디아키안티-에취씨브이3.0엘라이자 - 의약품 상세정보

1) 검체 준비

혈청과 혈장 모두를 검체로 사용할 수 있으나 지방질이 많거나 심하게 용혈된 검체는 용할 수 없다. 검체는 2～8℃에서 1～2일 보관이 가능하고 장기간 보관할 경우에는 -20℃에 냉동 보관한다. 혈장 검체는 섬유소가 존재하여 시험을 방해할 수 있으므로 항상 시험 전에 원심분리하여 사용한다.

2) 세척액 준비

진단시험을 시작하기 전 실온에 방치하여 완전히 용해된 20배 세척약물 정제수로 희석하여 필요한 만큼의 세척액을 준비한다. 즉, 농축 세척액 50ml에 정제수 950ml를 넣어 희석한다. 세척액은 실온에서 약30일간 안정하며, 60일 이상 장기 보존시는 2℃~8℃에 보관하는 것이 안정하다.

3) 기질액 주비

사용하고자 하는 웰 수에 딸 농축 기질액을 기질용 완충액으로 희석하며, 이 때 농축 기질액 : 기질용 완충액은 1:10으로 한다. 즉, 농축 기질액 100㎕에 기질용 완충액 1ml을 넣어 희석한다.

- 시약을 약 30분 전에 실온에서 예열시키며 사용 전 가볍게 흔들어 잘 섞은 후 사용한다.

- 시험 후 남은 플레이트는 첨부된 비닐포에 실리카겔 포와 함께 잘 밀봉하며 2~8℃에서 냉장 보관한다.

- 각 시약의 유효 기간은 각각의 병에 표기되어 있다.

- 검체는 사용 전에 충분히 혼합한다. 특히 동결되었던 시료는 반드시 혼합기를 이용하여 균질화 시킨 후 사용한다.

가. 검사법 (별 표 참조)

1) 각 검사시, 1개의 기질 blank, 3개의 음성 대조액, 2개의 양성 대조액과 검사하고자 하는 검체 수를 결정한 후 원하는 웰만큼 스트립을 홀더에 끼운다. 이 때 사용하지 않은 웰들은 자체 밀봉지에 방습제와 함께 밀봉하여 2℃∼8℃에 보관하며 스트립의 웰 밑바닥을 손으로 만지지 않도록 주의한다.

2) 음성 대조액과 양성 대조액 및 검체들은 웰에 가할 위치를 정하여 기록을 한 다음, 기질 blank를 제외한 각 웰들에 100㎕의 검체 희석액을 분주한다.

3) 음성 대조액과 양성 대조액 및 검사하고자 하는 검체를 10㎕씩 각 웰에 분주한 후, 약 5∼10초 동안 검체가 웰 밖으로 튀지 않게 조심스럽게 흔들어 준 후 플레이트 밀봉 테이프로 밀봉한다.

4) 37℃(±1℃)에서 60분(±5분) 동안 반응시킨다.

5) 반응 후, 밀봉시킨 플레이트 밀봉 테이프를 벗기고 모든 웰들을 1회에 250㎕의 세척액으로 5회 세척한 후, 웰 내에 잔류액을 완전히 제거한다. 이 때 첫 번째 세척단계에서 각 웰의 내용물을 흡입장치로 완전 제거후 세척액을 가하고 옆 웰로 넘어 들어가지 않도록 주의하면서 각 웰들을 완전히 채운 후 약 30초∼1분간 방치한다. 나머지 4회 세척단계에서도 세척액이 웰을 완전히 채우도록 하여 세척한다.

6) 기질 blank를 제외한 모든 웰들에 효소표지 항체액 100㎕을 분주한다.

7) 플레이트 밀봉 테이프로 웰들을 밀봉한 후 37℃(±1℃)에서 30분(±5분) 동안 반응시킨다. 이 반응이 완전히 끝나기 10분 전에 기질용액을 준비한다.

8) 단계 5)와 같은 방법으로 세척한다.

9) 기질액을 기질 blank를 포함한 모든 웰에 100㎕씩 분주한다.

10) 잘 혼합한 후 15∼30℃, 암소에서 30분(±1분) 동안 반응한다.

11) 반응 정지액을 기질 blank를 포함한 모든 웰에 100㎕씩 분주한다.

12) 플레이트 바닥을 부드러운 흡습성 종이로 잘 닦아 습기를 제거한 후 450nm에서 흡광도(O.D.)를 측정한다. 기질 blank를 사용하되, 계산시 모든 흡광도 값에서 기질 blank값을 뺀 값을 사용하며 만약 이중 파장 흡광도 측정기를 사용할 경우 보조(reference)파장을 620nm 또는 630nm로 맞추어 사용한다.

1) 음성 대조액의 평균값 :

앞 항의 진단방법에 따라 음성 대조액의 흡광도를 얻은 다음 그 세 값의 평균값을 산출한다.

① 각 음성 대조액의 흡광도 값은 0.000~0.150 이어야 한다. 이때 0 미만의 흡광도값을 보이는 경우는 모두 0으로 간주한다.

② 만일 3개의 음성 대조액 흡광도 값 중 1개의 값이 위 범위를 벗어났을 경우에는 나머지 2개의 값의 평균값으로 산출한다.

③ 만일 3개의 음성 대조액 흡광도 값 중 2개 이상의 값이 위 범위를 벗어났을 경우 재실험을 해야 한다.

2) 양성 대조액의 평균값 :

앞 항의 진단방법에 따라 양성 대조액의 흡광도를 얻은 다음 그 두 값의 평균값을 산출한다.

① 측정한 양성 대조액의 흡광도(450nm)값이 1.500이상 2.400이하여야 하며 두 값의 차이가 0.250이하여야 한다.

② 음성 대조액의 평균 흡광도와 양성 대조액의 평균 흡광도 차이가 1.500이상이어야 한다.

③위의 기준을 벗어나는 경우는 기질액 희석배수의 오차, 세척액 희석배수의 오차, 웰 간의 오염, 또는 실험자의 실수 등이 의심되므로 재실험을 해야 한다.

3) Cut-off value(판정 기준치) 개산 : 음성 대조액 평균값 + 0.400

4) 결과해석 :

① 검체의 흡광도 값이 Cut-off value보다 작으면 음성으로 판정하며, 재실험을 수행하지 않아도 된다.

② 검체의 흡광도 값이 Cut-off value 이상이면 최종 판정을 내리기 전에 두 웰에 재실험을 하여 다음과 같은 기준으로 해석을 한다.

첫째, 반복 실험한 값 중 하나만이라도 Cut-off value 이상이면 양성으로 판정한다.

둘째, 반복 실험한 두 값 모두가 Cut-off value 보다 작으면 음성으로 판정한다.

③ 본 진단검사 시약은 1차적인 진단이므로, 확진을 위해서는 의사의 지시 아래 정밀검사를 필요로 합니다.