제네디아에취비에스에이지알피에취에이(Genedia HBsAg RPHA) - 의약품 상세정보

검체는 혈청을 사용한다.

단, 검체에 적혈구나 고형성분등이 함유되어 있을때는 원심분리하여 고형성분을 완전히 제거한 후 사용하여야 하고, 미생물이 심하게 오염된 검체는 사용하지 말아야 한다.

또한, 혈청분리 후 1주일 이상 보관 필요시에는 -20℃ 이하에 보관하며 1주일이내에 사용할 경우에는 2～8℃에 보관한다.

가. 개봉된 시약의 보관조건 및 보존기간

가. 정성시험방법

1) 본 시험은 96well 가로줄 1～12, 세로줄 A-H로 표시된 첨부된 V형 Microplate를 사용하여 시험한다.

2) 첨부된 Dropper로 검체희석액(3번병)을 1열의 well(1A-1H)에 4방울 (100ul), 2(2A-2H), 3(3A-3H), 4(4A-4H)열의 well에 각각 1방울 (25ul)씩 떨어뜨린다. 검체수에 따라 다른 열의 well도 동일한 요령으로 준비한다. 양성대조액과 검체를 1열의 각 well에 각각 25ul씩 넣는다. 단, 음성대조용으로 검체희석액을 사용한다.

3) 25ul로 조절된 Multi-Micropipet를 이용하여 1열의 내용물을 잘 희석한 다음 1열 well의 희석된 액을 25ul를 취하여 2열 well에 넣고 잘 희석 한다.

4) 다시 2열 well의 용액 25ul를 취하여 3)과 동일한 방법으로 3열 well을 희석하고 3열 well에서 25ul를 취하여 4열 well에 넣고 잘 희석한후 25ul를 취하여 버린다.

5) 감작혈구는 떨어뜨리기 전에 충분히 혼합하여 균질하게 한다. 특히 용기 바닥이나 뚜껑 부위에 침적된 혈구를 완전히 부유한다.

6) 첨부된 Dropper로 4열 well에 감작혈구(1번병)를 1방울씩 넣는다.(감작 혈구는 떨어뜨리기 직전에도 충분히 혼합하여 균질하게 만들어 떨어뜨 려야 하며, Dropper는 검체희석액용, 감작혈구용 각각 구분하여 사용하 고 혼용하여 사용하지 말아야 한다.)

7) Plate를 Microplate Mixer로 20초간 교반시켜 혈청희석액과 혈구액이 충분히 혼합되어야 한다. 이때 well의 내용물이 서로 혼입되거나 튀지 않도록 한다.

8) Plate를 실온에서 120분간 정치시킨 후 응집상을 관찰하여 판정하며 판 정하기 어려운 검체는 16시간 이상 정치한 후 최종 판정한다. 이때 Plate는 윗부분을 덮어두어 수분 증발을 방지하며 충격을 가하지 않는 다.

1) 첨부된 Dropper로 검체희석액(3번병)을 1열의 well(1A-1H)에 2방울 (50ul), 2(2A-2H), 3(3A-3H)열의 well에 1방울(25ul)씩 떨어뜨린다. 검 체수에 따라 다른 열의 well도 동일한 요령으로 준비한다. 양성대조액과 검체를 Micropipet를 이용하여 1열의 각 well에 각각 5ul씩 넣는다. 단, 음성대조용으로 검체희석액을 사용한다.

2) 25ul로 조절된 Multi-Micropipet를 이용하여 1열의 내용물질을 잘 희석 한 다음 1열 well의 희석된 액을 25ul를 취하여 2열 well에 넣고 잘 희 석한다.

3) 다시 2열 well의 용액 25ul를 취하여 3열 well에서 완전히 혼합한 후 25ul를 취하여 버린다.

4) 이하 조작은 4wells 사용법에 준한다.

나. 정량시험방법

1) 본 시험은 96well 가로줄 1-12, 세로줄 A-H로 표시된 첨부된 V형 Microplate를 사용하여 시험한다.

2)첨부된 Dropper로 검체희석액(3번병)을 1열의 well(1A)에 4방울(100ul), 2열(2A)부터 12열(12A)까지의 well에 각각 1방울(25ul)씩 떨어뜨린다. 검체수에 따라 다른 열의 well도 동일한 요령으로 준비한다.

