| 성상 | 별첨 |
|---|---|
| 업체명 | 마스트바이오(주) |
| 전문/일반 | 전문의약품 |
| 허가일 | 2008-01-10 |
| 품목기준코드 | 200800432 |
| 표준코드 | 8806727012607, 8806727012614 |
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분변중 Clostridium difficile 독소A, B를 검출하기 위한 정성검사
1. 측정원리
톡소에이/비 퀵첵 검사는 클로스트리디움 디피실 질환이 의심되는 환자의 분변검체로부터 클로스트리디움 디피실 독소A/B를 검출하기위한 신속면역분석법이다.
이 검사는 클로스트리디움 디피실 질환을 검출하기 위한 보조검사로써 사용되어지며 검사 결과는 환자의 병력과 병행하여 고려되어져야한다.
항생제 치료 후 많은 환자들은 경미한 설사부터 심각한 위막성 장염까지 위장관 문제가 발생하였다.
위장관질환과 위막성 장염의 대부분의 경우는 클로스트리디움 디피실의 독소 생성 균주에 기인한 것이다. 이 균주는 일단 정상균주가 항생제에 의하여 변형이 되어져 장관에서 자라는 기회주의적 혐기성세균이다.
비 독성균주가 독소유전자를 발현하지 못하는 반면 클로스트리디움 디피실의 독소생성균주는 독소유전자를 발현한다. 이 질환은 독소생성균주가 생성하는 독소에 의한 것이다.
이 질환과 연관된 임상적 증상은 일차적으로 조직손상 장독소인 독소A에 기인한다.
클로스트리디움 디피실은 또한 이차독소인 독소B를 생성한다. 균주의 세포독소로써 알려져있는 독소B는 조직배양분석에 의해 동정되어지며, 현재 많은 연구소에서 사용되어 진다. 독성 클로스트리디움 디피실 균주는 독소A/B 둘 다 생성하거나 독소B만 생성한다.
톡소에이/비 퀵첵은 클로스트리디움 디피실의 독소A/B의 특이항체를 사용한다.
디바이스는 반응창에 고정화된 항체를 가진 두개의 수평선이 있으며, “T” 검사선은 클로스트리디움 디피실 독소에이/비에 대항하는 항체를 가지고 있으며 "C"대조선은 면역글로블린지 항체가 포함되어져 있다. 접합체는 양고추냉이과산화효소가 결합된 독소에이/비의 항체로 구성되어있다. 시험을 진행하기 위해 검체는 희석액과 접합체 혼합액이 담겨진 시험관에 첨가되어진다. 희석된 검체-접합체혼합액은 15분간 실온에 방치된 디바이스의 검체창에 적하되어진다. 검체에 클로스트리디움 디피실의 독소A/B 항원이 있다면 디바이스의 고정화된 특이항체와 결합하여 발색반응을 형성한다.
2. 유효기간 및 저장방법
유효기간은 각각 해당 라벨에 기재되어있으며 2~8℃에서 보관해야한다.
3. 검체의 채취 및 취급
1) 분변은 채취하여 2-8 ℃에 보관하며, 가능하다면 24시간 안에 검사한다.
2) 만약 채취 후 72시간 이내에 검사를 하지 못한다면 -10℃에서 냉동보관한다.
하지만 냉동과 해동은 검사시 독성의 역가가 떨어져 검사결과에 영향을 미치므로 주의한다.
3) 검체는 분석전에 충분히 혼합하여준다.
4) 장시간 희석액 이나 접합액속에 있던 분변검체는 사용하지 않는다.
4. 검체준비
1) 사용할 모든 시약과 디바이스는 실온에 방치한다.
2) 검체 시험관과 콘트롤 시험관에 각각 라벨을 부착한다.
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3) 눈금이 되어진 검은색 드로퍼를 사용하여 각각 시험관에 희석액 500㎕를 분주한다. ※ 수송배지(Cary Blair 또는 C&S)에 있는 검체를 사용할 경우 희석액을 425㎕를 분주한다. |
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4) 모든 시험관에 접합체를 한방울씩 점적한다. |
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5) 검체를 사용하기전 모든 검체를 충분하게 혼합한다. |
6) 액상-반고형 검체일 경우 : 1회용 플라스틱관을 이용하여 25㎕를 채취하여 희석액/접합제 혼합 시험관에 분주한다.
