엘지에취씨디3.0티엠비(수출명:엘지에취씨디3.0플러스) - 의약품 상세정보

(1) 세척액 준비

시험을 시작하기 전 상온에 방치하여 완전히 용해된 20배 농축세척액을 정제수로 20배 희석하여 필요한 세척액을 준비합니다. 세척액은 한 웰당 3ml 가량 소요되는데, 실지로 준비해야 할 양은 세척 시 사용하는 방법 및 기기에 따라 추가로 필요로 하게 됩니다. 자동화된 기기를 사용하는 경우, 실지 소요량보다 200ml 가량 추가로 준비하십시오. 이렇게 희석된 세척액은 상온에서 약 30일간 안정하며, 장기 보존 시 2~8℃에 보관하는 것이 안정합니다.

(2) 기질 용액 준비

기질용액을 사용하기 전에 사용코자 하는 웰 수에 따라 적정량의 TMB 농축액을 기질 완충액에 희석합니다. 이 때의 희석비는 TMB 농축액 1: 완충액 100 으로서, 한 플레이트를 시험할 경우 TMB 농축액 150㎕를 기질완충액 15㎖에 희석하면 충분합니다. 기기를 사용하여 분주할 경우에는 그에 따라 소모되는 용액량이 늘어나므로 필요량보다 5㎖ 가량 넉넉하게 준비하십시오. TMB 용액을 희석할 용기는 금속성이 아닌 유리나 플라스틱 재질로 된 용기를 사용하여야 하며 사용 전 반드시 정제수로 세척, 수돗물에 의한 금속성 이온과의 접촉을 방지해야 합니다. 이 용액은 상온에서 보관시 4시간 안정하며 만일 푸른빛을 띨 경우 다시 만들어야 합니다.

(1) 본 시험에서는 혈청 또는 혈장 모두 사용가능하며, 혈구나 혈액응고성분등의 고형물은 가능한 한 빨리 원심하여 완전히 제거합니다.

(2) 검체 채취 시 넣어주는 전형적인 항응고제 (EDTA, citrate, 헤파린)는 본 검사방법을 방해하지 않습니다.

(3) 과산화효소의 활성을 저해하는 물질(예; 보존제로 쓰이는 질화나트륨 NaN₃)을 함유하고 있는 검체는 위음성이 나올 수 있으므로 사용하지 말아야 합니다.

(4) 검체를 단기간(2주 이내) 보관할 경우는 2~8℃에서 냉장보관하고, 장기 보관시는 -15℃ 이하로 냉동보관 해야 합니다.

(5) 용혈이 심하거나 미생물에 오염된 검체의 경우는 부정확한 결과를 나타낼 수 있으니 주의하십시오.

(1)반응정지액을 제외한 키트의 모든 시약은 2~8℃에서 보관하며 유효기간 이내에 사용하여야 합니다. 반응정지액은 상온에서 1년간 안정합니다.

(2) 모든 시약은 사용 시 상온이어야 하며 사용 직후 냉장보관 하여야 합니다. 특히 저온상태의 플레이트를 개봉하면, 웰에 습기가 차서 차후 사용시 문제가 될 수 있으므로 완전히 상온이 된 후 개봉하고, 사용하고 남은 웰들은 습기가 제거된 상태에서 밀봉후 즉시 2~8℃로 옮겨 보관합니다. 습기가 찬 상태로 보관된 웰은 냉장보관 중에도 그 활성도가 떨어질 수 있으므로 주의하십시오.

(3) 효소표지항체용액의 색깔이 노란빛으로 변해 있으면, 미생물에 의해 오염되었을 가능성이 있으므로 사용하지 마십시오.

(4) 조제된 시약의 보관조건 및 보존기간은 다음과 같습니다.

(5) 개봉된 시약의 보관조건 및 보존기간은 다음과 같습니다.

(1) 검사를 시작하기 약 30분 전에 진단시약들을 상온에 방치시켜, 상온으로 맞춰 준다음 용액들은 사용 전 가볍게 흔들어 잘 섞어준 후 사용하고, 플레이트는 상온이 된 후에 개봉하여 사용하십시오.

(2) 검사에 필요한 웰의 수를 결정합니다. 각 검사시, 시험하고자 하는 혈액시료수에 추가로 6웰(1개의 기질 Blank, 3개의 음성표준시료, 2개의 양성표준시료)이 필요합니다. 이 때 사용하지 않은 웰들은 자체 밀봉지에 제습제와 함께 밀봉하여 2~8℃에 보관합니다. (이때 스트립의 웰 밑바닥을 손으로 만지지 마십시오)

(3) 표준시료들 및 검체들을 웰에 가할 위치를 정해 위치를 기록한 다음, 기질 blank를 제외한 각 웰들에 100㎕의 시료희석액을 분주합니다.

(4) 음성표준시료와 양성표준 시료 및 검사하려는 시료들을 10㎕씩 각 웰에 분주한 후 약 5~10초 동안 시료들이 웰 바깥으로 튀지않게 조심스럽게 흔들어 준 후 플레이트 밀봉테이프로 밀봉합니다. 이때 시료희석액의 색상이 보라색에서 밝은 청색으로 변합니다.

