에스디 뎅기 아이지엠 캡쳐 엘리자 (SD Dengue IgM capture ELISA)[수출명 : SD Dengue EDEN ELISA](수출용) - 의약품 상세정보

(1) 혈청만 검체로 사용할 수 있다.

(2) 정맥 천자로 채혈한 혈액을 항응고제가 들어 있지 않은 튜브에 수집한다.

(3) 실온에 약 30분간 방치해 응고가 일어나도록 한 후 원심분리에 의해 상청의 혈청을 분리시킨다.

(4) 분리된 혈청은 2 ~ 8℃에서 보관 시 2주간, -20℃ 이하에서 냉동 보관 시 1년간 사용 가능하다.

(5) 용혈이 심하거나 미생물에 오염된 검체의 경우는 부정확한 결과를 나타낼 수 있으므로 주의한다.

[주의사항]

(1) 시약을 약 30분 전에 실온에 둔다.

(2) 시험 후 남은 항체 흡착플레이트는 자체 은박포에 실리카겔 포와 함께 잘 밀봉하여 2∼8℃에서 냉장 보관한다.

(3) 검체는 사용 전에 충분히 혼합하여 균질화시킨 후 사용한다.

(4) 5회 세척 완료 후 well 내에 남아있을 수 있는 잔여 용액을 완전히 제거한 후 기질반응을 진행한다.

[검체의 준비]

검체의 희석

음성대조액, 양성대조액 및 검사하고자 하는 시료를 희석하기 위하여 테스트 튜브 또는 마이크로 튜브를 준비하고 검체 희석액으로 100배 희석한다. (예 : 혈청검체 10㎕ 와 검체 희석액 990㎕ 을 넣고 잘 섞어준다.)

[시액의 조제]

1) 뎅기 바이러스 항원액 조제

1병의 뎅기 바이러스 항원분말을 효소표지항체 희석액 3 ml로 녹인다.

2) 효소표지항체액 준비

효소표지항체액은 항체 흡착 플레이트에 검체를 분주하기 직전에 준비하여 효소표지항체액의 반응 1시간과 항체 흡착 플레이트에 분주된 검체의 항온 1시간이 동시에 진행되도록 한다.

1)에서 녹인 뎅기 바이러스 항원액과 농축 효소표지항체액 (2배 농축액)을 사용하고자 하는 well 수에 따라 필요한 양만큼 1 : 1로 혼합한다. (예 : 뎅기 바이러스 항원액 3ml과 농축 효소표지항체액 3ml을 넣고 6ml을 만들면 약 60 테스트 분량의 효소표지항체액이 된다.)

3) 세척액의 준비

농축 세척액 (20배 농축액)을 정제수 (탈이온수나 증류수) 로 20배 희석한다. 세척액은 한 well 당 약 350㎕가 소요된다. (예 : 증류수 950ml에 농축세척액 50ml을 첨가하여 세척액을 조제한다.)

4) 기질용액의 준비

기질용액을 사용하고자 하는 well 수에 따라 기질액 A와 기질액 B를 1:1의 비율로 잘 섞은 후 기질반응에 사용한다. (예 : 기질액 A 5ml과 기질액 B 5ml을 잘 섞어 기질용액을 조제한다.)

[조제한 시약의 보관조건 및 사용기간]

[개봉한 시약의 보관조건 및 사용기간]

[검사방법 요약표]

[검사방법]

1) 검사를 시작하기 약 30분전에 시약 구성물 들을 상온에 방치시키고, 사용전 가볍게 흔들어 잘 섞어준 후 사용하고, 플레이트는 상온이 된 후에 개봉하여 사용한다.

2) 검사에 필요한 well 수를 결정하고 사용하고 남은 well 은 자체 은박포에 실리카겔과 함께 밀봉하여 2 ~ 8℃에 보관한다.

3) 음·양성 대조액 및 검사하고자 하는 시료를 검체 희석액으로 100배 희석하여 준비한다.

4) 1병의 뎅기 바이러스 항원분말을 효소표지항체 희석액 3 ml로 녹여 뎅기 바이러스 항원액을 준비한다.

5) 효소표지항체액은 항체 흡착 플레이트에 검체를 분주하기 직전에 준비하여 효소표지항체액의 반응 1시간과 항체 흡착 플레이트에 분주된 검체의 항온 1시간이 동시에 진행되도록 한다.

6) 효소표지항체액의 제조를 위해 농축 효소표지항체액 (2배 농축액)과 상기 4)에서 제조한 뎅기 바이러스 항원액을 1 : 1로 혼합한 후 실온(15~30℃) 에서 1시간 동안 반응시킨다.

