엘지에취비에스에이지컨펌 - 의약품 상세정보

(1) 본 시험에서는 혈청 또는 혈장 모두 사용가능하며, 혈구나 혈액응고성분 등의 고형물은 가능한 한 빨리 원심분리하여 완전히 제거 합니다.

(2) 검체 채취시 넣어주는 전형적인 항응고제 (EDTA, citrate, 해파린)는 본 검사법을 방해하지 않습니다.

(3) 과산화효소의 활성을 저해하는 물질 (예 ; 보존제로 쓰이는 질화나트륨 NaN₃) 을 함유하고 있는 검체는 ELISA 검사에서 위음성이 나올 수 있으므로 사용하지 말아야 합니다.

(4) 검체를 단기간(2주이내)보관할 경우는 2-8℃에서 냉장보관하고, 장기보관시는 -15℃이하로 냉동보관합니다.

(5) 용혈이 심하거나 미생물에 오염된 검체의 경우는 부정확한 결과를 나타낼 수 있으니 주의하십시오.

(1) 보든 시약은 2-8℃에서 보관하며 유효기간 이내에 사용하여야 합니다.

(2) 모든 시약은 사용시 실온(15-30℃)이어야 하며 사용 직후 냉장보관하여야 합니다. 개봉된 시약의 보관조건 및 보존기간은 다음과 같습니다.

(1) 검사를 시작하기 약 30분전에 검체 및 진단시약들을 상온에 방치시켜 상온으로 맞춰준 후에 사용하십시오.

(2) 검사에 사용할 수량의 시험관 또는 1.5ml 튜브를 준비합니다.[(확인검사할 검체수 x 2) +2]. 준비된 시험관 또는 튜브를 대조혈청용과 중화제용의 두 그룹으로 나누어 놓습니다.

(3) LG HBsAg ELISA 에 포함된 양성표준시료 및 확인검사하려는 검체들을 대조혈청용 시험관과 중화제용 시험관에 각각 분주합니다. 한 시험관당 양성표준시료는 250ul, 확인 검사용 검체는 150ul씩 분주하게 되므로 1회의 확인검사시 양성표준시료는 총 500ul, 검체들은 각 300ul 가 필요합니다.

(4) 대조혈청용 시험관들에 시료부피의 10%가 되는 양( 양성 표준시료 시험관: 25ul 확인 검체 시험관 : 15ul )의 대조혈청을 첨가하고, 중화제용 시험관들에는 시료부피의 10%가 되는 양( 양성표준시료 시험관 : 25ul, 확인 검체시험관들에는 시료부피의 10%가 되는 양 (양성표준시료 시험관 : 25ul, 확인 검체 시험관 : 15ul ) 의 중화제를 첨가합니다. 이 때 각 시험관간에 교차 오염이 되지 않도록 주의합니다.

(5) 위의 시험관 또는 튜브의 입구를 잘 밀봉하고 교반기로 완전히 섞은 후 37℃에서 30분간 반응시킵니다.

(6) 위와 같이 처리된 검사들을 LG HBsAg ELISA 를 사용하여 검사합니다. 이 때 검사에 필요한 웰 수와 위치의 결정은 다음과 같이 합니다.

플레이트의 1A : 기질 Blank

1B, 1C, 1D 웰 : 음성 표준시료, 각 100ul

1E, 1F 웰 : 위의 대조혈청으로 처리된 양성표준시료, 각 100ul

1G, 1H 웰 : 위의 중화제로 처리된 양성표준시료, 각 100ul

나머지 웰에는 위의 대조혈청과 중화제로 처리된 확인검체들을 각각 100ul 씩 차례로 넣습니다.

이후의 검사방법은 LG HBsAg ELISA 사용설명서에 기재된 진단방법과 주의사항에 따라 행합니다. 자세한 내용은 LG HBsAg ELISA 사용설명서를 참조하시기 바라며 요약적인 순서는 다음과 같습니다.

① 표준시료 및 검체가 각 웰에 분주된 후 기질 Blank를 제외한 각 웰들에 효소표지항체 용액을 25ul 씩 조심스럽게 분주합니다.

② 조심스럽게 플레이트를 흔들어 섞은 후 밀봉하고 37℃에서 90분 동안 반응시킵니다.

③ 반응 후 모든 웰의 내용물을 흡인한 후 조제된 세척액으로 5회 세척합니다.

④ 미리 조제된 기질용액을 기질 Blank 를 포함한 모든 웰에 100ul 씩 분주합니다.

⑤ 실온, 암소에서 30분 동안 발색시킵니다.

⑥ 반응정지액을 모든 웰에 100ul 씩 분주한 후 450mm 를 측정파장으로 하고 620~650mm 를 보조하장으로 하여 흡광도를 측정합니다.

(1) 음성 표준시료의 흡광도 평균값은 0.000~0.10 사이이어야 하며, 대조혈청으로 처리된 양성표준시료의 흡광도 평균값은 0.6 ~ 2.0 사이이어야 합니다.

(2) 중화제로 처리된 양성표준시료의 흡광도는 대조혈청으로 처리된 양성표준시료 흡광도의 50% 이하이어야 합니다.

(3) 기타 다른 정도관리사항은 LG HBsAg ELISA 의 사용설명서를 참조하고 그에 준하여 판단합니다.

(1) 확인 : 검체의 중화율의 계산

중화율(%) = 100 - [(B ÷ A) × 100]

• A : 대조혈청을 처리한 검체의 흡광도

• B : 중화제를 처리한 검체의 흡광도

(2) 결과의 해석 및 판정

① 중화율이 50% 이상일 때는 진양성으로 판정하고 50% 미만일 경우에는 검체를 1000배 희석한 후에 재검사 합니다. 1000배 희석시에는 검체를 생리 식염수로 100배 희석한 후 대조혈청으로 다시 10배 희석하여 위의 검사방법에 따라 재검사 합니다.

② 1000배 희석 후 재검사에서 중화율이 50% 이상일때는 진양성으로 판정하고 50% 미만일 경우는 위양성으로 판정합니다. 또한 원액에서의 중화율이 50% 미만이며 1000배 희석한 재검사시 중화제와 대조혈청을 처리한 검체 모두에서 LG HBsAg ELISA 기준으로 음성결과( 판정기준치 미만) 가 나오면 위양성으로 판정 합니다.

<예>

A. 원액 검사시, ELISA 판정기준치 = 0.062 의 경우

* 검체 3: 확인시작 적용전의 LG HBsAg ELISA검사에서 ELISA 판정기준치

이상의 흡광도를 보인 시료(판정기준치: 0.064, 시료흡광도: 0.065)

B. 1000배 희석 재검시 ELISA 판정기준치 = 0.061의 경우