디아키트리플인텍트에취씨지 (T-HCG) - 의약품 상세정보

1) 검체 준비

혈청을 검체로 사용하거나 지방질이 많거나 심하게 용혈 된 검체는 쓸 수 없다. 검체는 2~8℃에서 1~2일 보관이 가능하고 더 장기간 보관하려면 -20℃에 냉동 보관한다.

2) 2차 바이오틴 접합체액 준비

사용하고자 하는 웰 수에 따라 1차 바이오틴 접합체액과 2M 글라이신 완충액을 동량(1:1) 희석하여 2차 바이오틴 접합체액을 제조한다.

3) 기질액 준비

사용하고자 하는 웰 수에 따라 농축 기질액을 기질용 완충액으로 희석하며, 이 때 기질액 : 기질용 완충액은 동량(1:1)으로 희석한다. 즉, 기질액 1㎖에 기질용 완충액 1㎖을 넣어 희석한다.

4) 세척액 준비

진단시험을 시작하기 전 상온에 방치하여 완전히 용해된 20배 농축 세척액을 정제수로 희석하여 필요한 만큼의 세척액을 준비한다. 즉, 농축 세척액 50㎖에 정제수 950㎖을 넣어 희석한다. 세척액은 실온에서 약 30일간 안정하며, 60일 이상 장기 보존 시는 2℃~8℃에 보관하는 것이 안정하다.

- 시약을 약 30분전에 실온에서 예열시키며 사용 전 가볍게 흔들어 잘 섞은 후 사용한다.

- 시험 후 남은 플레이트는 첨부된 비닐포에 실리카겔 포와 함께 잘 밀봉하여 2~8℃에서 냉장 보관한다.

- 각 시약의 유효 기간은 각각의 병에 표기되어 있다.

- 검체는 사용 전에 충분히 혼합한다. 특히 동결되었던 시료는 반드시 혼합기를 이용하여 균질화 시킨 후 사용한다.

- 고농도 검체인 경우는 검체 희석액을 이용하여 미리 희석해둔다.

가. 검사법

1) 각 검사 시, 표준액 농도별로 각각 3개, 정도관리혈청 3개 반복과 검사하고자 하는 검체 수를 결정 한 후 원하는 웰 만큼 스트립을 홀더에 끼운다. 이때 사용하지 않는 웰 들은 자체 밀봉지에 방습제와 함께 밀봉하여 2℃~8℃에 보관하며 스트립의 웰 밑바닥을 손으로 만지지 않도록 주의한다.

2) 표준액, 정도관리혈청 및 검체들을 웰에 가할 위치를 정하여 기록을 한 다음, 기질 blank를 제외한 각 웰들에 10㎕의 표준액과 정도관리혈청 및 검체를 분주한다.

3) 기질 blank를 제외한 모든 웰에 제조된 2차 바이오틴 접합체 200㎕를 분주 한 후 플레이트 밀봉 테이프로 밀봉한다.

4) 37℃(±1℃)에서 60분(±5분) 동안 반응시킨다.

5) 반응 후, 밀봉시킨 플레이트 밀봉 테이프를 벗기고 모든 웰들을 세척액으로 웰을 완전히 채워 4회 세척한 후, 웰 내에 잔류액을 완전히 제거한다. 이때 첫 번째 세척단계에서 각 웰의 내용물을 흡입장치로 완전제거 후 세척액을 가하고 옆 웰로 넘어 들어가지 않도록 주의하면서 나머지 3회 세척단계에서도 세척액이 웰을 완전히 채우도록 하여 세척한다.

6) 모든 웰에 접합체액 100㎕를 분주 한 후 플레이트 밀봉테이프로 밀봉한다.

7) 37℃(±1℃)에서 30분(±5분) 동안 반응시킨다.

8) 반응 후, 밀봉시킨 플레이트 밀봉 테이프를 벗기고 모든 웰들을 세척액으로 웰을 완전히 채워 4회 세척한 후, 웰 내에 잔류액을 완전히 제거한다. 이때 첫 번째 세척단계에서 각 웰의 내용물을 흡입장치로 완전제거 후 세척액을 가하고 옆 웰로 넘어 들어가지 않도록 주의하면서 나머지 3회 세척단계에서도 세척액이 웰을 완전히 채우도록 하여 세척한다.

