제네디아에취비에스에이지컨펌(Genedia HBsAg Confirm) - 의약품 상세정보

혈장 또는 혈청을 검체로 사용하며 혈구나 혈액 응고성분등의 고형물을 원심하여 완전히 제거한다.

1) 제네디아 에취비에스 에이지 엘리자 3.0에 있는 음성대조액과 양성대조액 각 300㎕ 그리고 확인 시험하고자 하는 검체 각 150㎕씩을 2개의 시험관에 넣은 후, 한 시험관에는 시료 부피의 10%량의 중화제를 (대조액 시험관 : 300㎕의 10%인 30㎕, 검체 시험관 : 150㎕의 10%인 15㎕) 첨가하고, 나머지 시험관에는 시료 부피의 10%량의 대조혈청을 (대조액 시험관 : 300㎕의 10%인 30㎕, 검체시험관 : 150㎕의 10%인 15㎕) 첨가한 후 교반기로 완전히 섞고 시험관 입구를 밀봉한다.

2) 37℃에서 30분간 반응시킨다.

3) 위와 같이 처리된 검체를 제네디아 에취비에스에이지 엘리자 3.0을 사용하여 아래의 방법으로 검사한다.

가. 시약의 조제

① 모든 시약은 실험시작 15-30분전에 실온에 둔다.

② 밀봉된 항체 흡착 플레이트를 꺼내어 필요한 만큼의 Strip을 남기고, 나머지 strip은 frame에서 빼내어 실리카겔과 함께 밀봉한 후 2-8℃에 보관한다. 이때 보관중인 은박포내에 습기가 들어가면 항체역가의 저하를 일으킬 수 있으니 주의한다.

③ 세척액의 조제

농축세척액(6번병)을 증류수나 이온정제수로 10배 희석하여 필요한 양만큼 준비한다. (필요한 세척액량이 200㎖일 경우 농축세척액 20㎖에 증류수나 이온 정제수 180㎖를 넣어 총부피가 200㎖이 되도록 한 다음 잘 섞는다.)

④ 접합체액의 조제

사용하기 10분 전에 농축접합체액(2번병)을 접합체희석액(3번병)으로 1:25의 비율로 필요한 양만큼 희석한다.

⑤ 기질액의 조제

기질액은 사용하기 5-10분전에 기질액(7번병)과 기질용완충액(8번병)을 1:100의 비율로 혼합하여 사용한다. (실험시 1strip당 기질액 10㎕에 기질용완충액 1㎖를 혼합하여 조제한다.)

나. 검사방법

① 시험에 필요한 양 만큼의 strip을 꺼내어 frame에 고정시킨다.

② 농축접합체액(2번병)을 접합체희석액(3번병)으로 1:25의 비율로 필요한 양만큼 혼합하여 접합체액을 제조한다.

③ 플레이트의 1A, 1B well에는 1)에서 조제한 음성대조액 100㎕씩, 1C, 1D well에는 1)에서 조제한 양성대조액 100㎕씩, 나머지 각 well에는 검체를 각각 100㎕씩 차례대로 넣는다.

④ ②번에서 조제한 접합체액을 각 well에 25㎕씩 넣고 frame을 가볍게 쳐서 잘 혼합한 다음 37±1℃에서 90분간 반응시킨다.

⑤ ④번 반응이 끝나기 5-10분전에 기질액(7번병)을 기질용완충액(8번병)으로 1:100의 비율로 필요한 양만큼 혼합하여 기질용액을 제조한다.

⑥ 각 well의 내용물을 흡입해 내고 조제된 세척액으로 5회 세척한다. (1회에 각 well 당 300㎕ 이상)

⑦ 세척된 플레이트를 흡습지에 뒤집어 강하게 쳐서 남아있는 세척액을 완전히 제거한 다음 ⑤에서 조제한 기질용액을 각 well에 100㎕씩 넣고 frame을 가볍게 쳐서 잘 혼합한 다음 실온에서 30분간 반응시킨다.

⑧ 반응정지액(9번병)을 100㎕씩 각 well에 넣어 반응을 정지시키고 잘 흔들어 양성반응 well의 청색이 황색으로 완전히 변하게 한다.

⑨ 공기를 맹검으로 하여 음성대조액, 양성대조액 및 검체의 흡광도를 측정한다. 이때 흡광도의 측정은 측정파장 450nm, 참조파장 620nm로 하며, 반응정지액을 넣은 후 30분 이내에 측정한다. 단, 육안판정법은 판정기준액의 흡광도를 기준으로 검체의 흡광도를 관찰한다.

1) 대조용 혈청을 넣은 음성대조액의 흡광도 평균값은 0.000 이상 0.200 이하이어야 하며, 양성대조액의 흡광도 평균값은 0.800 이상이어야 한다.

2) 중화제를 첨가한 양성대조액의 흡광도는 대조용 혈청을 넣은 양성대조액 흡광도의 50%이하이어야 한다.

위의 정도관리에 일치하지 않는 시험결과를 보였을 때에는 그 원인을 확인하고 제거한 후에 재검사 하여야 한다.

1) 중화율의 계산

                           (중화제를 첨가하여 검사한 흡광도값)

중화율 = 100 - X 100%

                          (대조용 혈청을 첨가하여 검사한 흡광도)

2) 결과의 판정

가. 중화율 ≥ 50% : 진양성

나. 중화율 < 50% : 재검사

재검사의 경우, 혈청을 생리식염수로 100배 희석후 대조용 혈청으로 다시 10배 희석하여 용법, 용량대로 중화실험을 실시한다.

* 1000배 희석 혈청에서 중화율 ≥ 50% : 진양성

* 1000배 희석 혈청에서 중화율 < 50% : 위양성

단 원액에서는 중화율이 50%미만이면서 1000배 희석 혈청에서 중화전, 후 모두에서 음성 결과(판정기준값 미만 = Ncx+0.05)를 나타내면 위양성으로 판정한다.

예)