제네디아매독엘리자(Genedia Syphilis ELISA) - 의약품 상세정보

1) 신선한 혈청이나 혈장을 검체로 사용하며 희석하여 사용하지 않는다.

2) 검체는 용혈이나 미생물 오염이 안된 것을 사용한다.

3) 검체 채취 후 7일 이내 검사시에는 -4℃에 보관하며, 장기보관은 -20℃에서 한다.

4) 위양성 또는 위음성 반응을 일으킬 수 있으니 혈청의 동결, 용해를 반복하지 않는다.

5) 과산화 효소의 활성을 저해하는 방부제(질화나트륨)가 들어 있는 검체는 사용하지 않는다.

1) 모든시약은 실험시작 15-30분전에 실온에 두며 거품이 나지 않도록 흔들어서 사용한다.

2) 밀봉된 항원 흡착 플레이트를 꺼내어 필요한 만큼의 스트립을 남기고 나머지는 프레임에서 빼내어 실리카겔과 함께 밀봉한 후 2-8℃에 보관한다. 이때 보관중인 은박포내에 습기가 들어가면 항원역가의 저하를 일으킬수 있으니 주의한다.

3) 세척액의 조제

농축세척액을 증류수나 이온정제수로 20배 희석하여 필요한 양만큼 준비한다.

(필요한 세척액량이 200㎖일 경우 농축세척액 10㎖에 증류수나 이온정제수 190㎖을 넣어 총부피가 200㎖이 되도록 한 다음 잘 섞는다.)

농축세척액은 냉장보관 상태에서 결정이 생길수도 있다. 이 경우에는 37±1℃항온수조에서 녹인다음 사용한다.

4) 기질액의 조제

사용하기 5-10 분전에 기질액과 기질용완충액을 1:100의 비율로 혼합하여 사용한다.【실험시 1 스트립(8wells)당 기질액 10±1 ㎕에 기질용완충액 1±0.01 ㎖을 혼합하여 조제한다.】 혼합된 기질액은 직사광선을 피하여 보관한다.

기질액은 냉장(4±1℃)에서 얼어 있으니 반드시 37±1℃항온수조에서 완전히 녹여 균질화한 후 사용하여야 한다. (기질액의 어는점 18±1℃)

1) 시험에 필요한 양만큼의 스트립을 꺼내어 프레임에 고정시킨다.

2) 플레이트의 각 well에 음성대조액 2 wells, 약-양성대조액 2 wells, 강-양성대조액 2 wells, 나머지 wells에 검체를 각각 25㎕씩 차례대로 넣는다. (단, 대조액은 검체를 넣은 후 맨 나중에 넣는다.) 검체를 넣은직후에 30분이내에 접합체액을 각각의 wells에 100㎕씩 넣는다. 플레이트를 microplate shaker를 이용하여 1,000rpm으로 10±2초간 흔들어 혼합시킨다.

** microplate shaker를 이용하여 흔들 때 내용물이 well밖으로 튀거나 서로 섞이지 않도록 주의한다.

3) 첨부된 sealer로 플레이트를 밀봉한 다음 37±1℃에서 90±5분간 반응시킨다.

4) 3)번 반응이 끝나기 5-10분전에 기질액을 기질용완충액으로 1:100의 비율로 필요한 만큼 희석하여 기질액을 조제한다.

5) 각 well의 내용물을 흡입해 내고 세척액으로 5회 세척한다. (soak time은 30초로 설정한다.)(각 well당 300㎕이상/회)

6) 세척된 플레이트를 흡습지에 뒤집어서 가볍게 쳐서 세척액을 완전히 제거한 다음 4)에서 조제한 기질액을 각 well에 100㎕씩 넣고 프레임을 가볍게 쳐서 잘 혼합한 다음 실온에서 30±5분간 반응시킨다. 이 반응은 직사광선을 피하여 실시한다.

7) 반응정지액을 각 well에 100㎕씩 넣고 프레임을 가볍게 쳐서 발색물을 균질화한다.

8) 공기를 맹검으로하고(air blank) 음성대조액, 약-양성대조액, 강-양성대조액 및 검체의 흡광도를 측정한다.

흡광도의 측정은 측정파장 450nm, 참조파장 620nm로 한다.

흡광도는 반응정지액을 넣은후 가급적 30분 이내에 흡광도를 측정한다.

1) 약-양성대조액의 평균 흡광도값은 0.5이상이어야 한다.

2) 음성대조액의 평균 흡광도값은 판정기준값보다 높아야 한다.

3) 강-양성대조액의 평균 흡광도값은 equivocal zone 보다 낮아야 한다.

만일 상기의 기준에 적합하지 않을 경우에는 실험기술상의 문제나 시약의 변질로 인한 것으로 여겨지므로 그 원인을 확인하여 재 실험을 실시한다.

1) 판정기준치(Cut off Value)산출

가. 음성대조액의 평균흡광도를 구한다.

예) 음성대조액 1의 흡광도 = 1.941

음성대조액 2의 흡광도 = 2.011

음성대조액의 평균 흡광도 = (1.941 + 2.011)/2 = 1.976

나. 약-양성대조액의 평균값을 구한다.

예) 약-양성대조액 1의 흡광도값 1.363

약-양성대조액 2의 흡광도값 1.347

약-양성대조액 평균흡광도값(NCx) = (1.363+1.347)/2 = 1.355

다. 강-양성대조액의 평균값을 구한다.

예) 강-양성대조액 1의 흡광도값 0.621

강-양성대조액 2의 흡광도값 0.619

강-양성대조액 평균흡광도 = (0.621+0.619)/2 = 0.620

라 판정기준값의 계산

판정기준값 = 약-양성대조액의 평균 흡광도 × 1.2

예) 판정기준값 = 1.355 ×1.2 = 1.626

마. equivocal zone 의 계산

equivocal zone은 판정기준값부터 equivocal zone 허용치 사이의 범위를 말한다.

equivocal zone 허용치 = 판정기준값 × 0.9 = 1.463

즉, 약-양성대조액의 평균 흡광도 값이 1.355이라면 equivocal zone은 흡광도 1.626부터 1.463 사이를 그 범위로 한다.

2) 판정

Equivocal zone 미만의 흡광도값을 갖는 검체를 양성으로 판정하며, 판정기준값 보다 높은 흡광도를 갖는 검체는 음성으로 판정한다.

검체의 흡광도가 equivocal zone에 들어 있는 검체는 판정보류로 하며 두 wells 이상 재검을 실시하여 판정하며 그래도 불명확 할 때에는 다른 검사 방법으로 검사한다.

** 만일 검체가 양성으로 판정되면 2회 더 실험을 실시하여 두 번 모두 음성 결과를 나타내면 음성으로 판정하고 한번 이상 양성결과를 나타내면 양성으로 판정한다.

** 양성으로 판정된 검체는 FTS-ABS등의 다른 방법으로 검사하여 최종판정을 한다.