한타디아키트(HANTADIA Kit) - 의약품 상세정보

가. 한탄바이러스 HDP액의 제조

실험 시작 30분전에 건조 한탄바이러스 항원감작 HDP(1번병) 1병에 HDP 희석액(4번병) 1.1㎖을 가해 용해한다.

나. 대조 HDP액의 조제

실험 시작 30분전에 건조 대조 HDP(2번병) 1병에 HDP 희석액(4번병) 1.1㎖을 가해 용해 한다.

다. 양성 대조액의 조제

건조 대조 양성혈청(3번병)에 검체 희석액(5번병) 1㎖을 넣어 용해한다.

(조제된 양성대조액은 1:40으로 희석된 용액이다.)

라. 검체의 처리

검체는 혈청 또는 혈장을 사용한다.

단, 검체에 적혈구나 유형성분 등이 함유되어 있을 때에는 원심분리하여 제거한 후 사용 하여야 한다. 또한 미생물에 심하게 오염된 검체는 사용하지 말 것.

가. 조제된 시약의 보관 조건 및 보존 기간

나. 개봉된 시약의 보관 조건 및 보존 기간

가. 정성 시험 방법

1) 본 시험은 96well에 가로줄 1~12, 세로줄 A-H로 표시된 V형 바닥 Microplate를 사용하여 시험한다.

2) 깨끗한 시험관을 준비하여 검사하고자 하는 검체를 각각 10ul씩 각기 다른 시험관에 넣 고 검체 희석액 400ul씩을 가하여 희석한다.(1:40 희석)

3) 양성 대조액을 두 well에(예;1-A, 2-A well) 25ul씩 넣고 검체 희석액(음성대조액)을 다 음 두 well에(예;1-B, 2-B well) 25ul씩 넣는다.(양성대조액 및 음성대조액은 희석하지 않고 넣는다.) 2)에서 희석된 검체를 순서대로 각 검체마다 두 well에 25ul씩 넣는다. well에 용액을 넣을때에는 기포가 생기지 않도록 주의한다.

4) 첨부된 Dropper로 한 well에는 용해된 대조 HDP액(2번병)을, 다른 well에는 용해된 한탄 바이러스 항원감작 HDP액(1번병)을 각각 25ul씩 넣는다.(한탄바이러스 항원 감작 HDP액 과 대조 HDP액은 사용하기 직전에 잘 흔들어 사용한다.)

5) Plate를 Microplate Mixer로 10초간 교반시킨다. 이때 각 well의 내용물이 서로 혼입되 거나 튀지 않도록 주의한다.

6) Plate를 실온에서 60분간 정치시킨 후 응집상을 관찰하여 판정하며 판정하기 어려운 응 집상을 나타낸 검체는 Overnight 시켜 최종 판정한다.(단, 정치시 Microplate의 상면을 덮어두며 충격을 가하지 않는다.)

7) 아래 정성 시험 결과 판정법에 따라 결과를 판정한다.

나. 정량 시험 방법

정량시험은 정성 검사에서 양성으로 판정된 검체의 항체가의 측정과 환

자의 항체가 변화 를 검사하기 위한 시험법이다.

1) 본 시험은 96well에 가로줄 1~12, 세로줄 A-H로 표시된 V형 바닥 Microplate를 사용하여 시험한다.

2) 깨끗한 시험관을 준비하여 검사하고자 하는 검체를 각각 10ul씩 각기 다른 시험관에 넣 고 검체 희석액 400ul씩을 가하여 희석한다.(1:40 희석)

3) 첨부된 Dropper를 사용하여 Microplate에 검체희석액을 3번 well부터 최종 well까지(12 번 well) 25ul(1방울)씩을 떨어뜨린다.

4) 양성대조액을 플레이트의 A번 줄의 1, 2, 3번 well에(1-A, 2-A, 3-A well) 25ul씩 넣는 다.(양성대조액은 희석하지 않고 넣는다.)

5) 3번 well을 피펫으로 잘 희석한 다음 25ul를 취하여 4번 well에 넣고 잘 희석한다. 이와 같은 방법으로 최종 well(12번 well)까지 2ⁿ배 단계 희석한다.

6) 최종 well의 용액 25ul를 취하여 제거한다.

7) 플레이트의 B번 줄부터 2)에서 희석된 검체에 대하여 양성대조액과 동일한 방법으로 단 계 희석시킨다. well에 용액을 넣을 때에는 기포가 생기지 않도록 주의한다.

8) 첨부된 Dropper로 1번 well까지는 용해된 대조 HDP액 25ul(1Drop)을 넣고 2번 well부터 최종 well까지는 용해된 한탄바이러스 항원 감작 HDP액 25ul씩 떨어뜨린다.

