엘지에취아이브이항원-항체플러스 - 의약품 상세정보

(1) 세척액 준비

시험을 시작하기 전 상온에 방치하여 완전히 용해된 20배 농축 세척액을 정제수로 20배 희석하여 필요한 만큼의 세척액을 준비합니다. 세척 액은 한 웰 당 3mL 가량이 소요되는데, 실제로 준비해야 할 양은 세척 시 사용하는 방법 및 기기에 따라 추가로 필요하게 됩니다. 자동화된 기기를 사용하는 경우, 실제 소요량보다 200mL 가량 추가로 준비하십시오. 이렇게 희석된 세척액은 상온에서 약 30일간 안정하며, 장기 보존 시 2~8℃에 보관하는 것이 안정합니다.

(2) 접합체액 2 준비

접합체액 2 를 사용하기 전에 사용코자 하는 웰 수에 따라 적정량의 접합체액 2 (51배 농축액)을 접합체액 2 희석액에 51배의 비율로 필요한 양만큼 희석합니다. 한 플레이트를 시험할 경우 접합체액 2 (51배 농축액) 300㎕를 접합체액 2 희석액 15mL에 희석하면 충분합니다. 기기를 사용하여 분주할 경우에는 그에 따라 소모되는 용액량이 늘어나므로 필요량보다 넉넉히 준비하십시오. 이 용액은 상온에서 보관시 8시간 안정합니다.

(3) 기질 용액 준비

기질용액을 사용하기 전에 사용코자 하는 웰 수에 따라 적정량의 TMB 농축액을 기질 완충액에 101배의 비율로 필요한 양만큼 희석합니다. 한 플레이트를 시험할 경우 TMB 농축액 150㎕를 기질 완충액 15mL에 희석하면 충분합니다. 기기를 사용하여 분주할 경우에는 그에 따라 소모되는 용액량이 늘어나므로 필요량보다 넉넉히 준비하십시오. TMB용액을 희석할 용기는 금속성이 아닌 유리나 플라스틱 재질로 된 용기를 사용하여야 하며 사용 전 반드시 정제수로 세척, 수돗물에 의한 금속성 이온과의 접촉을 방지해야 합니다. 이 용액은 상온에서 공기와 접촉을 피한 상태에서 암소에 보관시 4시간 안정하며 만일 푸른빛을 띨 경우 다시 만들어야 합니다.

(1) 본 시험에서는 혈청 또는 혈장 모두 사용가능하며, 혈구나 혈액 응고성분 등의 고형물은 가능한 한 빨리 원심분리하여 완전히 제거합니다.

(2) 검체 채취시 넣어주는 전형적인 항응고제 (EDTA, citrate, 헤파린) 는 본 검사법을 방해하지 않습니다.

(3) 과산화효소의 활성을 저해하는 물질(예: 보존제로 쓰이는 질화 나트륨 NaN3)을 함유하고 있는 검체는 위 음성이 나올 수 있으므로 사용하지 말아야 합니다.

(4) 검체를 단기간(2주이내)보관할 경우는 2~8℃에서 냉장보관하고, 장기보관시는 -15℃이하로 냉동보관합니다.

(5) 용혈이 심하거나 미생물에 오염된 검체의 경우는 부정확한 결과를 나타낼 수 있으니 주의하십시오.

(1) 반응정지액을 제외한 키트의 모든 시약은 2~8℃에서 보관하며 유효기간 이내에 사용하여야 합니다. 반응정지액은 상온에서 1년간 안정 합니다.

(2) 모든 시약은 사용시 상온(15~30℃)이어야 하며 사용 직후 냉장보관 하여야 합니다. 특히 저온상태의 플레이트를 개봉하면, 웰에 습기가 차서 차후 사용시 문제가 될 수 있으므로 완전히 상온이 된 후 개봉하고, 사용하고 남은 웰들은 습기가 제거된 상태에서 밀봉후 즉시 2~8℃로 옮겨 보관합니다. 습기가 찬 상태로 보관된 웰은 냉장 보관중에도 그 활성도가 떨어질 수 있으므로 주의하십시오.

(3) 조제한 시약의 저장방법 및 사용기간은 다음과 같습니다.

(4) 개봉된 시약의 저장방법 및 사용기간은 다음과 같습니다.

(1) 검사를 시작하기 약 30분전에 진단시약들을 상온에 방치시켜, 상온으로 맞춰 준 다음 용액들은 사용전 가볍게 흔들어 잘 섞어준 후 사용하고, 플레이트는 상온이 된 후에 개봉하여 사용하십시오.

(2) 검사에 필요한 웰의 수를 결정합니다. 각 검사시, 시험하고자하는 혈액 검체수에 추가로 7웰(3개의 음성대조액, 2개의 항체 양성대조액, 2개의 항원 양성대조액)이 필요합니다. (자동화기기 결과 판독 프로그램에 따라 3개의 음성대조액, 1개의 항체 양성대조액, 1개의 항원 양성대조액을 사용할 수도 있습니다.) 이외에 1개의 기질 Blank를 추가할 수 있습니다. 사용하지 않은 웰들은 자체 밀봉지에 제습제와 함께 밀봉하여 2~8℃에 보관합니다. (이때 스트립의 웰 밑바닥을 손으로 만지지 마십시오)

(3) 대조액들 및 검체들을 웰에 가할 위치를 정해 위치를 기록한 다음, 기질 Blank를 제외한 각 웰들에 접합체액 1 을 25㎕씩 분주합니다.