3) 양성대조액과 검체를 Micropipet를 이용하여 1열의 각 well에 각각 25ul씩 넣는다. 단, 검체희석액을 음성대조액으로 사용한다.

4) 25ul로 조절된 Multi-Micropipet를 이용하여 1열의 내용물을 잘 희석한 다음 1열 well의 희석된 액을 25ul를 취하여 2열 well 넣고 잘 희석한 다.

5) 다시 2열 well의 용액 25ul를 취하여 4)와 동일한 방법으로 3열부터 12 열까지 희석하고 12열 well에서 25ul를 취하여 제거한다.

6) 감작혈구는 떨어뜨리기 전에 충분히 혼합하여 균질하게 한다. 특히 용기 바닥이나 뚜껑 부위에 침적된 혈구를 완전히 부유한다.

7) 첨부된 Dropper로 4열부터 12열까지 감작혈구(1번병)를 1방울씩 넣는 다.(감작혈구는 떨어뜨리기 직전에도 충분히 혼합하여 균질하게 만들어 떨어뜨려야 하며, Dropper는 검체희석액용, 감작혈구용으로 각각 구분 하여 사용하고 혼용하여 사용하지 말아야 한다.)

8) Plate를 Microplate Mixer로 20초간 교반시켜 혈청희석액과 혈구액이 충분히 혼합되어야 한다. 이때 well의 내용물이 서로 혼입되거나 튀지 않도록 한다.

9) Plate를 실온에서 120분간 정치시킨 후 응집상을 관찰하여 판정하며 판 정하기 어려운 검체는 16시간 이상 정치한 후 최종 판정한다. 이때 Plate는 윗부분을 덮어두어 수분 증발을 방치하며 충격을 가하지 않는 다.

양성대조액은 감작혈구와는 응집이 일어나며 음성대조액(검체희석액)에서는 감작혈구 응집이 일어나지 않으면 실험이 잘된 것으로 인정한다.

1) 응집상 판정법

2) 정성검사 판정

가. 감작혈구에서 응집이 일어나지 않으면 음성으로 판정한다.

나. 감작혈구에서 응집이 일어나면 양성으로 판정한다.

다. 정성검사에서 HBsAg와 Anti-HBs가 동시에 양성인 경우나 RPHA법으로 양성인 검체를 확인하고자 할때는 흡수조작 과정을 거친 후 재검사 한다.

3) 정량검사 판정

응집판정 방법은 정성시험과 동일한 방법으로 판정하며 양성으로 판정 되는 최종희석배율을 항원가로 한다.

4) 판정시 주의사항

1차 검사에서 양성으로 판정된 경우 재검사하여 재검결과를 최종결과로 한다.

1) 흡수혈구액을 완전히 부유시키고 첨부된 Dropper로 4방울(100ul)을 시 험관에 떨어뜨리고 검체 25ul를 넣고 잘 혼합한다.(검체 5배 희석)

2) 흡수혈구와 혈청 혼합액을 실온에서 30분간 반응시킨다. (단, 10분 간격 으로 잘 흔들어 준다.)

3) 2500rpm에서 5분간 원심분리한다.

4) 1-A well, 2-A well, 3-A well에 검체희석액을 각각 25ul씩 넣고 1-A well에는 흡수조작된 원심 상청액을 25ul를 넣는다.

5) 25ul로 조절된 Multi-Micropipet를 이용하여 1-A well의 내용물을 잘 희석한 다음 1-A well의 희석된 액을 25ul를 취하여 2-A well에 넣고 잘 희석한다.

6) 다시 2-A well의 용액 25ul를 취하여 3-A well 넣고 완전히 혼합한 후 25ul를 취하여 버린다.

7) 3-A well에 완전히 부유된 감작혈구를 1방울 떨어뜨린다.

8) 이하 조작은 정성시험법에 준하여 실시한다.

1) 정성 검사시

2) 정량 검사시

1) 사용한 플레이트는 결과 판독 후 즉시 유효염소함유량이 0.5%이상인 용 액(예, 유한락스 약 8배 희석액)에 16시간이상 완전히 침적시킨다.

2) 흐르는 세척수로 소독액 성분과 반응잔액을 완전히 세척한 후 증류수로 2회 세척한다.

3) 37℃ 건조 항온기에서 수분을 완전히 건조한 후 실험에 사용한다.

4) 플레이트의 사용은 총 3회를 넘지 않도록 한다.