제네디아 헬리코박터파이로리 엘리자 - 의약품 상세정보

1) 혈장 또는 혈청을 검체로 사용하며 혈구나 혈액응고성분 등의 고형물을 원심하여 완전히 제거한다.

1) 모든 시약은 실험시작 15 ～ 30분전에 실온에 둔다.

2) 밀봉된 항원 흡착 플레이트를 꺼내어 필요한 만큼의 Strip을 꺼내고 보관하고자 하는 Strip은 Frame에서 빼내어 첨부된 은박포에 실리카겔과 함께 넣어 2 ～ 8℃에 보관한다. 이때 보관중인 은박포내에 습기가 들어가면 항원 역가의 저하를 일으킬 수 있으니 주의한다.

3) 검체희석액의 조제

검체희석액(4번병)을 증류수나 이온정제수로 2배 희석하여 필요한 양만큼 준비한다. [필요한 양이 20㎖일 경우 농축검체희석액 10㎖과 증류수나 이온정제수 10㎖를 혼합한다.]

4) 세척액의 조제

농축세척액 (5번병)을 증류수나 이온정제수로 20배 희석하여 필요한 양만큼 준비한다. [필요한세척액양이 200㎖일 경우 농축세척액 10㎖에 증류수나 이온정제수 190㎖을 넣어 총부피가 200㎖이 되도록 한 다음 잘 섞는다.]

농축세척액은 냉장보관 상태에서 결정이 생길 수도 있다. 이 경우에는 37℃ 항온수조에서 녹인 다음 사용한다.

5) 접합체액의 조제

사용하기 10분전에 농축접합체액 (6번병)을 접합체희석액 (7번병)으로 1:100의 비율로 필요한 양만큼 혼합하여 사용한다. [실험시 1 Strip (8 well)당 기질액 20 ㎕에 기질용완충액 2 ml를 혼합하여 조제한다.]

접합체희석액 (7번병)은 침전이 있을 수 있으니 충분히 혼합하여 사용한다.

6) 기질액의 조제

기질액은 사용하기 5-10분전에 농축기질액 (8번병)과 기질용완충액 (9번병)을 1:100의 비율로 혼합하여 사용한다. [실험시 1 Strip (8well)당 농축기질액 20㎕에 기질용완충액 2 ㎖을 혼합하여 조제한다.] 혼합된 기질액은 직사광선을 피하여 보관한다.

농축기질액 (8번병)은 냉장에서 얼어 있으니 반드시 37℃ 수조에서 녹여 균질화 한 후 사용하여야 한다. (기질액의 융점 18℃)

1) 시험에 필요한 양 만큼 Strip을 꺼내어 Frame에 고정시킨다.

2) 깨끗한 시험관을 준비하여 양성 대조액, 음성 대조액 및 검사하고자 하는 검체를 각각 5㎕씩 넣고 여기에 조제된 검체 희석액을 각각 500㎕씩을 가한 후 잘 흔들어 혼합한다.

3) 플레이트의 1A, 1B, 1C well에 희석된 음성대조액을, 1D, 1E well에 희석된 양성대조액을 각각 200㎕씩 차례대로 넣고 나머지 각 well에 희석된 검체를 200㎕씩 차례대로 넣는다.

4) 플레이트를 첨부된 sealer로 밀봉한 다음 37±1℃에서 60분간 반응시킨다.

5) 4)번 반응이 끝나기 5-10분전에 농축접합체액(6번병)을 접합체희석액(7번병)으로 1:100의 비율로 필요한 만큼 희석한다.

6) 각 well의 내용물을 흡입해내고 조제한 세척액으로 5회 세척한다. (각 well당 300㎕)

7) 세척된 플레이트를 흡습지에 뒤집어 가볍게 쳐서 세척액을 완전히 제거한 다음 5)에서 조제된 접합체액을 각 well에 200㎕씩 넣고 Frame을 가볍게 쳐서 잘 혼합한다.

8) 플레이트를 sealer로 잘 밀봉한 후 37±1℃에서 30분간 반응시킨다.

9) 8)번 반응이 끝나기 5-10분전에 농축기질액(8번병)을 기질용완충액(9번병)으로 1:100의 비율로 필요한 양만큼 희석하여 기질액을 조제한다.

10) 각 well의 내용물을 흡입해내고 조제한 세척액으로 5회 세척한다. (각 well당 300㎕)

11) 세척된 플레이트를 흡습지에 뒤집어 가볍게 쳐서 세척액을 완전히 제거한 다음 8)번에서 조제한 기질액을 각 well에 200㎕씩 넣고 frame을 가볍게 쳐서 잘 혼합한 다음 실온에서 30분간 반응시킨다. 이 반응은 직사광선을 피하여 실시한다.

12) 반응정지액(10번병)을 100㎕씩 각 well에 넣고 플레이트를 가볍게 쳐서 발색물을 균질화한다.

13) 공기를 맹검으로 하고(Air blank) 음성대조액, 양성대조액, 및 검체의 흡광도를 측정한다.

흡광도의 측정은 측정파장 450nm, 참조파장(Reference wavelength)은 620nm로 한다.

흡광도는 반응정지액(10번병)을 넣은 후 30분 이내에 측정한다.

양성대조액의 흡광도 값이 모두 0.8 이상이고, 세개의 음성대조액 중 2개 이상의 흡광도 값이 0.200 이하이면서 그 평균값이 0.000 이상 0.200 이하이어야 한다. 만약 이 기준에 적합하지 않을 경우에는 실험 기술상의 문제나 시약의 변질로 인한 것으로 생각되므로 그 원인을 확인하여 재실험을 실시한다.

1) 판정기준치 (Cut off Value) 산출

가. 음성대조액의 평균값을 구한다.

예) 음성대조액 1의 흡광도값 0.030

음성대조액 2의 흡광도값 0.035

음성대조액 3의 흡광도값 0.025

음성대조액의 평균 흡광도값 (NCX) = ( 0.030＋0.035＋0.025) / 3 = 0.030

나. 판정기준치의 산출

판정기준치 (Cut off value) = NCX＋0.4

= 0.030＋0.4

= 0.430

2) 판정

판정기준치 이상의 흡광도값을 갖는 검체를 양성으로 판정하며, 이 값 미만의 흡광도값을 갖는 검체는 음성으로 판정한다.

** 만일 검체가 판정기준치 ±10%의 흡광도값을 갖는다면 2주후에 다시 혈청을 채취해서 2회 실험을 실시하여 두 번 모두 음성결과를 나타내면 음성으로 판정하고 한 번 이상 양성결과를 나타내면 다른 혈청학적 확인검사(western blot 등)를 통하여 최종 판정한다.