(4) 음성대조액, 항체 및 항원 양성대조액과 검사하려는 검체들을 75㎕씩 각 웰에 분주한 후 약 5~10초 동안 검체들이 웰 바깥으로 튀지 않게 조심스럽게 흔들어준 후 플레이트 밀봉테이프로 밀봉합니다.

(5) 밀봉한 플레이트를 37± 1℃에서 60± 5분 동안 반응시킵니다.

(6) 반응 후, 플레이트 밀봉 테이프를 벗기고 모든 웰들의 결합하지 않은 내용물을 흡입장치로 제거하고 아래와 같은 세척방법으로 5회 세척합니다. 우선 웰내의 내용물을 흡입장치로 제거한 후, 세척액을 웰에 300 ㎕ 채우고 약 5초~15초 방치한 후 용액을 흡입하는 방법을 5회 반복한 다음, 잔류 세척액을 완전히 제거합니다.

(7) 기질 Blank를 제외한 모든 웰에 미리 조제한 접합체액 2를 100㎕씩 분주한 후 밀봉 테이프로 밀봉합니다. (단, 자동화 기계를 사용하는 경우에는 효소용액이 증발하는 경우가 있으므로 120㎕씩 분주합니다.)

(8) 밀봉한 플레이트를 37± 1℃에서 30± 1분 동안 반응시킵니다.

(9) 반응 후, 플레이트 밀봉 테이프를 벗기고 모든 웰들의 결합하지 않은 내용물을 흡입장치로 제거하고 세척액으로 5회 세척한 후 휴지에 대고 살짝 털어 잔여 용액을 제거합니다.

(10) 기질 Blank를 포함한 모든 웰에 미리 조제한 기질용액을 100㎕씩 분주합니다.

(11) 15~30℃, 암소에서 30± 1분 동안 반응시킵니다.

(12) 반응 정지액을 모든 웰에 100㎕씩 분주합니다.

(13) 플레이트 바닥을 부드러운 흡습성 종이로 잘 닦아 습기를 제거한 후 450nm에서 흡광도(OD)를 측정합니다. 만약 이중 파장 흡광도 측정기를 사용할 경우 보조(reference) 파장을 620nm 또는 650nm로 맞추어 사용합니다.

(1) 음성대조액의 평균 흡광도 값은 0.000 와 0.200 사이에 있어야 합니다. 만약 흡광도 값이 -0.010 ~ 0.000 사이로 읽혔다면 계산시 0.000 으로 처리합니다.

(2) 만약 3개의 음성대조액의 흡광도 값 중 1개의 값이 위 범위를 벗어났을 경우 나머지 2개 값의 평균값으로 산출합니다.

(3) 만약 3개의 음성대조액의 흡광도 값 중 2개 이상의 값이 위 범위를 벗어났을 경우 재검사를 해야 합니다.

(4) 항체 및 항원 양성대조액의 흡광도 값은 0.500 이상 이어야 합니다.

(5) 항체 및 항원 양성대조액의 흡광도 값이 위 범위를 벗어난 경우 검사과정이나 시약에 문제가 있는 것이므로 그 원인을 확인한 후 재검사를 해야 합니다.

(1) 판정 기준치(cutoff value)의 계산

1) 음성대조액의 평균 흡광도 값(NCx)을 산출합니다.

예)

음성대조액의 평균 흡광도(NCx) = 0.121 / 3 = 0.040

2) 음성대조액의 평균 흡광도 값(NCx)에 0.3을 더하여 판정 기준치를 구합니다.

예) 판정 기준치(Cut-off) = NCx + 0.3 = 0.040 + 0.3 = 0.340

(2) 결과의 해석 및 판정

1) 검체의 흡광도 값이 판정기준치(Cut-off)보다 작으면 음성으로 판정하며, 재실험을 수행하지 않아도 됩니다.

2) 검체의 흡광도 값이 판정기준치(Cut-off)이상이면 양성으로 간주하여 두 웰에 반복 실험을 한 후 다음과 같이 판정합니다.

① 반복 실험한 값 중 하나만이라도 판정기준치 이상이면 양성으로 판정합니다.

② 반복 실험한 두 값 모두가 판정기준치보다 작으면 음성으로 판정합니다.

3) 음성으로 판정된 경우라도 Window period가 존재하며 HIV에 감염되지 않았음을 확진할 수 없습니다.

4) 양성으로 판정된 경우에는 Western Blot 등의 확인시험을 수행하여야 합니다.

※ 올바른 검사를 위해 준수해야 할 사항

(1) 반응 정지액, 농축세척액을 제외한 모든 시약들은 동일한 Lot 번호의 것을 사용하여야 합니다.

(2) 모든 검체 및 시약을 피펫팅 할 때는 사용하였던 피펫팁을 재사용하지 말아야 합니다.

(3) 일단 실험 시작 후에는 웰들이 마르지 않도록, 각 단계 사이에 중단함이 없이 진행되어야 합니다.

(4) 검사되는 검체들이 양성대조액 및 음성대조액과 동일한 조건에서 검사될 수 있도록 하십시오. 한번에 여러 개의 플레이트를 시험하는 경우라도, 모든 플레이트에 각각 항체 및 항원 양성대조액과 음성대조액을 포함시켜서 시험하십시오.

(5) 사용하고 남은 시약 및 웰들은 상기 저장방법 및 사용기간에 준수하여 보관/사용 하십시오.