제네디아티피에취에이(Genedia TPHA) - 의약품 상세정보

A. MICRO METHOD

1. 시약의 조제

시험 시작 15～30분 전에 흡수용해액(4번병)을 건조 매독 항원 감작 적혈구(1번병)에는 5㎖, 건조 대조 적혈구(2번병)에는 3㎖을 가해 완전히 용해시킨다. (이 용액은 7일간 안정한다.)

2. 시험방법

가. 정성 시험 방법

1) 본 시험은 96well에 가로줄 1～12, 세로줄 A-H로 표시된 U형 바닥 Microplate를 사용한다.

2) Dropper로 용해액(4번병)을 1-A well에 25ul, 2-A well에 100ul, 3-A well, 4-A well, 5-A well에 각각 25ul씩 떨어뜨린다.

3) 25ul로 조정된 피펫으로 검사하고자 하는 혈청 25ul를 취하여 1-A well에 넣는다.

4) 피펫으로 잘 희석한 다음 1-A well의 용액 25ul를 취하여 2-A well에 넣고 잘 섞는다.

5) 2-A well의 용액을 3-A well 및 4-A well에 각각 25ul를 넣고 잘 섞는다.

6) 3-A well의 용액 25ul를 제거한 다음 4-A well의 용액 25ul를 취하여 5-A well에 넣고 잘 섞는다.

7) 5-A well의 용액 25ul를 제거한 다음 실온에서 20～30분간 Incubation 시킨다.

8) Dropper로 3-A well에 용해된 대조 적혈구액 75ul을 4-A well, 5-A well에 용해된 매독 항원 감작 면양 적혈구액 75ul씩을 떨어뜨린다.

9) 대조용 양성 혈청과 용해액에 대한 응집 반응 시험도 위 검체와 같은 방법으로 실시한다.

10) 이 Microplate를 Micromixer로 약 10초간 진탕한 후 실온에서 2～3시간 정치시킨 다음 응집상을 관찰하여 1차 판독한 후 Overnignt 시켜 최종 판독한다.(단, 정치시 Microplate의 상면을 덮어 두며 충격을 가하지 않는다.)

나. 정량 시험 방법

1) Microplate에 용해액을 Dropper로 1-A well에 25ul, 2-A well에 100ul, 3-A well부터 최종 well까지(8-A well 이상)까지 25ul씩을 떨어뜨린다.

2) 25ul로 조정된 피펫으로 검사하고자 하는 혈청 25ul를 1-A well에 넣는다.

3) 피펫으로 잘 희석한 다음 1-A well의 용액 25ul를 취하여 2-A well에 넣고 잘 섞는다.

4) 2-A well의 용액을 3-A well 및 4-A well에 각각 25ul를 넣고 잘 섞는다.

5) 3-A well의 용액 25ul를 제거한 다음 4-A well의 용액 25ul를 취하여 5-A well에 넣고 최종 well까지 2ⁿ배 단계 희석한다.

6) 최종 well의 용액 25ul를 제거한 다음 실온에서 20～30분간 Incubation 시킨다.

7) Dropper로 3-A well에 용해된 대조적혈구액 75ul을 4-A well로부터 최종 well까지는 용해된 매독항원 감작 면양적혈구액 75ul씩을 떨어뜨린다.

8) 이하의 조작은 정성시험법과 동일하게 실시한다.

3. 정도관리

대조용 양성혈청에서는 4-A well 및 5-A well에서 응집이 일어나고 용해액에서는 응집이 일어나지 않으면 실험이 잘된 것으로 인정한다.

4. 결과 판정

가. 정성 시험 판정방법

1) 음성 : 대조적혈구 및 매독 항원 감작 면양 적혈구액에서 응집이 일어나지 않으면 음성으로 판정한다.

2) 양성 : 대조적혈구액에서는 응집이 일어나지 않고 매독항원 감작 적혈구에서 응집가가 혈청희석 배율 80배 이상이면 양성으로 판정한다.

나. 정량 시험 판정방법

대조적혈구액을 넣은 well에서 응집이 일어나지 않고 매독항원 감작 면양적혈구액을 넣은 well에서 응집상이 보이는 경우는 응집상이 인정되는 최종 혈청희석 배율을 항체가로 한다.

