에스디말라리아피.브이엘리자 - 의약품 상세정보

1) 혈청과 혈장 모두를 검체로 사용할 수 있으나 지방질이 많거나 심하게 용혈된 검체는 쓸 수없다. 혈구나 혈액 응고 성분 등의 고혈물은 가능한 한 빨리 원심하여 완전히 제거한다.

2) 검체 채취시 넣어주는 전형적인 항응고제(EDTA, citrate, 헤파린)는 본 검사법을 방해하지않는다.

3) 과산화효소의 활성을 저해하는 물질(예. 보존제로 쓰이는 아지드화나트륨 NaN₃)을 함유하고 있는 검체는 위음성이 나올 수 있으므로 사용하지 않는다.

4) 검체는 2-8℃에서 1-2일 보관이 가능하고 더 장기간 보관하려면 -20℃에 냉동 보관한다.

5) 용혈이 심하거나 미생물에 오염된 검체의 경우는 부정확한 결과를 나타낼 수 있으므로 주의한다.

[주의사항]

1) 시약을 약 30분 전에 실온에서 예열시킨다.

2) 시험 후 남은 항원흡착플레이트는 첨부된 비닐포에 실리카겔 포와 함께 잘 밀봉하여 2-8℃에서 냉장 보관한다.

3) 각 시약의 유효 기간은 각각의 병에 표기되어 있다.

4) 검체는 사용 전에 충분히 혼합한다. 특히 동결되었던 시료는 반드시 혼합기를 이용하여 균질화 시킨 후 사용한다.

[검사방법 요약표]

가. 시약의 조제

1) 세척액의 준비

농축세척액을 정제수(탈이온수나 증류수)로 20배 희석한다. 세척액은 한 well 당 약 3ml가 소요된다.(예, 증류수 475ml에 농축세척액 25ml를 첨가하여 세척액을 조제한다)

2) 기질용액의 준비

기질액을 사용하고자 하는 well 수에 따라 기질용 완충액으로 100배 희석한다. 즉, 기질액 1:기질용완충액 100 의 비율로서, 한 플레이트를 시험할 경우 기질액 150㎕를 기질용완충액 15ml로 희석하면 된다.

나. 조제한 시약의 보관 조건 및 보존 기간

라. 검사방법

1) 검사를 시작하기 약 30분전에 시약 구성물 들을 상온에 방치시켜, 사용전 가볍게 흔들어 잘섞어준 후 사용하고, 플레이트는 상온이 된 후에 개봉하여 사용한다.

2) 검사에 필요한 well 수를 결정하고 사용하고 않은 well은 자체 밀봉지에 실리카겔과 함께 밀봉하여 2-8℃에 보관한다.

3) 필요한 양 만큼의 스트립을 꺼내어 프레임에 고정한 후, 음성대조액 3wells(1A, 1B, 1C), 양성대조액 2wells(1D, 1E) 및 검사하고자 하는 시료 각각 100㎕씩을 항원 흡착플레이트의 각 well에 분주한다.

4) 효소표지 항원용액을 각 well에 25㎕씩 넣고, 약 10초 이상 시료들이 well 바깥으로 튀지 않게 조심스럽게 흔들어준 후 플레이트를 첨부된 밀봉테이프로 밀봉한다. *시료와 효소표지 항원액의 균질한 혼합이 검사 결과에 많은 영향을 미친다.

5) 밀봉한 플레이트를 37±1℃에서 90분 동안 반응시킨다.

6) 세척액과 기질용액을 '가. 시약의 조제'항에 따라 조제한다.

7) 반응후 각 well의 내용물을 흡입하고 세척액으로 다음과 같은 방법으로 5회 세척한다. 우선 well 내의 내용물을 흡입장치로 제거한 후, 세척액을 well에 완전히 채우고 약 5-10초 방치한 후 용액을 흡입하는 방법으로 5회 반복한 다음, 휴지에 대고 살짝 잔여 용액을 제거한다.

8) 미리 조제한 기질용액을 모든 well에 100㎕씩 분주하고 첨부된 밀봉테이프로 밀봉하고, 실온에서 30분 동안 반응시킨다.

9) 반응정지액을 모든 well에 각 well당 100㎕씩 넣고 잘 혼합하여 청색이 노란색으로 완전히 변하도록 한다.

10) 공기를 맹검으로 하여(Air blank) 음성대조액, 양성대조액 그리고 각 검체의 흡광도를 측정한다. 이때 흡광도의 측정 파장은 450nm, 참조파장은 620nm로 하며 반응 정지액을 넣고 30분 이내에 흡광도값을 측정한다.

3) 결과판정

(1) 정도관리

가. 음성 대조액의 흡광도 값은 -0.005이상 0.150이하이어야 하며, 만약 1개의 값이 위범위를 벗어났을

경우 나머지 2개의 값의 평균값으로 산출된다. 만약 2개 이상의 값이 위 범위를 벗어났을 경우 재실험을 하여야 한다.

나. 양성 대조액의 평균 흡광도 값은 0.600이상이어야 한다. 양성 표준액의 평균 흡광도 값이 위 범위를 벗어난 경우에는 검사과정이나 시약에 문제가 있는 것이므로 그 원인을 확인한 후 재검사하여야 한다.

(2) 판정 기준값(Cut-off)계산 및 판정

가. 음성대조액 평균값 계산

상기 2) 항의 검사방법에 따라 음성대조액의 흡광도를 얻은 다음 그 세 값의 평균값을 산출한다.

예)

나. 양성대조액 평균값 계산

상기 2)항의 검사방법에 따라 양성대조액의 흡광도를 얻은 다음 그 두 값의 평균값을 산출한다.

예)

다. 판정 기준값(Cut-off) 계산

음성대조액 평균흡광도(NCx)값에 0.100을 더하여 판정기준값을 구한다.

예) NCx + 0.100 = 0.030 + 0.100 = 0.130

라. 결과의 판정

가) 음성: 판정 기준값 미만의 흡광도값을 나타내는 검체는 음성으로 판정한다.

나) 양성: 판정 기준값 이상의 흡광도값을 나타내는 검체는 양성으로 판정한다.

●1차 검사에서 양성 판정 검체는 2 wells 이상 재검사하고 재검사결과에서 1well이상 양성으로 판정되면 최종 양성으로 판정된다.

●최종 양성 판정된 검체는 임상적인 소견과 혈액 도말의 현미경 관찰시 원충확인 감염여부를 판정한다.

●본 제제는 항체 검사로 말라리아 감염이 치유된 기왕력 환자에서도 양성 반응 나타낼 수 있으므로 주의한다.