| 성상 | 청색의 균 현탁액 |
|---|---|
| 업체명 | 아산제약(주) |
| 전문/일반 | 전문의약품 |
| 허가일 | 2001-12-21 |
| 품목기준코드 | 200101210 |
| 표준코드 | 8806488002107, 8806488002114 |
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혈청 중의 Salmonella O antigen group D 의 항체 검사용
1. 측정법의 원리
"Febrile Antigen"은 인간에게 열성 질환을 일으키는 병원성 미생물로 Salmonella, Brucella, Francisella, Leptospira 등이 대표적이다. 미생물이 체내에 들어갔을 때 신체는 항체생성을 통해 항원자극에 반응한다. 항체는 질병의 초기 단계에서는 매우 느리게 생성되나 생성된 항체의 역가나 농도는 곧 최대수준에 이르게 되고 이후에는 매우 낮은 수준 혹은 검출되지 않은 수준까지 떨어지게 된다. 따라서 생성된 항체의 역가는 동종의 항원성 시약을 사용하여 정성, 정량적으로 측정될 수 있다.
Grunbaum과 Widal은 다양한 Salmonella O 항원과 H 항원을 사용하여 Typhoid fever를 가지는 환자의 혈청에서 응집반응을 정량적으로 측정하는 방법을 도입하였으며, 이러한 응집법은 일반적으로 Widal test로 알려져 있다.
Salmonella H antigen d는 Salmonella라고 하는 국제적으로 승인된 균주를 화학적으로 비동화시키고 사멸시킨 현탁액이다. 이 현탁액은 어떤 열성 질환 상태를 의미하는 항체를 검출하는 slide 및 tube 응집반응에 이용된다.
Rapid slide test는 응집소를 검출하기 위한 screening test인 반면 tube test는 응집소를 정량하기 위한 과정이다. 그러므로 rapid slide test에서 양성결과를 나타내는 혈청은 그 역가를 결정하기 위해 tube test로서 재시험하는 것이 필요하다.
2. 검체수집
① 환자로부터 무균적으로 5-10㎖의 혈약을 수거한다.
②혈액을 응고시키고 파스테르 피펫으로 혈정을 채취한다. 만약 혈청에서 적혈구가 제거되지 않았으면 원심분리 시켜서 깨끗이 제거한다.
3. 측정과정
1) Rapid slide Test
① 유리 슬라이드 및 종이 슬라이드를 준비한다. 유리판은 사용하기 전에 충분히 세척여 건조시켜 놓는다.
② 슬라이드의 각 열에 80, 40, 20, 10, 5µl의 혈청을 피펫을 사용하여 떨어뜨린다.
③ 항원을 잘 흔들어 슬라이드 상의 혈청에 각각 1방울 씩 적하한다.
④ 혼합봉을 사용하여 5µl부터 80µl쪽으로 혼합한다.
⑤ 슬라이드를 양손으로 잡고 15-20회 천천히 회전시킨 후 1분 이내에 적당한 광원 위에서 응집반응을 관찰한다.
2) Macroscopic tube test
Salmonella O antigen group D를 0.85% formalin saline로 1/20으로 희석하여 시험관 검사법의 항원으로서 사용한다. 검사하게 될 혈청의 연속 희석은 다음과 같은 방법으로 제조한다.
① 검사하게 될 각 혈청 당 8개의 시험관을 준비한다.
② 각 행의 첫 번째 시험관에 0.85% NaCl 0.9㎖을 첨가하고, 나머지 시험관에는 각각 0.5㎖씩 첨가한다.
③ 0.9㎖의 NaCl 용액이 들어있는 첫 번째 시험관에 혈청 0.1㎖를 첨가한다.
④ 피펫으로 잘 혼합후, 시험관 2에 0.5㎖를 옮겨서 충분히 혼합한다.
⑤ 시험관 7까지 계속해서 혈청 희석용액을 0.5㎖를 옮기면서 충분히 혼합하고 시험관 7에서는 0.5㎖를 취하여 버린다. 시험관 8은 대조용 항원 시험관이다.
⑥ 8개의 시험관에 각각 필요한 항원 0.5㎖를 첨가한다. 항원과 항혈청을 혼합하기 위해 충분히 흔든다.
⑦ 50℃ 항원 수조에서 16-18시간 동안 반응시킨 후 관찰한다.
3. 결과판독
1) Rapid slide Test
– 응집정도는 다음과 같이 기록하며, 표 1을 참고한다.
