에스디에치아이브이1/2엘리자3.0 - 의약품 상세정보

1) 혈청과 혈장 모두를 검체로 사용할 수 있으나 지방질이 많거나 심하게 용혈된 검체는 쓸 수 없다.

혈구나 혈액 응고 성분 등의 고형물은 가능한 한 빨리 원심하여 완전히 제거한다.

2) 검체 채취시 넣어주는 전형적인 항응고제(EDTA, citrate, 헤파린)는 본 검사법을 방해하지 않는다.

3) 과산화효소의 활성을 저해하는 물질을 함유하고 있는 검체는 위음성이 나 올 수 있으므로 사용하지 않는다.

4) 검체는 2~8℃에서 7일간 보관이 가능하고 더 장기간 보관하려면 -20℃이하에 냉동 보관한다.

5) 용혈이 심하거나 미생물에 오염된 검체의 경우는 부정확한 결과를 나타낼 수 있으므로 주의한다.

6) 검체를 여러 차례 동결 용해를 반복하면 항체 역가가 떨어져 부정확한 검사 결과를 얻을 수 있으므로

반복하여 동결 용해하지 않는다.

[주의사항]

1) 모든 시약은 실험 시작 15~30분 전에 실온에 둔다.

2) 밀봉된 은박포에서 항원 흡착 플레이트를 꺼내어 필요한 만큼의 Strip을 남기고, 나머지 Stripdms Frame에 서 빼내어 실리카겔과 은박포에 잘 밀봉하고 2~8℃에서 냉장 보관한다. 이때 보관 중인 은박포 내에 습기가

들어가면 항원 역가의 저하를 일으킬 수 있으니 주의한다.

3) 각 시약의 유효기간은 각각의 병에 표기되어 있다.

4) 검체는 사용 전에 충분히 혼합한다. 특히 동결되었던 시료는 반드시 혼합기를 이용하여 균질화 시킨 후

사용한다.

[검사방법 요약표]

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단계 조작명 사용 구성물 조작내용

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1 준비 전체구성물 검사 시작 30분전에 실온에 방치

2 검체 희석액 분주 검체 희석액 검사하고자 하는 각 well에 검체 희석액을

100㎕L씩 분주

3 검사할 시료의 분주 음성/양성 대조액, 검사하려는 시료와 음성,양성대조액을 50㎕

플레이트 씩 각 well에 분주

4 항온(1) 밀봉된 플레이트 37±1℃에서 60분간 반응

5 세척액의 준비 농축 세척액 농축세척액을 정제수로 20배 희석하여 필요한

만큼의 세척액을 조제

6 세척 조제된 세척항은

완료 플레이트 5회 세척하여 반응하고 남은 내용물을 제거

7 효소표지항원액첨가 효소표지항원액 효소표지항원용액을 각 well에 100㎖씩 첨가하고

밀봉한 후 잘 혼합

8 항온(2) 밀봉된 플레이트 37±1℃에서 30분간 반응

9 기질용액의 준비 기질액 기질액 1 : 기질용완충액 100 배율로 희석하여

기질용완충액 필요한 만큼의 기질용액을 조제

10 세척 조제된 세척액 항온

완료 플레이트 5회 세척하여 반응하고 남은 내용물을 제거

11 기질용액 첨가 조제된 기질용액 기질용액을 각 well에 100㎖씩 첨가

12 항온 플레이트 실온,암소에서 30분간 반응 13 반응정지액 첨가 반응정지액 반응정지액을 각 well에 100㎖씩 첨가

14 흡광도 측정 흡광도 측정기 측정파장 45㎚에서 흡광도를 측정

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가. 시약의 조제

1) 세척액의 준비

농축 세척액을 증류수나 이온정제수로 20배 희석한다. 세척액은 한 well당 약3ml가 소요된다.

(예, 증류수 190ml에 농축세척액 10ml을 첨가하여 세척액을 조제한다.)

2) 기질액의 준비

기질액은 사용하기 5~10분 전에 기질액과 기질용 완충액을 1:100의 비율로 혼합하여 사용한다.

(예, 한 플레이드를 시험할 경우 기질액 0.15ml에 기질용완충액 15ml를 혼합아혀 조제한다.)

* 혼합된 기질은 직사광선을 피하여 보관하다.

나. 검사방법

1) 검사를 시작하기 약 30분전에 시약 구성물 들을 상온에 방치시켜, 사용전 가볍게 흔들어 잘 섞어준 후

사용하고, 플레이트는 상온이 된 후에 개봉하여 사용한다.

2) 검사에 필요한 well 수를 결정하고 사용하지 않은 well은 자체 은박포에 실리카겔과 함께 밀봉하여

2~8℃에 보관한다.

3) 검사에 필요한 양 만큼의 스트립을 꺼내어 프레임에 고정한 후, 검체들을 well에 가할 위치를 정해 위치를

기록한 다음, 각 well들에 100㎕의 검체 희석액을 분주한다.

4) 음성 대조액 3 wells (1A, 1B, 1C), 양성 대조액 2 wells(1D, 1E),검사하고자 하는 시료 각각 50㎕씩을

항원흡착플레이트의 각 well에 분주한 후 약 5~10초 동안 시료들이 well 바깥으로 튀지 않게 조심스럽게

흔들어 준 후 플레이트를 첨부된 밀봉테이프로 밀봉한다.