* 판정이 어려운 검체의 처리 (판정 보류 검체)

정성시험 결과 판정시 결과가 양성이나 음성으로 판정하기 어려운 검체는 아래와 같이 실험을 실시하여 결과를 판정한다.

1) Microplate에 용해액을 Dropper로 1-A well에 100㎕, 2-A well 및 3-A well에 각각 25㎕씩을 떨어뜨린다.

2) 25㎕로 조정된 피펫으로 검사하고자 하는 혈청 25㎕를 1-A well에 넣는다.

3) 피펫으로 잘 희석한 다음 1-A well의 용액 25㎕를 취하여 2-A well에 넣고 잘 섞는다.

4) 2-A well의 용액을 3-A well에 25㎕를 넣고 잘 섞는다.

5) 3-A well 용액 25㎕를 제거한 다음 실온에서 20～30분간 Incubation 시킨다.

6) Dropper로 용해된 매독항원 감작 면양 적혈구액 75㎕를 2-A well 및 3-A well에 넣는다.

7) 이 Microplate를 Micromixer로 약 10초간 진탕한 후 실온에서 2～3시간 정치시킨 다음 응집상을 관찰하여 1차 판독한 후 Overnight 시켜 최종 판독한다. (단, 정치시 Microplate의 상면을 덮어두며 충격을 가하지 않는다.)

8) 2-A well에서 약한 응집상을 나타내고 3-A well에서 양성이나 음성으로 판정을 내리기 어려운 검체는 음성으로 판정하고 2-A well에서 강한 응집상을 나타내고 3-A well에서 약한 응집상을 나타낸 검체는 매우 약한 양성(Very weakly Positive)으로 판정한다.

* 혈청 희석 배율

가. 정성시험

나. 정량시험

B. MACRO METHOD

1. 시약의 조제

시험시작 15～30분 전에 흡수용해액(4번병)을 건조 매독 항원 감작 적혈구(1번병)에는 0.8㎖, 건조 대조 적혈구(2번병)에는 0.5㎖을 가해 완전히 용해시킨다. (이 용액은 7일간 안정하다.)

2. 시험방법

가. 정성시험방법

1) 본 시험은 HA Tray를 사용하여 실험하는 Macro method이다.

2) 미리 소 시험관을 준비하여 흡수 용해액(4번병)을 1번 시험관에는 0.95㎖, 2번 시험관에는 1.2㎖, 3번 시험관에는 0.4㎖을 각각 넣는다.

3) 1번 시험관에 검체를 0.05㎖를 넣고 잘 섞는다.

4) 1번 시험관의 용액 0.4㎖를 취해 2번 시험관에 넣고 잘 섞는다.

5) 2번 시험관의 용액 0.4㎖를 취해 3번 시험관에 넣고 잘 섞는다.

6) 실온에서 30분～1시간 동안 정치시킨다.

7) 2번 시험관의 용액을 HA Tray의 첫 번째, 두 번째 Hole에 각각 0.5㎖를 넣는다.

8) 3번 시험관의 용액을 HA Tray의 세 번째 Hole에 0.5㎖를 넣는다.

9) 첨부된 Dropper를 사용하여 첫 번째 Hole에는 대조 적혈구액 2방울(0.05㎖), 두 번째, 세 번째 Hole에는 용해된 매독항원 감작 면양 적혈구액 2방울(0.05㎖)를 넣는다.

10) HA Tray를 잘 흔들어서 내용물을 충분히 혼합한다.

11) 대조용 양성 혈청과 용해액에 대한 응집 반응 시험도 위 검체와 같은 방법으로 실시한다.

12) HA Tray에 뚜껑을 덮어서 실온에서 3～4시간 정치 시킨다음 응집상을 관찰하여 1차 판독한 후 Overnight 시켜 최종 판독한다. (단 정치시 충격을 가하지 않는다.)

나. 정량 시험 방법

1) 본 시험은 HA Tray를 사용하여 실험하는 Macro method이다.