고형 검체일 경우 : 주의할점은 분변검체의 정확한 양을 취해야 한다는 것이다.
1회용 나무막대를 이용하여 약 2mm정도(25㎕의 액상검체에 해당) 덩어리를 채취한 후 희석액/접합제 혼합시험관에 분주한다.
수송배지(Cary Blair 또는 C&S)의 검체일경우 : 100㎕를 취하여 희석액/접합체 시험관에 분주한다.
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7) 양성대조시험관(+C)에 양성대조액 한방울을 첨가하고, 음성대조시험관(-C)에 희석액을 25㎕를 첨가한다. |
5. 검사과정
1) 사용할 디바이스를 실온에 방치한 후 호일을 벗긴다. 디바이스의 표면에는 왼쪽에는
“C" 오른편에는 ”T" 오른편 상부코너에 검체구로 구성되어 있다.
2) 각각 희석된 검체들을 시험 전에 볼텍스 믹서나 전도혼화하여 잘 섞는다.
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3) 디바이스 검체구에 희석된 검체-접합체 혼합액을 400㎕ 정도 점적한다. 양성대조검체구에 양성대조시약혼합액을 400㎕ 정도 점적한다. 음성대조검체구에 음성대조시약혼합액을 400㎕정도 점적한다. |
| 4) 15분간 실온에 방치한다. 검체가 디바이스를 통해 흡수되어 반응창 쪽으로 퍼질것이다. |
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5) 반응창에 세척완충액을 각각 300㎕씩 점적한 후 세척완충액이 완전 하게 흡수되도록 한다. |
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6) 기질액을 각각 2방울씩 점적한다. 실온에 10분동안 방치한다. |
6. 결과 판정
- 결과의 판정은 반응시간이 끝난 즉시 읽었을 때 가장 신뢰성이 있다.
- 반응창을 통해 나타난 선을 바로 읽는다.
- 내부 양성 정도관리 선이 존재하는 “C"부분에 파란선이 나타난다.
검사선이 존재하는 “T"부분의 파란선을 관찰한다. 밀도에 따라 흐리거나 짙게 나타날 것이다.
1) 양성 : 검사선(T)과 대조선(C)에 파란색선이 나타난다.
부분적인 선이 보여도 양성으로 판정한다.
두 부분이 양성으로 보인다면 C.difficile 독소가 존재하는 것이다.
2) 음성 : 대조선(C)에만 파란색선이 나타난다.
3) 재시험 : 검사선(T)과 대조선(C)이 모두 나타나지 않은 경우, 검사선만 나타나는 경우
(결과판정의 예)
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| 양성 |
음성 |
무효 |
무효 |
7.정도관리
7.1 내부정도관리
- 모든 멤브레인 디바이스로 실험했을 때 반응창의 대조선“C"에 파란색선이 반드시 나타나야한다
- 파란색선은 검체와 시약이 실험방법에 따라 정확하게 이루어졌다는 것을 의미하며, 멤브레인 디바이스를 통해 검체가 적절히 이동했음을 의미한다.
- 결과창에 선이 나타나지 않았다는 것은 검체나 시약의 양 또는 정확한 실험이 이루어지지 않았음을 의미한다.
7.2 외부정도관리
- TOX A/B QUIK CHEK의 반응성은 양성대조액과 음성대조액(희석액)을 사용하여 확인되어 진다.
- 양성대조액은 회색뚜껑을 가진 병으로 제공되어진다.
- 양성대조액은 분석에 관련된 다른시약들의 활성을 확증하는 것이고 분석한계를 위한 정밀성을 확인하기 위한 것은 아니다.
- 희석액은 음성대조액으로 사용한다.
사용상의 주의사항
1) 다른 키트에 포함되어 있는 시약을 혼합하거나 유효기간이 지난 시약을 사용하면 안된다.
2) 모든 시약은 실험하기 전에 실온에 둔다.
3) 뚜껑, 팁과 드로퍼는 각각의 고유색을 가지고 있으므로 임의로 바꿔서 사용하면 안된다.