9) 제조된 기질액을 모든 웰에 100㎕씩 분주한다.

10) 잘 혼합한 후 15~30℃, 암소에서 20분(±1분) 동안 반응한다.

11) 반응 정지액을 모든 웰에 100㎕씩 분주한다.

12) 플레이트 바닥을 부드러운 흡습성 종이로 잘 닦아 습기를 제거한 후 450nm에서 흡광도(O.D.)를 측정한다. 만약 이중 파장 흡광도 측정기를 사용할 경우 보조(reference)파장을 620nm 또는 630nm롤 맞추어 사용한다.

< 검사과정 요약 >

● 임상적 의의

Human chorionic gonadotropin(hCG)은 2개의 다른 α-, β-subunit의 비공유결합으로 되어 있는데, α-subunit는 92개 amino산으로 구성되었고 분자량이 1600 Da이고, β-subunit은 145개 amino산으로 구성되었으며 분자량이 2300 Da이다. hCG의 α-subunit는 뇌하수체 전엽에서 분비되는 TSH, FSH, LH의 α-subunit과 면역학적으로 동일하며 구조도 매우 유사하나 β-subunit는 다른 호르몬과 구분되는 특이성을 가지고 있다. hCG는 태반에서 만들어지는 임신 관련 호르몬으로 임신초기에 가장 최초로 나타나는 호르몬이므로 임신 조기진단용 시약으로 사용되며 절박한 유산 가부 판정, 치료지침, 예후추정, 융모성 질환 또한 이소성 hCG 생산종양의 진단, 치료효과 등에 가장 유력한 정보로 활용된다. 특히 Intact hCG의 경우는 AFP, uE3등과 함께 Triple marker로써 임신중기이후 산전 다운증후군의 검출을 높이는데 주로 사용되고 신경관결손등 선천성 기형의 Screening에도 많이 사용된다. 많은 연구의 발표에 의해서 다운증후군 임신에서 hCG 농도가 증가하는 결과를 보인다.

● 반응원리

이 검사는 비경쟁 반응에 의한 효소 면역 측정법(IEMA)로서 두 개의 서로 다른 hCG 항체를 사용하여 Sandwich를 형성한다. 이 중 하나는 플레이트(Plate)에 스트렙트 아비딘과 접합되어 흡착되어 있고 다른 하나는 효소와 접합되어 있어 첫 번째 반응에서 검체 내 존재하는 Intact-hCG 항원이 플레이트(Plate)에 흡착된 hCG 항체와 결합하고 두 번째 반응에서 이미 결합된 항원-항첼 복합체에 효소가 접합된 hCG 항체가 결합한다. 모두 결합된 복합체의 양은 검체 내 Intact-hCG의 양에 비례하고 이것의 농도를 Spectrophotometer로 흡광도를 측정하여 계산한다.

● 결과 판정

1) 각 표준액과 검체에 대한 O.D. 값을 계산한다.

2) 그래프의 X축을 표준액의 농도(IU/mL)로, Y축을 표준액의 흡광도 값(O.D.)으로 하여 표준곡선을 그린다. 이때 표준곡선은 각 점들 간의 연결 직선으로(Point to Point) 그린다.

3) 표준곡선을 이용하여 시료의 O.D.값에 대해 표준곡선상에서 만나는 점을 찾아내어 이점에 해당하는 가로축(X축)의 값을 읽어 농도 값을 구한다.

4) 표준액의 최고농도인 150 IU/mL 보다 높은 농도를 갖는 검체는 적당히 희석하여 검사를 수행하며, 희석된 검체인 경우 계산된 농도 값에 희석배수를 곱하여 최종농도를 결정한다.

5) 정상범위

**** 결과 계산의 예 ****

※ 아래 값은 실험 결과의 예를 나타낸 단순한 실례이므로 실제 실험 치로 적용해서는 안 된다.