(한탄바이러스 항원 감작 HDP액과 대조 HDP액은 사용하기 직전에 잘 흔들어 사용한다.)

9) Plate를 Microplate Mixer로 10초간 교반시킨다. 이때 각 well의 내용물이 서로 혼입되 거나 튀지 않도록 주의한다.

10) Plate를 실온에서 60분간 정치시킨 후 응집상을 관찰하여 판정하며 판정하기 어려운 응 집상을 나타낸 검체는 Overnight 시켜 최종 판정한다.(단, 정치시 Microplate의 상면을 덮어주며 충격을 가하지 않는다.)

11) 아래 정량 시험 결과 판정법에 따라 결과를 판정한다.

가. 정성 시험

양성대조액에 대조 HDP액을 넣은 well(첫번째 well)에서는 응집이 일어나지 않고 한탄바 이러스 항원감작 HDP액을 넣은 well(두번째 well)에서 응집이 일어나야 한다.

음성대조액(검체희석액)에 대조 HDP액을 넣은 well(첫번째 well)과 한탄바이러스 항원감 작 HDP액을 넣은 well(두번째 well)에서 모두 응집이 일어나지 않아야 한다.

만약 이와 다른 결과가 나타나면 실험이 잘못된 것이므로 재시험을 실시한다.

나. 정량 시험

양성대조액에 대조 HDP액을 넣은 well(첫번째 well)에서는 응집이 일어나지 않아야 하며 2번 well부터 6번 well이상까지 응집이 일어나면 실험이 잘된 것으로 인정한다.

* 응집 판정법

가. 정성시험 판정방법

1) 대조 HDP액을 넣은 well 및 한탄바이러스 항원 감작 HDP액을 넣은 well에서 동시에 응집이 일어나지 않으면 음성으로 판정한다.

2) 대조 HDP액을 넣은 well에서는 응집이 일어나지 않고 한탄바이러스 항원 감작 HDP액을 넣은 well에서만 응집이 일어나면 양성으로 판정한다.

3) 대조 HDP액을 넣은 well과 한탄바이러스 항원 감작 HDP액을 넣은 well에서 동시에 응집이 일어나거나 판정 보류로 결과가 나타난 검체는 흡수 조작 후 재검사를 실시한다.

4) 대조 HDP액을 넣은 well에서는 응집이 일어나지 않고 한탄바이러스 항원 감작 HDP액을 넣은 well에서 판정보류결과를 나타낸 검체는 1주일 후 다시 채혈하여 검사를 실시하며 이때도 판정 보류 결과를 나타내면 음성으로 판정한다.

5) 대조 HDP액을 넣은 well에서는 응집이 일어나고 한탄바이러스 항원 감작 HDP액을 넣은 well에서는 응집이 일어나지 않으면 조작상의 실수에 의한 응집으로 판단되므로 음성으 로 판정한다.

6) 정성검사에서 양성으로 판정된 검체는 반드시 정량 검사를 실시한다.

나. 정량 시험 판정방법

응집 판정 방법은 정성 시험과 동일한 방법으로 판정되며, 양성으로 판정되는 최종 희석 배율을 항체가로 한다.

1) 용해된 대조 HDP액 200ul를 시험관에 넣고 2,000rpm에서 5분간 원심분리 시킨 후 상청액을 제거한다.

2) 검체 희석액으로 1:40으로 희석한 검체를 200ul를 취하여 1)에서 얻은 침전에 넣고 잘 흔들어 침전을 완전히 용해한 후 실온에서 30분간 정치시킨다. (단, 정치시 10분 간격으 로 잘 흔들어 준다.)

3) 2,000rpm에서 5분간 원심분리 시킨다.

4) 상청액을 검체로 하여 이하 정성 시험법에 따라 시험한다.

* 혈청 희석 배율

가. 정성 검사시

나. 정량 검사시

* 결과 판정

1) 본 Kit는 신증후 출혈열의 원인 바이러스인 한탄바이러스의 항체 검출 및 그 항체가를 결정하는데 이용되어 양성으로 판정된 검체는 한탄바이러스에 대한 항체가 있는 것으로 판단된다.

2) 정량 검사 결과 항체가가 1280이상이면 환자의 병력, 임상 증상 및 확인 시험 통하여 신증후 출혈열 현증환자로 진단할 수 있다.

3) 신증후 출혈열 환자의 항체가는 일반적으로 발병 2주일 전후하여 최고치를 나타내는데 발병 초기(1주일 이내) 항체가보다 1주일 전후(발병 2주일 전후)의 항체가가 2배이상 상승하면 신증후 출혈열 현증 환자임을 시사해 준다.

단, 발병 시점 3주일을 전후하여서는 항체가가 오히려 감소할 수 있다.