(5) 밀봉한 플레이트를 37±1℃에서 60분±5분 동안 반응시킵니다.

(6) 반응 후, 플레이트 밀봉테이프를 벗기고 모든 웰들의 결합하지 않은 내용물을 흡입장치로 제거하고 아래와 같은 세척방법으로 5회 세척합니다. 우선 웰내의 내용물을 흡입장치로 제거한 후, 세척액을 웰에 완전히 채우고 약5~15초 방치한 후 용액을 흡입하는 방법을 5회 반복한 다음, 휴지에 대고 살짝 털어 잔여용액을 제거합니다.

(7) 기질 blank를 제외한 모든 웰에 효소표지항체용액 100㎕씩을 분주한 후 밀봉 테이프로 밀봉합니다.

(8) 밀봉한 플레이트를 37±1℃에서 30분±1분 동안 반응시킵니다.

(9) 반응 후, 플레이트 밀봉 테이프를 벗기고 모든 웰들의 결합하지 않은 내용물을 흡입장치로 제거하고 세척액으로 5회 세척한 후 휴지에 대고 살짝 털어 잔여 용액을 제거합니다.

(10) 미리 조제한 기질용액을 기질 blank를 포함한 모든 웰에 100㎕씩 분주합니다.

(11) 15~30℃, 암소에서 30분±1분동안 반응시킵니다.

(12) 반응정지액을 기질 blank를 포함한 모든 웰에 100㎕씩 분주합니다.

(13) 플레이트 바닥을 부드러운 흡습성 종이로 잘 닦아 습기를 제거한 후 450nm에서 흡광도(OD)를 측정합니다. 만약 이중 파장 흡광도 측정기를 사용할 경우 보조(reference) 파장을 620nm 또는 650nm로 맞추어 사용합니다.

(1) 음성 표준시료의 평균 흡광도 NC·x 계산

앞 4항의 진단방법에 따라 음성표준시료의 흡광도를 얻은 다음 그 세 값의 평균값을 산출합니다.

예)

음성표준시료의 평균 흡광도 NC·x 0.032/3=0.011

1) 각 음성 표준시료의 흡광도 값은 -0.005와 0.2 사이어야 합니다. 만약 흡광도 값이 -0.005~0.000 사이로 읽혔다면 평균값 계산 시 0.000으로 처리하여 줍니다.

2) 만약 3개의 음성 표준시료의 흡광도 값 중 1개의 값이 위 범위를 벗어났을 경우 나머지 2개 값의 평균값으로 산출합니다.

3) 만약 3개의 음성 표준시료의 흡광도 값 중 2개 이상의 값이 위 범위를 벗어났을 경우 재실험을 하여야 합니다.

(2) 양성 표준시료의 평균 흡광도 PC·x 계산

앞 4항의 진단방법에 따라 양성표준시료의 흡광도를 얻은 다음, 그 두 값의 평균값을 산출합니다.

예)

양성 표준시료의 평균 흡광도 PC·x 3.0/2=1.5

* 측정한 양성 표준시료의 흡광도(450nm) 값이 0.8이상 이어야 하며 두 값의 차이가 0.65이하여야 합니다.

(3) 판정기준치(cutoff value)의 계산

음성표준시료의 평균 흡광도(NC·x) 값에 0.4를 더합니다.

예) 판정기준치(cutoff value)=0.011+0.4=0.411

(4) 결과의 해석 및 판정

1) 검체의 흡광도 값이 판정기준치(cutoff value)보다 작으면 음성으로 판정하며, 재 실험을 수행하지 않아도 됩니다.

2) 검체의 흡광도 값이 판정기준치(Cutoff value) 이상이면 최종 판정을 내리기 전, 두 웰에 반복실험을 하여, 다음과 같은 기준으로 해석을 하여야 합니다.

첫째, 반복 실험한 값 중 하나만이라도 판정기준치 이상이면 양성으로 판정합니다.

둘째, 반복 실험한 두 값 모두가 판정기준치보다 작으면 음성으로 판정합니다.

3) 판정기준치 근처의 값을 갖는 검체의 경우(판정기준치 ±10%), 2주~4주 후 정도에 다시 혈액을 채취하여 검사하는 것이 좋습니다.

* 올바른 검사를 위해 준수해야 할 사항

1) 반응 정지액, 농축 세척액을 제외한 모든 시약들은 동일한 Lot 번호의 것을 사용해야 합니다.

2) 모든 검체시료 및 시약을 피펫팅 할 때는 사용하였던 피펫팁을 재사용하지 말아야 합니다.

3) 일단 실험 시작 이후에는 웰들이 마르지 않도록, 각 단계 사이에 중단함이 없이 진행 되어야 합니다.

4) 검사되는 시료들이 기질 blank, 양성표준시료 및 음성표준시료와 동일한 조건에서 검사될 수 있도록 하십시오. 한번에 여러 개의 플레이트를 시험하는 경우라도, 모든 플레이트에 각각 기질 blank, 양성표준시료 및 음성표준시료를 포함시켜서 시험하십시오.

5) 사용하고 남은 시약 및 웰들은 상기 보관조건 및 보관 기간에 준수하여 보관/사용하십시오.