4) 시약을 냉동하면 안 된다. 키트는 2~8℃에서 보관하여야 한다.
5) 멤브레인 디바이스가 든 파우치는 실험 전에 실온에 둔 후 실험 바로 직전에 개봉하여 사용한다. 멤브레인 디바이스는 사용하기 전에 건조상태를 유지한다.
6) 최적의 결과를 얻기 위해서는 분변 검체 채취 후 72시간 이내에 검사한다.
냉동된 검체는 냉동과 해동을 거치면서 그 활성을 잃을 수도 있다.
7) Cary Blair와 C&S와 같은 수송배지에 있는 검체는 검체준비 설명서에 지정된 것처럼 사용하여야 한다.
8) 정확한 시약의 양을 분주하기 위해서는 시약병을 수직으로 잡는다.
9) 검체와 멤브레인 디바이스는 사용 후 잠재적 위험성을 내포하므로 실험시 일회용 고무장갑을 사용하고 취급에 주의한다. 또한 적절히 취급하고 폐기하여야 한다.
10) 시약은 보존제로써 티메로살을 포함하고 있으므로 취급에 주의한다.
11) 멤브레인 디바이스는 재사용하지 않는다.
12) 시험은 민감도와 특이도를 위해 최적화 되어져있다. 제시된 시험과정이나 조건을 임의로 변경할 경우 민감도와 특이도에 영향을 미칠 수 있으므로 설명서에 제시된 검사과정으로부터 벗어나면 안된다.
13) 시약의 미생물 오염은 분석의 정확도를 감소시킬 수 있다. 시약 분주시 멸균된 일회용 파이펫을 이용하여 미생물의 오염을 피해야 한다.
14) 분변검체 1개 이상을 시험할 때 총 분석시간에 주의한다. 우선 희석액을 가한 후 각각의 희석액 시험관에 접합체를 가한다. 그런 다음 희석액/접합체 시험관에 검체를 가한다. 희석된 검체를 잘 섞은 후 멤브레인 디바이스에 옮긴다. 15분 인큐베이션은 마지막 희석 검체-접합체 혼합액을 멤브레인 디바이스에 넣은 후부터 시작한다.
제품의 한계
1) TOX A/B QUIK CHEK 시험은 분변 중의 C. difficile 독소를 검출하는데 이용되어진다. 이 시험은 분변 중 독소의 존재를 확증하며 이 정보는 환자의 임상병력과 신체검사를 통한 의사의 견해를 참작하여야 한다. TOX A/B QUIK CHEK 시험은 독소A≥0.63ng/mL, 독소B≥1.26ng/mL의 역가 범위를 검출할 것이다.
2) 몇몇 검체는 약한 반응이 나올 수 있다. 이것은 독소의 낮은 역가, 결합물질의 존재, 또는 분변 중 비활성효소와 같은 몇몇 요인에 기인한 것일 수 있다. 이런 조건일 경우, 신선한 검체로 실험하여야 한다. TOX A/B QUIK CHEK과 같이 사용할 수 있는 추가시험에는 toxigenic test나 tissue culture cytotoxicity assay가 있다.
3) 10% formalin, methiolate formalin, sodium acetate formalin 또는 polyvinyl alcohol을 보존제로 사용한 분변검체는 사용할 수 없다.
4) TOX A/B QUIK CHEK 시험은 정성검사법이다. 색의 강도로 정량적으로 판독해서는
안된다.
5) C. sordellii의 몇몇균주는 독소와 관련된 면역학적 생성물로 인해 TOX A/B QUIK CHEK에 반응을 나타낼 것이다.
6) 50%이상의 집락률이 신생아에게서 보고되어졌다. 높은 집락률은 또한 낭포성 섬유종환자에게서도 보고되어졌다.
기대치
항생제와 연관된 설사 환자중 C.difficile과 연관된 질병의 발생률은 10~20%로 보고되었다. 우리의 연구는 발생율이 10~22%범위이다.
TOX A/B QUIK CHEK 시험의 양성유병율은 장소에 따라 다양하고 병원은 이 평가에서 사용된 곳에서 관찰된 것보다 경험율이 낮거나 높을 것이다.
