제네디아안티에취비씨엘리자플러스 - 의약품 상세정보

1) 혈장 또는 혈청을 검체로 사용하며, 혈구나 혈액 응고 성분 등의 고형물을 원심분리하여 완전히 제거한다.

2) 검체내에 Horse radish peroxidase의 활성을 저해하는 물질(예:보존제 질화나트륨)이 함유되어 있을 경우에는 위양성을 보일수 있으니 주의한다.

1) 모든 시약은 실험시작 15 - 30분전에 실온에 둔다.

2) 밀봉된 항원 흡착 플레이트를 꺼내어 필요한 만큼의 Strip을 꺼내고 보관하고자 하는 Strip은 Frame에서 빼내어 첨부된 은박포에 실리카겔과 함께 넣어 2 ~ 8℃에 보관한다. 이때 보관중인 비닐포내에 습기가 들어가면 항원 역가의 저하를 일으킬 수 있으니 주의한다.

3) 세척액의 조제

농축세척액을 증류수나 이온정제수로 20배 희석하여 필요한 양만큼 준비한다. [필요한 세척액양이 200㎖일 경우 농축세척액 10㎖에 증류수나 이온정제수 190㎖을 넣어 총부피가 200㎖이 되도록 한 다음 잘 섞는다.]

농축세척액은 냉장보관 상태에서 결정이 생길 수도 있다. 이 경우에는 37℃ 항온수조에서 녹인 다음 사용한다.

4) 접합체액의 조제

사용하기 10분전에 농축접합체액을 접합체희석액으로 1:100(101배희석)의 비율로 필요한 양만큼 희석한다. [실험시 1 Strip (8 well)당 농축접합체액 10 ㎕에 접합체희석액 1 ml를 혼합하여 조제한다.]

* 접합체희석액은 침전이 있을 수 있으니 충분히 혼합하여 사용한다.

5) 기질액의 조제

기질액은 사용하기 10분전에 기질액과 기질용완충액을 1:100(101배)의 비율로 혼합하여 사용한다. [실험시 1 Strip (8wells)당 기질액 10㎕에 기질용완충액 1 ㎖을 혼합하여 조제한다.] 혼합된 기질은 직사광선을 피하여 보관한다.

* 기질액은 냉장에서 얼어 있으니 반드시 37℃ 수조에서 녹여 균질화 한 후 사용하여야 한다. (기질액의 융점 18℃)

* 차광하여 보관한다.

1) 시험에 필요한 양 만큼 Strip을 꺼내어 Frame에 고정시킨다.

2) 농축접합체액을 접합체희석액으로 1:100(101배)의 비율로 필요한 양만큼 혼합하여 접합체액을 제조한다.

3) 플레이트의 1A, 1B, 1C well에 음성대조액 50㎕, 1D, 1E well에 양성대조액 50㎕, 나머지 각 well에 검체를 각각 50㎕씩 차례대로 넣는다.

4) 조제한 접합체액을 각 well에 100㎕씩 넣고 Frame을 microplate shaker로 교반하여 잘 혼합한 다음 항온 항습기(37±1℃)에서 60분간 반응시킨다.

5) 4)번 반응이 끝나기 5-10분전에 기질액을 기질용완충액으로 1:100(101배)의 비율로 필요한 양만큼 혼합하여 기질용액을 제조한다.

6) 각 well의 내용물을 흡입해 내고 세척액으로 5회 세척한다. (1회:300㎕이상/well)

7) 세척된 플레이트를 흡습지에 뒤집어 강하게 쳐서 남아있는 세척액을 완전히 제거한 다음 5)번에서 조제한 기질용액을 각 well에 100㎕씩 넣고 Frame을 가볍게 쳐서 잘 혼합한 다음 실온에서 30분간 반응시킨다.

8) 반응정지액을 100㎕씩 각 well에 넣어 반응을 정지하고 잘 흔들어 청색이 노랑색으로 완전히 변하게 한다.

9) 공기를 맹검으로 하고 (Air blank) 음성대조액, 양성대조액 및 검체의 흡광도를 측정한다.

흡광도의 측정은 측정파장 450nm, 참조파장 620nm로 한다.

흡광도는 반응정지액을 넣은 후 30분 이내에 측정한다.

음성대조액의 흡광도 평균값이 1.000 이상이어야 하며 양성대조액의 흡광도 평균값이 0.200 이하이어야 한다.

만약 이 기준에 적합하지 않을 경우에는 실험 기술상의 문제나 시약의 변질로 인한 것으로 생각되므로 그 원인을 확인하여 다시 실험을 실시한다.

1) 음성 및 양성 대조액의 흡광도 평균값 계산

예) 음성대조액 1의 흡광도 1.850

음성대조액 2의 흡광도 1.800

음성대조액 3의 흡광도 1.840

NCX = (1.850+1.800+1.840) / 3 = 1.830

예) 양성대조액 1의 흡광도 0.050

양성대조액 2의 흡광도 0.060

PCX = (0.050+0.060) / 2 = 0.055

2) 판정기준값의 계산

(NCX + PCX) / 2 = (1.830 + 0.055) / 2 = 0.943

3) 판정기준값 보다 높은 검체는 음성으로 판정하고 판정기준값 보다 낮거나 같은 검체는 양성으로 판정한다.