디아키에이에프피엘라이자 - 의약품 상세정보

1) 검체 준비

혈청을 검체로 사용하나 지방질이 많거나 심하게 용혈 된 검체는 쓸 수 없다. 검체는 2~8℃에서 1~2일 보관이 가능하고 더 장기간 보관하려면 –20℃에 냉동 보관한다.

2) 기질액 준비

사용하고자 하는 웰 수에 따라 농축 기질액을 기질용 완충액으로 희석하며, 이 때 농축 기질액 : 기질액 완충액은 1:50으로 한다. 즉, 농축 기질액 20㎕에 기질용 완충액 1㎖을 넣어 희석한다.

3) 세척액 준비

진단시험을 시작하기 전 상온에 방치하여 완전히 용해된 20배 농축 세척액을 정제수로 희석하여 필요한 만큼의 세척액을 준비한다. 즉, 농축 세척액 50㎖에 정제수 950㎖을 넣어 희석한다. 세척액은 실온에서 약 30일간 안정하며, 60일 이상 장기 보존 시는 2℃~8℃에서 보관하는 것이 안정하다.

- 시약을 약 30분전에 실온에서 예열시키며 사용 전 가볍게 흔들어 잘 섞은 후 사용한다.

- 시험 후 남은 플레이트는 첨부된 비닐포에 실리카겔 포와 함께 잘 밀봉하여 2~8℃에서 냉장 보관한다.

- 각 시약의 유효 기간은 각각의 병에 표기되어 있다.

- 검체는 사용 전에 충분히 혼합한다. 특히 동결되었던 시료는 반드시 혼합기를 이용하여 균질화 시킨 후 사용한다.

- 고농도 검체인 경우는 검체 희석액을 이용하여 미리 희석해둔다.

가. 검사법

1) 각 검사 시, 표준액 농도별로 각각 2회 반복, 정도관리혈청 2회 반복과 검사하고자 하는 검체 수를 결정 한 후 원하는 웰 만큼 스트립을 홀더에 끼운다. 이 때 사용하지 않은 웰 들은 자체 밀봉지에 방습제와 함께 밀봉하여 2℃~8℃에 보관하며 스트립의 웰 밑바닥을 손으로 만지지 않도록 주의한다.

(* 고농도 검체인 경우는 검체 희석액을 이용하여 미리 희석해둔다.)

2) 표준액, 정도관리혈청 및 검체들은 웰에 가할 위치를 정하여 기록을 한 다음, 기질 blank를 제외한 각 웰들에 25㎕의 표준액과 정도관리혈청 및 검체를 분주한다.

3) 기질 blank를 제외한 모든 웰에 접합체액 100㎕, 바이오틴 접합체액 100㎕를 분주 한 후 플레이트 밀봉 테이프로 밀봉한다.

4) 37℃(±1℃)에서 60분(±5분) 동안 반응시킨다.

5) 반응 후, 밀봉시킨 플레이트 밀봉 테이프를 벗기고 모든 웰들을 세척액으로 웰을 완전히 채워 4회 세척한 후, 웰 내에 잔류액을 완전히 제거한다. 이 때 첫 번째 세척단계에서 각 웰의 내용물을 흡입장치로 완전제거 후 세척액을 가하고 옆 웰로 넘어 들어가지 않도록 주의하면서 나머지 3회 세척단계에서도 세척액이 웰을 완전히 채우도록 하여 세척한다.

8) 제조된 기질액을 모든 웰에 100㎕씩 분주한다.

9) 잘 혼합한 후 15~30℃, 암소에서 30분(±1분) 동안 반응한다.

10) 반응 정지액을 모든 웰에 100㎕씩 분주한다.

11) 플레이트 바닥을 부드러운 흡습성 종이로 잘 닦아 습기를 제거한 후 450nm에서 흡광도(O.D.)를 측정한다. 만약 이중 파장 흡광도 측정기를 사용할 경우 보조(reference)파장 620nm또는 630nm로 맞추어 사용한다.

1) 각 표준액과 검체에 대한 O.D 값을 계산한다.

2) 그래프의 X축을 표준액의 농도(ng/mL), Y축을 표준액의 흡광도 값(O.D.)으로 하여 표준곡선을 그린다.

3) 표준곡선을 이용하여 시료의 O.D.값에 대한 농도 값을 계산한다.

4) 표준액의 최고농도인 300ng/mL보다 높은 농도를 갖는 검체는 적당히 희석하여 검사를 수행하며, 희석된 검체인 경우 계산된 농도 값에 희석배수를 곱하여 최종농도를 결정한다.

5) 결과 해석

① 검체의 농도 값이 15ng/mL 보다 작으면 음성으로 판정한다.

② 검체의 농도 값이 15ng/mL 이상이면 양성으로 판정한다.

6) 재검기준

① 선별 검사에서 양성으로 판정된 경우 두 웰을 반복 검사하여 하나이상 양성으로 판정되면 최종 양성으로 판정한다.

**** 결과 계산의 예 ****

※ 아래 값은 실험 결과의 예를 나타낸 단순 실례이므로 실제 실험 치로 적용해서는 안 된다.