎕취하고,

이하는 정량법에 준하여 실시한다. 항원역가는 혈청희석배수로

1:160, 최종희석배수로 1:320이다.

판정용 Viewer(간접투과광선이용)위에 마이크로 플레이트를 수평

으로 정치하고 혈구침하상을 육안으로 판정한다.

반응의 판독은 메디움을 대조의 반응상과 비교하여 아래표의 기

준에 따라 판정한다.

대조혈구가 음성( 혈청희석배수 1:10, 최종희석배수 1:20)이고,

제 2 well 이하의 well에서 양성상을 볼 수 있는 경우 다음식을

이용하여 검체중의 AFP농도를 산출한다.

0.625ng/㎖ x (양성상을 나타낸 최고희석배수) = ( ng/㎖)

본 시약은 0.625 ng/㎖의 검출감도가 있지만, 조작상 혈청을 희석

하기 위한 검출한게는 12.5ng/ ㎖이다.

대조혈구에 양성을 나타내고 항체감작혈구에서도 양성을 나타내는

비특이혈청에 대해서는 다음순서에 따라 흡수조작후 재시험을 하여

야 한다.

1.첨부한 흡수용혈구를 혈청희석용액 0.6㎖로 복원한다.

2.진탕, 현탁후 0.25㎖를 소시험관에 취하여 피검혈청 25 ㎕를 가

하고 혼합하여,실온(18~28℃)에 30분이상 방치한다. (도중 1,2회

잘 흔들어 준다.)

3.다음에 원심침전(3,000rpm,10분간 침전물이 올라온 경우에는 다시

원심한다.)하여, 상청 50 ㎕를 주의깊게 분리하여 플레이트의 제1

Well에 넣어 제 2Well이하는 미리 혈청희석용액 25 ㎕ 씩 적하하여

두고, 제 1Well에 Diluter 를 넣어 2ⁿ희석한다.

4.대조혈구를 제 1Well에 항체감작혈구를 제 2Well이하에 1방울씩 떨어 뜨린다.

5.이하의 조작은 정성법에 준하여 실시한다.