7) 상기 3)에서 100배로 희석한 음성 대조액 (3 wells), 양성 대조액 (2 wells) 및 검사하고자 하는 시료를 항체가 코팅된 플레이트 각 well에 100㎕씩 분주하고 잘 혼합한 후 첨부된 밀봉테이프로 밀봉하여 37±1℃ 항온기에서 1시간 반응시킨다.

8) 세척액을 ‘시액의 조제’항에 따라 조제한다.

9) 반응 후 각 well의 내용물을 흡입하고 세척액으로 다음과 같은 방법으로 5회 세척한다. 우선 well 내의 내용물을 흡입장치로 제거한 후, 세척액을 well에 완전히 채우고 (well당 약 350㎕씩) 약 10초 정도 방치한 후, 용액을 흡입하는 방법으로 5회 반복한 다음, well 내에 남아있을 수 있는 잔여 용액을 완전히 제거한다.

10) 세척이 끝난 플레이트에 1시간 전에 조제하여 실온에서 항온시킨 효소표지항체액을 플레이트 각 well에 100㎕씩 분주하고 잘 혼합한 후 첨부된 밀봉테이프로 밀봉하여 37±1℃ 항온기에서 1시간 반응시킨다.

11) 반응 후 각 well의 내용물을 흡입하고 세척액으로 다음과 같은 방법으로 5회 세척한다. 우선 well 내의 내용물을 흡입장치로 제거한 후, 세척액을 well에 완전히 채우고 (well당 약 350㎕씩) 약 10초 정도 방치한 후, 용액을 흡입하는 방법으로 5회 반복한 다음, well 내에 남아있을 수 있는 잔여 용액을 완전히 제거한다.

12) 기질용액을‘시액의 조제’항에 따라 조제한다.

13) 조제한 기질용액을 모든 well에 100㎕씩 분주하고 첨부된 밀봉테이프로 밀봉하고, 실온(15~30℃) 에서 10분 동안 반응시킨다.

14) 반응 정지액을 모든 well 에 각 well 당 100㎕씩 넣고 잘 혼합하여 청색이 노란색으로 완전히 변하도록 한다.

15) 공기를 맹검으로 하여(Air blank) 음성 대조액, 양성 대조액 그리고 각 시료의 흡광도를 측정한다. 이때 흡광도의 측정 파장은 450 nm로 하고, 이중파장흡광도측정기 (dual wavelength reader) 를 사용할 경우 참조파장은 620 nm로 하며 반응 정지액을 넣고 30분 이내에 흡광도 값을 측정 한다.

[결과판정]

(1) 정도관리

가. 음성 대조액의 흡광도 값은 0.000 이상 0.300 이하이어야 하며, 만약 1개의 값이 위 범위를 벗어났을 경우 나머지 2개 값의 평균값으로 산출한다. 만약 2개 이상의 값이 위 범위를 벗어났을 경우 재실험을 하여야 한다.

나. 양성 대조액의 흡광도 값은 1.000 이상이어야 한다. 양성 표준액의 평균 흡광도 값이 위 범위를 벗어난 경우에는 검사과정이나 시약에 문제가 있는 것이므로 그 원인을 확인한 후 재검사 하여야 한다.

(2) 판정 기준값 (Cut-off) 계산 및 판정

가. 음성 대조액 평균값 계산 : 상기 검사방법에 따라 음성 대조액의 흡광도를 얻은 다음 그 세 값의 평균값을 산출한다.

예)

*음성 대조액의 평균 흡광도 : NCx = 0.143/3 = 0.047

나. 양성 대조액 평균값 계산 : 상기 검사방법에 따라 양성 대조액의 흡광도를 얻은 다음 그 두 값의 평균값을 산출한다.

예)

*양성 대조액의 평균 흡광도 : PCx = 4.338/2 = 2.169

다. 판정 기준값 (Cut-off) 계산

음성 대조액 평균흡광도(NCx)값에 0.3을 더하여 판정 기준값을 구한다.

예) NCx + 0.3 = 0.047 + 0.3 = 0.347

라. 결과의 판정

가) 음성 : 판정 기준값 미만의 흡광도값을 나타내는 검체는 음성으로 판정한다.

나) 양성 : 판정 기준값 이상의 흡광도값을 나타내는 검체는 양성으로 판정한다.

◎ 1차 검사에서 양성 판정 검체는 2 wells 이상 재검사하고 재검결과에서 1 well 이상 양성으로 판정되면 최종양성으로 판정한다.