제네디아에취아이브이1/2엘리자3.0플러스(Genedia HIV 1/2 ELISA 3.0 plus) - 의약품 상세정보

혈장 또는 혈청을 검체로 사용하며 혈구나 혈액응고성분 등의 고형물을 원심하여 완전히 제거한다.

1) 모든시약은 실험시작 약30분 전에 실온에 둔다.

2) 밀봉된 항원 흡착 플레이트를 꺼내어 필요한 만큼의 Strip을 남기고 나머지 Strip은 Frame에서 빼내어 실리카겔과 함께 밀봉한 후 2~8℃에 보관한다. 이때 보관중인 은박포 내에 습기가 들어가면 항원역가의 저하를 일으킬 수 있으니 주의한다.

3) 세척액의 조제

농축세척액을 증류수나 이온정제수로 20배 희석하여 필요한 양만큼 준비한다. [필요한 세척액 량이 200ml일경우 농축세척액 10ml에 증류수나 이온정제수 190ml을 넣어 총 부피가 200ml이 되도록 한 다음 잘 섞는다.]

농축세척액은 냉장보관 상태에서 결정이 생길수도 있다. 이 경우에는 37±1℃항온수조에서 녹인 다음 사용한다.

4) 접합체액의 조제

사용하기 전에 농축접합체액을 접합체희석액으로 1:50의 비율로 필요한 양만큼 희석한다. [실험시 1 Strip (8well)당 농축접합체액 20μl에 접합체희석액 1±0.01ml를 혼합하여 조제한다.]

5) 기질액의 조제

기질액을 사용하기 전에 기질액과 기질용완충액을 1:100의 비율로 혼합하여 사용한다. [실험시 1strip (8well)당 기질액 10μl에 기질용완충액 1ml을 혼합하여 조제한다] 혼합된 기질액은 직사광선을 피하여 보관한다. 기질액은 냉장에서 얼어있으니 반드시 37℃수조에서 녹여 균질화 한 후 사용해야 한다. (기질액의 어는점 18℃)

1) 시험에 필요한 양 만큼 스트립을 꺼내어 프레임에 고정시킨다.

2) 플레이트의 각 well에 검체 희석액을 100μl씩 넣고, 음성대조액 3wells, 양성대조액 2wells, 나머지 wells에 검체를 각각 50μl씩 차례대로 넣는다. 플레이트를 잘 흔들어 혼합시킨다.

3) 플레이트를 sealer로 밀봉한 다음 37±1℃에서 60분간 반응시킨다.

4) 3)의 반응이 끝나기 5~10분 전에 농축접합체액을 접합체희석액으로 1:50의 비율로 필요한 만큼 희석한다.

5) 각 well의 내용물을 흡입해 내고, 조제한 세척액으로 5회 세척한다.

6) 세척된 플레이트를 흡습지에 뒤집어 가볍게 쳐서 세척액을 완전히 제거한 다음 4)에서 조제된 접합체액을 각 well에 100μl씩 넣는다.

7) 플레이트를 sealer로 잘 밀봉한 후 37±1℃에서 30±5분간 반응시킨다.

8) 7)의 반응이 끝나기 5~10분전에 기질액을 기질용완충액으로 1:100의 비율로 필요한 만큼 희석해 기질액을 조제한다.

9) 각 well의 내용물을 흡입해 내고 조제한 세척액으로 5회 세척한다.

10) 세척된 플레이트를 흡습지에 뒤집어 가볍게 쳐서 세척액을 완전히 제거한 다음 8)에서 조제한 기질액을 각 well에 100μl씩 넣고 실온에서 30분간 반응시킨다. 이 반응은 직사광선을 피해 실시한다.

11) 반응정지액을 100μl씩 각 well에 넣고 플레이트를 가볍게 쳐서 발색물을 균질화 한다.

12) 공기를 맹검으로 하고 (air blank) 음성대조액, 양성대조액 및 검체의 흡광도를 측정한다.

흡광도의 측정은 측정파장 450nm으로 하고, 만약 이중파장 흡광도 측정기를 사용할 경우 참조파장은 620nm또는 650nm로 한다. 흡광도는 반응정지액을 넣은 후 30분 이내에 측정한다.

양성대조액의 흡광도 평균값이 1.0이상이고, 세 개의 음성대조액의 흡광도 평균값이 0.200 이하 이어야 한다. 만약 이 기준에 적합하지 않을 경우에는 실험기술상의 문제나 시약의 변질로 인한 것으로 생각되므로 그 원인을 확인하여 재 실험을 실시한다.

1) 판정 기준치 (Cut off Value) 산출

가. 음성대조액의 평균 흡광도값을 구한다.

예) 음성대조액 1의 흡광도 값 = 0.051

음성대조액 2의 흡광도 값 = 0.054

음성대조액 3의 흡광도 값 = 0.048

음성대조액의 평균 흡광도값 (NCx) = (0.051+0.054+0.048)/3 = 0.051

나. 양성대조액의 평균흡광도값을 구한다.

예) 양성대조액 1의 흡광도값 = 1.856

양성대조액 2의 흡광도값 = 1.862

양성대조액 평균흡광도값 (PCx) = (1.856+1.862)/2=1.859

다. 판정기준값의 계산

판정기준값 (Cut off Value) = NCx +0.3

2) 판정

판정기준치 이상의 흡광도값을 갖는 검체를 양성으로 판정하며, 이 값 미만의 흡광도값을 갖는 검체는 음성으로 판정한다.

** 만일 검체가 양성으로 판정되면 2well 더 실험을 실시하여 두 번 모두 음성결과를 나타내면 음성으로 판정하고 한번 이상 양성결과를 나타내면 양성으로 판정한다.

** 양성으로 판정된 검체는 WESTERN BLOT등 확인검사를 통해 최종 판정한다.