* 시료와의 균질한 혼합이 검사 결과에 중요한 영향을 미친다.

5) 밀봉한 플레이트를 37±1℃에서 60±5분 동안 반응시킨다.

6) 반응이 끝나기 전에 세척액을 가, 시약의 조제 항에 따라 조제한다.

7) 반응 후 각 well의 내용물을 흡입하고 세척액으로 다음과 같은 방법으로 5회 세척한다. 우선 well 내의

내용물을 흡입장치로 제거한 후, 세척액을 well에 완전히 채우고(1회에 각 well당 300㎕이상) 약 15~30초

방치 한 후 용액을 흡입하는 방법으로 5회 반복한 다음, 휴지에 대고 살짝 털어 잔여 용액을 제거한다.

8) 모든 well에 효소표지항원용액 100㎕씩을 분주한 후 첨부된 밀봉테이프로 밀봉하고, 37±1℃에서 30±1분

동안 반응시킨다.

9) 반응이 끝나기 전에 기질용액을 가, 시약의 조제 항에 따라 조제한다.

10) 반응 후 각 well의 내용물을 흡입하고 세척액으로 다음과 같은 방법으로 5회 세척한다. 우선 well 내의

내용물을 흡입장치로 제거한 후, 세척액을 well에 완전히 채우고 (1회에 각 well당 300㎕ 이상) 약

15~30초 방치한 후 용액을 흡입하는 방법으로 5회 반복한 다음, 휴지에 대고 살짝 털어잔여 용액을 제거한 다.

11) 미리 조제한 기질용액을 모든 well에 100㎕씩 분주한다.

12) 실온,암소에서 30±1분 동안 반응시킨다.

13) 반응 정지액을 모든 well에 각 well당 100㎕씩 넣고 잘 혼합하여 청색이 노란색으로 완전히 변하도록 한다

14) 공기를 맹검으로 하여 (Air blank) 음성 대조액, 양성 대조액 그리고 각 점체의 흡광도를 측정한다. 이때

흡광도의 측정 파장은 450㎚로 하고, 이중 파장흡광도측정기를 사용할 경우 참조파장은 620㎚로 하며 반응

정지액을 넣고 30분 이내에 흡광도 값을 측정한다.

1) 정도관리

가. 음성 대조액의 흡광도 값은 -0.010이상 0.200이하이어야 하며, 만약 1개의 값이 위 범위를 벗어났을

경우 나머지 2개 값의 평균값으로 산출한다. 만약 2개 이상의 값이 위 범위를 벗어났을 경우 재시험을

하여야 한다.

나. 양성 대조액의 평균 흡광도 값은 1.000 이상이어야 한다. 양성 표준액의 평균 흡광도 값이 위 범위를

벗어난 경우에는 검사과정이나 시약에 문제가 있는 것이므로 그 원인을 확인한 후 재검사 하여야 한다.

2) 판정 기준값 계산 및 판정

가. 음성 대조액 평균값 계산

상기 2)항의 검사방법에 따라 음성 대조액의 흡광도를 얻은 다음 그 세값의 평균값을 산출한다. 예)

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음성 대조액 번호 흡광도(450㎚)

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1 0.025

2 0.030

3 0.035

합계 0.090

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* 음성표준액의 평균 흡광도 : NCx = 0.090/3 = 0.030

나. 양성 대조액 평균값 계산

상기 2)항의 검사방법에 따라 양성 대조액의 흡광도를 얻은 다음 그 두값의 평균값을 산출한다. 예)

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양성 대조액 번호 흡광도(450㎚)

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1 1.534

2 1.568

합계 3.102

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* 양성표준액의 평균 흡광도 = PCx = 3.102/2 = 1.551

다. 판정 기준값 계산 및 판정

- 음성 대조액 평균 흡광도 (NCx) 값에 0.3을 더하여 판정 기준값을 구한다.

예) NCx + 0.300 = 0.030 + 0.300 = 0.330

- 음성 : 판정 기준값 미만의 흡광도 값을 나타내는 검체는 음성 판정한다.

- 양성 : 판정 기준값 이상의 흡광도 값을 나타내는 검체는 양성 판정한다.

●1차 검사에서 양성 판정검체는 2 wells 이상 재검사하고 재검결과에서 1well이상 양성으로 판정되면

최종 양성으로 판정한다.

●본 제제의 검사결과가 양성인 경우 매독균 항체가 존재하는 것으로 1차적으로 판단할 수 있으며

본 제제로 양성 판정된 모든 검체는 반드시 2차적인 확인 검사를 실시하여 그 결과를 확인하여야

한다.

●단, HIV항체가 존재하는 것이 HIV-1/2 감염을 직접적으로 증명할 수는 없으므로 이검사의 결과와

함께 전문의의 자세한 문진을 통하여 다른 임상 결과나 실험 결과를 함께 이용하여 진단을 내려야

한다.

●HIV에 감염된 대부분의 사람들은 감염된 후로부터 2~12주 사이에 관찰 가능한 항체를 형성하게 된다.

감염된 시점에서 항체가 발견될 수 있는 검사시행까지의 기간을 보통 항체 미형성시기라고 하는데

이 기간 중에 검사를 받았다면 실제로 감염이 되었더라도 음성 반응을 보일 수 있다.