제네디아렙토피에취에이(Genedia Lepto PHA) - 의약품 상세정보

시험 시작 15 ~ 30분전에 건조 렙토스피라 항원 감작 면양적혈구(1번병)에 용해액(4번병) 5㎖을 넣고 균일하게 혼합한다.(이 용액은 2~8℃에서 7일간 안정하다.)또한 건조 대조 적혈구(2번병) 1병에 용해액(4번병) 3㎖을 가해 용해한다.(이 용액은 2~ 8℃에서 7일간 안정하다.)

한편, 건조 대조 양성 혈청에는 증류수 0.6㎖을 넣어 용해한다.(이 용액은 2~8℃에서 1 개월간 안정하다.)

가. 정성 시험 방법

1) 본 시험은 96well에 가로줄 1~12, 세로줄 A-H로 표시된 Microplate를 사용한다.

2) Dropper로 용해액(4번병)을 1-A well에 25ul, 2-A well에 100ul, 3-A well, 4-A well, 5-A well에 각각 25ul씩 떨어뜨린다.

3) 25ul로 조정된 피펫으로 검사하고자 하는 혈청 25ul를 취하여 1-A well에 넣는다.

4) 피펫으로 잘 희석한 다음 1-A well의 용액 25ul를 취하여 2-A well에 넣고 잘 섞는다.

5) 2-A well의 용액을 3-A well 및 4-A well에 각각 25ul를 넣고 잘 섞는다.

6) 3-A well의 용액 25ul를 제거한 다음 4-A well의 용액 25ul를 취하여 5-A well에 넣고 잘 섞는다.

7) 5-A well의 용액 25ul를 취하여 제거한다.

8) Dropper로 3-A well에 용해된 대조 적혈구액 75ul을 4-A well, 5-A well에 용해된 렙토스피라 항원 감작 면양 적혈구액 75ul씩을 떨어뜨린다.

9) 대조용 양성 혈청과 용해액에 대한 응집 반응 시험도 위 검체와 같은 방법으로 실시한다.

10) 이 Microplate를 Micromixer로 약 10초간 진탕한 후 실온에서 2시간 정치시킨 다음 응집상을 관찰하여 판독하며 의심스러운 응집상을 나타낸 검체는 Overnignt시켜 최종 판독한다.(단, 정치시 Microplate의 상면을 덮어 두며 충격을 가하지 않는다.)

나. 정량 시험 방법

1) Microplate에 용해액을 Dropper로 1-A well에 25ul, 2-A well에 100ul, 3-A well부터 최종 well까지(8-A well 이상)까지 25ul씩을 떨어뜨린다.

2) 25ul로 조정된 피펫으로 검사하고자 하는 혈청 25ul를 1-A well에 넣는다.

3) 피펫으로 잘 희석한 다음 1-A well의 용액 25ul를 취하여 2-A well에 넣고 잘 섞는다.

4) 2-A well의 용액을 3-A well 및 4-A well에 각각 25ul를 넣고 잘 섞는다.

5) 3-A well의 용액 25ul를 제거한 다음 4-A well의 용액 25ul를 취하여 5-A well에 넣고 최종 well까지 2ⁿ배 단계 희석한다.

6) 최종 well의 용액 25ul를 취하여 제거한다.

7) Dropper로 3-A well에 용해된 대조적혈구액 75ul을 4-A well로부터 최종 well까지는 용해된 렙토스피라 항원 감작 면양적혈구액 75ul씩을 떨어뜨린다.

8) 이하의 조작은 정성시험법과 동일하게 실시한다.

대조용 양성혈청에서는 4-A well 및 5-A well에서 응집이 일어나고 3-A well에서는 응집이 일어나지 않으면 실험이 잘된 것으로 인정한다.

가. 정성 시험 판정방법

나. 정량 시험 판정방법

정성시험 판정방법과 동일한 방법으로 판정하며, 응집상이 인정되는 최종 혈청 희석배율을 항체가로 한다.

대조혈구 및 감작 혈구에서 동시에 응집이 일어나는 검체는 아래 순서에 의해 흡수 조작을 한 후 재시험을 한다.

1) 건조 흡수용 면양적혈구를 용해액 1㎖로 사용하기 15~30분전에 용해한다.

2) 시험관에 용해된 흡수용 면양 적혈구액을 0.25㎖을 넣고 검체를 25ul를 넣는다.

3) 잘 혼합한 후 15~30℃에서 30분 이상 방치한다.(중간에 여러 번 잘 흔들어 준다.)

4) Microplate 1-A well부터 최종 well까지 용해액을 25ul씩 넣는다.

5) 3)번 용액을 원심(2,500rpm, 7분)하여 상청액을 주의깊게 분리하여 Microplate 1-A well 및 2-A well에 각각 25ul씩 넣는다.

6) 1-A well을 잘 희석한 후 25ul를 취하여 버린다.

7) 2-A well부터 최종 well까지 2ⁿ배 단계 희석한다.

8) 최종 well의 용액 25ul를 취하여 제거한다.

9) 1-A well에 대조 혈구액 75ul를, 2-A well부터 최종 well까지 렙토스피라 항원감작 적혈 구액 75ul를 떨어뜨린다.

10) 이하 조작은 정성시험법에 준한다.

* 혈청 희석 배율

 가. 정성시험

* 응집가 판독 및 판정법

* 결과 해석

1) 본 Kit는 렙토스피라 항체의 검출 및 그 항체가를 결정하는데 보조수단으로 이용되며 양 성으로 판정된 환자를 렙토스피라 병으로 확진하여서는 안되고 최종적인 판단은 환자의 병력, 임상 증상 및 확인 시험을 통하여 결정하여야 한다.

2) 1차 검사시 응집 반응을 보인 환자를 렙토스피라 환자에서 제외시켜서는 안되며 일정 기 간 후에 채혈한 혈청과 비교 진단해야 한다.

3) 통상적으로 동일한 환자에 있어 처음 검사시의 항체가에 비해서 2-5주 후 항체가가 4배 이상 상승하면 렙토스피라 현증환자, 4배 이상 떨어지면 회복기 환자임을 시사해 준다.

4) 본 Kit는 항체가를 검출하기 위한 시약이기 때문에 Screening용으로만 사용하며 원인균 의 혈청형을 동정하거나 결정하는데 적합치 않다.