제네디아 에취씨브이엘리자3.0(수출명: 노바패쓰에취씨브이이아이에이) - 의약품 상세정보

1) 혈장 또는 혈청을 검체로 사용하며, 혈구나 혈액 응고 성분 등의 고형물을 원심분리하여 완전히 제거한다.

1) 모든 시약은 실험시작 약 30분 전에 실온에 둔다.

2) 밀봉된 항원 흡착 플레이트를 꺼내어 필요한 만큼의 Strip을 꺼내고 보관하고자 하는 Strip은 Frame에서 빼내어 첨부된 은박포에 실리카겔과 함께 넣어 2~8℃에 보관한다. 이때 보관중인 은박포 내에 습기가 들어가면 항원 역가의 저하를 일으킬 수 있으니 주의한다.

3) 세척액의 조제

농축액(5번병)을 증류수나 이온정제수로 20배 희석하여 필요한 양만큼 준비한다. [필요한 세척액 량이 200ml일경우 농축세척액 10ml에 증류수나 이온정제수 190ml을 넣어 총 부피가 200ml이 되도록 한 다음 잘 섞는다.]

농축세척액은 냉장보관 상태에서 결정이 생길수도 있다. 이 경우에는 37℃항온수조에서 녹인 다음 사용한다.

4) 접합체액의 조제

사용하기 전에 농축접합체액 (6번병)을 접합체희석액 (7번병)으로 1:100의 비율로 필요한 양만큼 희석한다. [실험시 1 Strip (8well)당 농축접합체액 20μl에 접합체희석액 2ml를 혼합하여 조제한다.]

접합체희석액 (7번병)은 침전이 있을 수 있으니 충분히 혼합하여 사용한다.

5) 기질액의 조제

기질액을 사용하기 전에 기질액 (8번병)과 기질용완충액 (9번병)을 1:100의 비율로 혼합하여 사용한다. [실험시 1 Strip (8well)당 기질액 20μl에 기질용완충액 2ml을 혼합하여 조제한다.] 혼합된 기질액은 직사광선을 피해 보관한다.

기질액 (8번병)은 냉장에서 얼어있으니 반드시 37℃ 수조에서 녹여 균질화 한 후 사용하여야 한다. (기질액의 어는점 : 18℃)

1) 시험에 필요한 양 만큼의 Strip을 꺼내어 Frame에 고정시킨다.

2) 플레이트의 각 well에 검체희석액 (4번병)을 200μl씩 넣고, 음성대조액 (2번병) 3wells, 양성대조액 (3번병) 2wells, 나머지 wells에 검체를 각각 10μl씩 차례대로 넣는다. 플레이트를 잘 흔들어 준다.

3) 플레이트를 sealer로 밀봉한 다음 37±1℃에서 60분간 반응시킨다. (자동화장비에 장착했을 때에는 sealer로 밀봉하는 과정은 삭제 가능)

4) 3)의 반응이 끝나기 전에 농축접합체액 (6번병)을 접합체 희석액 (7번병)으로 1:100의 비율로 필요한 만큼 희석한다.

5) 각 well의 내용물을 흡입해 내고 조제한 세척액으로 5회 세척한다.

6) 세척된 플레이트를 흡습지에 뒤집어 가볍게 쳐서 세척액을 완전히 제거한 다음 4)에서 조제된 접합체액을 각 well에 200μl씩 넣는다. (자동화장비에 장착했을 때에는 플레이트를 흡습지에 뒤집어 가볍게 쳐주지 않아도 된다)

7) 플레이트를 sealer로 잘 밀봉한 후 37±1℃에서 30분간 반응시킨다. (자동화장비에 장착했을 때에는 sealer로 밀봉하는 과정은 삭제 가능)

8) 7)의 반응이 끝나기 전에 기질액 (8번병)을 기질용 완충액 (9번병)으로 1:100의 비율로 필요한 양만큼 희석하여 기질액을 조제한다.

9) 각 well의 내용물을 흡입해 내고 조제한 세척액으로 5회 세척한다.

10) 세척된 플레이트를 흡습지에 뒤집어 가볍게 쳐서 세척액을 완전히 제거한 다음 8)에서 조제된 기질액을 각 well에 200μl씩 넣고 실온에서 30분간 반응시킨다. 이 반응은 직사광선을 피해 실시한다. (자동화장비에 장착했을 때에는 플레이트를 흡습지에 뒤집어 가볍게 쳐주지 않아도 된다)

11) 반응정지액(10번병)을 50μl씩 각 well에 넣고 플레이트를 가볍게 쳐서 발색물을 균질화 한다. (자동화장비에 장착했을 때에는 플레이트를 쳐주지 않아도 된다. )

12) 공기를 맹검 (air blank)으로 하고, 음성대조액, 양성대조액 및 검체의 흡광도를 측정한다. 흡광도의 측정은 측정파장 450nm에서 진행한다. 만약 이중파장 흡광도 측정기를 사용할 경우 참조파장 (Reference wavelength)은 620nm 또는 650nm로 한다. 흡광도는 반응정지액 (10번병)을 넣은 후 가능한 한 30분 이내에 측정한다.

양성대조액의 흡광도 값이 모두 0.8이상이고, 세 개의 음성대조액 중 2개 이상의 흡광도 값이 0.200 이하이면서 그 평균값이 0.000 이상 0.200이하여야 한다. 만약 이 기준에 적합하지 않을 경우에는 실험기술상의 문제나 시약의 변질로 인한 것으로 생각되므로 그 원인을 확인하여 재 실험을 실시한다.

1) 판정기준치 (Cut off Value)산출

2) 판정

판정기준치 이상의 흡광도값을 갖는 검체를 양성으로 판정하며, 이 값 미만의 흡광도값을 갖는 검체는 음성으로 판정한다.

** 만일 검체가 양성으로 판정되면 2well 더 실험을 실시하여 두 번 모두 음성결과를 나타내면 음성으로 판정하고 한번 이상 양성결과를 나타내면 양성으로 판정한다.

** 양성으로 판정된 검체는 확인검사를 통해 최종 판정한다.