2) 미리 소 시험관을 준비하여 흡수 용해액(4번병)을 1번 시험관에는 0.95㎖, 2번 시험관에는 1.2㎖, 3번 시험관부터 최종 시험관(8번 시험관이상)까지는 0.9㎖을 넣는다.

3) 1번 시험관에 검체를 0.05㎖를 넣고 잘 섞는다.

4) 1번 시험관의 용액 0.4㎖를 취해 2번 시험관에 넣고 잘 섞는다.

5) 2번 시험관의 용액 0.3㎖를 취해 3번 시험관에 넣고 잘 섞는다. 이와같은 방법으로 최종 시험관까지 4ⁿ배 단계 희석한다.

6) 실온에서 30분～1시간동안 정치 시킨다.

7) 2번 시험관의 용액을 HA Tray의 첫 번째, 두 번째 Hole에 각각 0.5㎖씩 넣는다.

8) 3번 시험관부터 최종 시험관까지 시험관의 용액을 HA Tray의 Hole에 각각 0.5㎖씩 넣는다.

9) 첨부된 Dropper를 사용하여 첫 번째 Hole에는 대조 적혈구액 2방울(0.05㎖), 두 번째부터 최종 Hole 까지는 용해된 매독 항원 감작 면양 적혈구액 2방울(0.05㎖)을 넣는다.

10) 이하의 조작은 정성 시험법과 동일하게 실시한다.

3. 정도관리

대조용 양성혈청에서는 2번 및 3번 Hole에서 응집이 일어나고 용해액에서는 응집이 일어나지 않으면 실험이 잘된 것으로 인정한다.

4. 결과 판정

가. 정성 시험 판정방법

1) 음성 : 대조적혈구 및 매독 항원 감작 면양 적혈구액에서 응집이 일어나지 않으면 음성으로 판정한다.

2) 양성 : 대조적혈구액에서는 응집이 일어나지 않고 매독항원 감작 적혈구에서 응집가가 혈청희석 배율 80배 이상이면 양성으로 판정한다.

나. 정량 시험 판정방법

대조적혈구액을 넣은 Hole에서 응집이 일어나지 않고 매독항원 감작 면양적혈구액을 넣은 Hole에서 응집상이 보이는 경우는 응집상이 인정되는 최종 혈청희석 배율을 항체가로 한다.

* 판정이 어려운 검체의 처리 (판정 보류 검체)

정성시험 결과 판정시 결과가 양성이나 음성으로 판정하기 어려운 검체는 아래와 같이 실험을 실시하여 결과를 판정한다.

1) 1번 및 2번 시험관에 흡수 용해액을 각각 0.95㎖, 0.4㎖을 넣는다.

2) 1번 시험관에 검체를 0.05㎖를 넣고 혼합한다.

3) 1번 시험관 용액 0.4㎖를 2번 시험관에 넣고 잘 혼합한 다음 실온에서 30분～1시간 동안 정치시킨다.

4) 1번 시험관의 용액 0.5㎖를 취해 HA Tray의 첫 번째 Hole에 넣는다.

5) 2번 시험관의 용액 0.5㎖를 취해 HA Tray의 두 번째 Hole에 넣는다.

6) 첨부된 Dropper를 사용하여 1번 및 2번 Hole에 매독항원 감작 면양 적혈구액 2방울(0.05㎖)을 넣는다.

7) HA Tray를 약 10초간 흔들어 충분히 혼합하여 실온에서 3～4시간 정치시킨 다음 응집상을 관찰하여 1차 판독한 후 Overnight 시켜 최종 판독한다. (단, 정치시 HA Tray의 상면을 덮어두며 충격을 가하지 않는다.)

8) 1번 Hole에서 약한 응집상을 나타내고 2번 Hole에서 양성이나 음성으로 판정을 내리기 어려운 검체는 음성으로 판정하고 1번 Hole에서 강한 응집상을 나타내고 2번 Hole에서 약한 응집상을 나타낸 검체는 매우 약한 양성 (Very Weakly Positive)으로 판정한다.

* 혈청 희석 배율

가. 정성시험

나. 정량 시험

* 응집가 판독 및 판정법