4+ : 미생물의 100% 응집
3+ : 미생물의 약 75% 응집
2+ : 미생물의 약 50% 응집
1+ : 미생물의 약 25% 응집
+ : 약간 응집
– : 비응집
– 혈청의 역가는 적어도 2+(약 50% 응집)의 반응을 일으키는 검체의 희석 배수를 기록한다.
– 슬라이드 검사법에서는 경우에 따라 전역반응이 나타날 수도 있으므로 모든 희석 배수에서 검사하는 것이 좋으며, 전역반응으로 예상될 때는 혈청을 saline으로 1/20 희석하여 다시 검사한다.
2) Macroscopic tube test
– 검은 바창에서 형광 램프를 이용하여 다음과 같이 응집반응 정도를 기록하며, 표 2를 참고한다.
4+ : 미생물의 100% 응집, 상청액은 투명
3+ : 미생물의 약 75% 응집, 상청액은 약간 흐림
2+ : 미생물의 약 50% 응집, 상청액은 대체로 흐림
1+ : 미생물의 약 25% 응집, 상청액은 흐림
– : 응집이 보이지 않고 미생물은 흐린 현탁액으로 남으며, 이 반응은 시험관 8에서 관찰된다.
– 혈청의 역가는 적어도 2+(약 50% 응집)의 반응을 일으키는 검체의 희석 배수를 기록한다.
1. 체외진단용 외 사용을 금합니다.
2. 검체는 지방질이 없는 투명한 것이어야 합니다.
3. 검체가 열에 의하여 비동화 되면 내열성이 없는 응집소가 파괴되므로 열이 가해지지 않은 상태에서 검사합니다.
4. 균일한 현탁액을 유지하기 위하여 사용 전에 항원액을 잘 흔들어 줍니다.
5. 음성 혈청에서 양성 반응을 나타내거나 항원액 자체에서 자발적인 응집을 나타내는 항원은 사용하지 마십시오.
6. 항원액은 저장하는 동안 동결온도의 영향을 받으면 자가응집반응을 일으키므로 동결되지 않도록 해야 합니다.
7. 슬라이드 검사법에서 사용되는 모든 시약과 기구는 사용 전에 실온에 있어야 합니다.
8. 슬라이드 검사법에서는 1분 내에 즉시 응집반응을 관찰합니다.
9. 시험관 검사법에서 혼합 중에 거품이 일면 응집소의 변성을 초래하므로 검체를 너무 심하게 혼합하지 않도록 해야 합니다.
10. 시험관 검사법에서는 지정된 반응 시간과 온도를 지켜주는 것이 중요하며 항온수조를 이용하는 경우, 기계적인 진동이 반응에 영향을 미치지 않는 위치에 둡니다.
11. 열에 노출 시 반응물의 증발이 일어날 수 있고, 위양성을 나타낼 수 있으므로 반응물이 증발되지 않도록 해야 합니다.
12. 시험관 검사법에서 판독하기 전에 시험관을 심하게 흔들지 말고 방치한 상태에서 조심스럽게 읽습니다.
13. 동일한 환자로부터 각각 다른 시간에서 얻어진 몇 가지 혈청을 동시에 검사하여 응집정도의 차이를 관찰할 필요가 있습니다.
14. 슬라이드 검사법은 스크리닝 용으로만 이용되며, 슬라이드 검사법의 양성반응은 시험관 검사법으로서 확인되어져야 합니다.
15. 환자의 감염진단은 환자의 상태 및 임상적 증상, 다른 진단 방법과 함께 종합적으로 판정을 해야 하며, TAT와 장티푸스 백신 등으로 면역된 환자의 혈청, 마약 중독자의 혈청, 만성 간질환을 앓고 있는 환자의 혈청은 비특이적인 양성반응을 나타낼 수도 있습니다.
16. 항체 검사에서 양성이더라도 현재의 Salmonella 감염 상태를 반영하지 않는 경우도 있으므로 주의합니다.
| 저장방법 | 냉장보존(2-8℃) |
|---|---|
| 사용기간 | 제조일로부터 12 개월 |
| 재심사대상 | |
| RMP대상 | |
| 포장정보 | 5㎖ |
| 보험코드 | |
| 보험약가 | |
| 보험적용일 |
서울 부산 인천 대구 광주 대전 울산 경기 강원 충북 충남 전북 전남 경북 경남 제주 세종시