C.difficile 질병은 일차적으로 노년층환자의 원내감염질환이며, 많은 수의 노년층환자 가 있는 병원들은 높은 감염율을 경험할 것이다.
건강한 어른과 50%이상의 건강한 신생아의 많은 수에서 C. difficile 독소 양성율이 나오므로 임상증상과 관련하여 생각하는 것이 매우 중요하다.
제품의 성능 평가
- TOX A/B QUIK CHEK시험은 3군데 미국병원과 사내연구소에서 조직배양과 비교시험 되어졌다.
- 평가에 사용된 검체는 일반적인 시험을 하기 위해 임상연구소에 제공되어졌다.
- 조직배양검사는 사내절차에 따라 시험되어졌다.
- TOX A/B QUIK CHEK에 대한 임상실험은 다음 표와 같다.
표1) 조직배양과 TOX A/B QUIK CHEK시험의 상관성
| N=842 |
조직배양 양성 |
조직배양음성 |
| TOX A/B QUIK CHEK 양성 |
138 |
2 |
| TOX A/B QUIK CHEK 음성 |
15 |
687 |
| 95% Cl |
||
| 민감도 |
90.2% |
84.1-94.2 |
| 특이도 |
99.7% |
98.8-99.9 |
| 기대양성치 |
98.6% |
94.4-99.8 |
| 기대음성치 |
97.9% |
96.4-98.7 |
| 상관성 |
98.0% |
97.8-98.2 |
분석적 민감도
- 시험은 독소A에 대하여 0.63ng/mL, 독소B에 대하여 1.25ng/mL의 농도에 일관되게 양성이 나타난다.
재현성
- TOX A/B QUIK CHEK 의 재현성시험은 알고 있는 양성검체 6개와 음성검체2개를
이용하여 결정하였다.
검사는 3군데 연구소에서 3일동안 실험되어졌다. 실험결과는 기대되는 결과와 100%
일치하였다.
교차반응성
아래의 균주를 mL당 108 또는 그이상 최종농도로 섞은 분변이 TOX A/B QUIK CHEK에 반응하지 않았다.
- 세균 : Aeromonas hydrophila, Bacilus ceresu, Bacillus subtilis, Bacteriodes fragilis, Campylobacter coli, Campylobacter fetus, Campylobacter jujuni, Caqndia albicans, Clostridium bifermentans, Clostridium butyrcum, Clostridium peringes, Clostridium septicum, Clostridium sordellii(nontoxigenic), Clostridium sporogenes, Enterococccus faecalis, Escherichia coli EIEC, Escherichia colii, Escherichia coli 0157 H7, Escherichia coli ETEC, Klebsiella peumoniae, Peptostreptococcus anaerobius, Proteus bulgaris, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium Shigella dysenteriae, Shigella flexneri, Shigella sonnei, Staphylococcus aureus, Staphylococcus aureus (Cowans), Staphylococcus epidermidis, Bivrio parahaemolyticus, Yersinia enterocolitica
- 바이러스 : Adenovirus types 1,2,3,5,40,41, Human coronavirus, Coxsakievirus B2, B3, B4, B5, Echovirus 9,11,18,22,33, Enterovirus type 68,69,70,71 TOX A/B QUIK CHEK 에 반응한 비 C.difficile 균주는 오로지 C. sordellii VPI 9048이었다.
이균주는 독소A,B와 동종인 HT, LT 독소를 생성한다.
간섭물질
다음과 같은 물질은 표시된 농도로 분변에 존재하여도 결과에 아무런 영향을 주지 않았다.
- 뮤신(3.5%), 혈액(40% v/v), 황산바륨(5% w/v), Imodium(5%,v/v), Kaopectate
(5mg/mL), Pepto-Bismol(5% w/v), steric/palmitic acid(40% w/v), Metronidazole
(0.25% w/v), 반코마이신(0.25% w/v)
| 저장방법 | 2-8℃ |
|---|---|
| 사용기간 | 제조일로부터 9개월 |
| 재심사대상 | |
| RMP대상 | |
| 포장정보 | 25개/박스 |
| 보험코드 | |
| 보험약가 | |
| 보험적용일 |
서울 부산 인천 대구 광주 대전 울산 경기 강원 충북 충남 전북 전남 경북 경남 제주 세종시