제네디아한탄항체이아이에이 - 의약품 상세정보

1) 모든 시약은 사용하기 10 ～ 15분 전에 꺼내 실온에 둔다.

2) 검체의 처리

검체는 가급적 용혈되지 않게 준비하고 육안으로 관찰되는 입자형 부유물등은 원심분리하여 제거한다.

3) 밀봉된 한탄바이러스 항원 흡착 플레이트를 꺼내어 실험에 필요한 양만큼의 Strip을 제외하고 나머지 Strip은 Frame에서 빼내어 첨부된 비닐포에 실리카겔과 함께 넣어 2 ～ 8℃ 냉암소에 보관한다.

4) 세척액의 조제

필요한 만큼의 농축세척액(6번병)을 증류수나 이온정제수로 20배 희석하여 준비한다. (필요한 세척액이 200㎖일 경우 농축세척액 10㎖에 증류수나 이온정제수 190㎖을 넣어 총부피가 200㎖이 되도록 한 다음 잘 섞는다.)

* 농축세척액은 냉장보관상태에서 결정이 생길 수도 있다. 이 경우에는 37℃ 항온수조에서 녹인 다음 사용한다.

5) 효소표지항체액의 조제

효소표지항체액은 사용하기 10분 전에 농축 효소표지항체액(2번병)을 희석액(5번병)으로 필요한 양만큼 1:100의 비율로 희석하여 조제한다.

(2 Strip(16 wells)당 농축 효소표지항체액 20㎕에 희석액 2㎖을 혼합하여 조제한다.)

6) 기질액의 조제

기질액은 사용하기 5-10 분 전에 기질액(7번병)과 기질용 완충액(8번병)을 1:100의 비율로 혼합하여 조제하며, 직사광선을 피하여 보관한다.

(2 Strip(16 wells)당 기질액 20㎕에 기질용완충액 2㎖를 혼합하여 조제한다.)

* 기질액은 18℃이하에서 얼어 고체상태로 있으니 완전하게 용해하여 사용한다.

가. 조제된 시약의 보관조건 및 보존기간

나. 개봉된 시약의 보관조건 및 보존기간

1) 시험관에 음성대조액(3번병), 양성대조액(4번병) 및 검체를 각각 10㎕씩 넣고 여기에 희석액을 각각 500㎕씩 가한 후 충분히 혼합한다.

2) 시험에 필요한 양 만큼의 Strip을 꺼내어 Frame에 고정시킨다.

3) 플레이트의 1A, 1B, 1C well에는 희석된 음성대조액을 1D, 1E well에는 희석된 양성대조액을 각각 100㎕씩 차례대로 넣고 나머지 각 well에는 희석된 검체를 100㎕씩 차례대로 넣는다.

4) 플레이트를 첨부된 sealer로 밀봉한 후 37±1℃에서 30분간 반응시킨다.

5) 4)번 반응이 끝나기 5-10분 전에 농축효소표지항체액(2번병)과 희석액(5번병)을 1:100의 비율로 필요한 양 만큼 혼합하여 접합체액을 조제한다.

6) 각 well의 내용물을 모두 흡인해내고 세척액으로 5회 세척한다. (1회에 각 well당 250㎕ 이상)

7) 세척된 플레이트를 흡습지에 뒤집어 강하게 쳐서 남아있는 세척액을 완전히 제거한다음 5)번에서 조제한 접합체액을 각 well에 100㎕씩 넣고 frame을 가볍게 쳐서 잘 혼합한다.

8) 플레이트를 첨부된 sealer로 밀봉한 후 37±1℃에서 30분간 반응시킨다.

9) 8)번 반응이 끝나기 5-10분 전에 기질액(7번병)과 기질용 완충액(8번병)을 1:100의 비율로 필요한 양 만큼 혼합하여 기질액을 조제한다.

10) 6)항과 동일한 방법으로 5회 세척한다.

11) 세척된 플레이트를 흡습지에 뒤집어 강하게 쳐서 남아있는 세척액을 완전히 제거한 다음 9)번에서 조제한 기질액을 각 well에 100㎕씩 넣고 frame을 가볍게 쳐서 잘 혼합한다.

12) 직사광선을 피하여 실온에서 30분간 반응시킨다.

13) 각 well에 반응정지액(9번병)을 100㎕씩 넣어 반응을 정지시킨 후 가볍게 쳐서 잘 혼합한다.

14) 공기를 맹검으로 하고(Air blank) 대조액 및 검체의 흡광도를 측정한다.

흡광도를 반응정지액을 넣은 후 30분 이내에 450nm 파장에서 측정하며 참조파장은 620nm로 한다.

음성대조액의 흡광도 평균값은 0.000 이상 0.250 이하이어야 하며, 양성대조액 흡광도 평균값은 1.200 이상 3.000 이하이어야 한다.

만약 이 기준에 적합하지 않을 경우에는 실험 기술상의 문제나 시약의 변질로 인한 것으로 생각되므로 그 원인을 확인하여 다시 시험을 실시한다.

1) 판정기준치(Cut off Value) 산출

3 wells 음성대조액 흡광도값의 평균값(NCx)을 계산하고, 이 평균값에 0.3을 더한 값을 판정기준치로 한다. 즉,

판정기준치 = NCx + 0.300

단, 각 음성대조액의 흡광도는 평균 흡광도값의 0.5배 이상 1.5배 이하의 범위에 있어야 한다. 만약 한 개의 값이 이 범위를 벗어나면 나머지 두 개의 값으로 평균값을 계산하고, 두 개 이상의 값이 범위를 벗어나면 재검사를 실시한다.

2) 판정

판정기준치 이상의 흡광도를 갖는 검체는 양성으로 판정하고, 이 값 미만인 검체는 음성으로 판정한다.

3) 판정상 주의사항

본 시약으로 한탄바이러스에 대한 항체 양성으로 확인된 경우, 한탄바이러스에 대한 IgG 양성으로 예방주사 접종자, 불현성 감염이나 현증감염 등의 기왕력자, 한탄바이러스 현증감염환자 모두에서 나타날 수 있다. 따라서 본 시약을 한탄바이러스 현증감염자 검색용으로 사용할 경우에는 환자의 임상증상이나 과거력 등을 참고하여야 하며, 한탄바이러스에 대한 IgM의 확인이 현증환자의 결정적 진단지표일 수 있다.