리아키안티-티피오알아이에이 - 의약품 상세정보

가. 혈청을 검체로 하며, 혈구나 혈액 응고 성분, 지방질이 많은 경우 원 심하여 완전히 제거한다. 또한 심하게 용혈된 검체는 위양성을 보일 수 있으므로 사용하지 않는다.

나. 검체내 보존제 중 아지드나트륨이 함유되어 있을 경우 위양성 또는 위음성을 보일 수 있으므로 주의한다.

가. 모든 시약은 실험 시작 30분전 실온에 둔다.

나. 세척액의 조제

농축 세척액을 정제수로 50배 희석하여 필요한 양만큼 준비한다.

예) 필요량이 1000 ml일 경우 농축 세척액 20 ml에 정제수 980 ml를 넣어 총 부피가 1000 ml가 되도록 한 다음 잘 섞는다.

※ 농축 세척액은 냉장 보관 상태에서 결정이 생길 수도 있다. 이 경우에는 37℃ ± 1℃ 항온 수조에서 녹인 다음 사용한다.

가. 검사 전 준비사항

1) 모든 시약은 실험 시작 30분 전에 실온에 두고 사용 전 가볍게 흔들어 잘 섞은 후 사용한다.

2) 사용 후 남은 튜브는 첨부된 비닐포에 실리카겔포와 함께 잘 밀봉하여 2~8℃에 보관한다.

3) 검체는 사용 전에 충분히 혼합한 다음 사용한다. 특히 동결되었던 검체는 반드시 균질화시킨 후 사용한다.

나. 검사 방법

1) 시험에 필요한 수량만큼 튜브를 꺼내어 튜브 홀더에 고정시킨다.

2) 시험할 항체흡착 튜브를 표준액은 각 농도마다 2개, 정도관리 혈청은 2개 이상, 그리고 검체는 각 1개를 기준으로 준비한다.

3) 각 농도의 표준액과 정도관리혈청 그리고 검체를 각각의 항체흡착튜브에 20 μl씩 가한다.

4) 모든 항체흡착 튜브에 ¹²⁵I 접합체액 200 μl를 가한다. 단 이 과정에서 항체흡착 튜브 벽면에 액이 묻지 않도록 주의 한다.

5) 모든 항체흡착 튜브를 호일로 덮고 실온에서 150 rpm으로 90±5분동안 반응시킨다.

6) 모든 항체흡착 튜브의 반응 후 남은 시약을 주의하여 흡입한 후 버린다.

7) 각 항체흡착 튜브당 세척액 2 ml를 가하고 흡입하여 버리는 과정을 1회 반복한다.

8) 감마 카운터에서 1분간 표준액과 정도관리혈청, 그리고 검체 항체흡착 튜브의 반응 방사능량(cpm)을 측정한다. 이 때 접합체의 유효기 간(Total Activity)을 확인하기 위해 일반시험 튜브에 접합체액 200 μl를 넣고 방사능량을 측정한다.

< 검사과정 요약 >

가. 각 표준액과 검체에 대한 cpm을 계산한다.

나. 그래프의 X축을 표준액의 농도로, Y축을 표준액의 cpm으로 하여 표준곡선을 그린다.

다. 표준곡선을 이용하여 검체의 cpm에 대한 농도값을 계산한다.

라. 계산해서 나온 농도값이 30 U/ml 이하이면 음성으로 판정되고, 50U/ml이상이면 양성이라고 판정된다. 30 ~ 50 U/ml 사이의 값은 위양성 또는 위음성 반응을 보일 수 있으므로 재검을 실시하여 그 결과를 최종 판정한다.

마. 결과 계산의 예

※ 아래 값은 실험 결과의 예를 나타낸 단순한 실례이므로 실제 실험시 적용해서는 안 된다.

1) 실험 결과

2)표준 곡선 그래프

가. 검체의 농도가 표준액의 최고 농도인 3000U/ml보다 높을 경우, 검체를 희석(10배, 50배, 100배)하여 검사를 수행하며, 희석된 검체인 경우 계산된 농도 값에 희석 배수를 곱하여 최종 농도를 결정한다.

나. 상기 검사에서 양성반응을 보인 경우 두 개의 튜브를 반복 검사하여 하나 이상 양성 반응을 보이면 최종 양성으로 판정한다.

동 제품의 반응 원리는 방사성 동위원소를 붙인 항원에 검체에 있는 TPO 자가항체와 튜브에 코팅된 TPO 항체가 서로 결합하려고 하는 경쟁적 방사성 면역 측정법이다.

1) 쥐 모노클로날 TPO 항체(Mouse monoclonal TPO)가 흡착된 tube에 검체인 항체를 넣어준다.

2) ¹²⁵I가 표지된 TPO 항원을 넣어준다.

3) 검체에 있는 TPO Ab와 튜브에 흡착된 TPO Ab가 항원과 결합하기 위하여 경쟁적으로 반응한다.

4) 결합하지 못한 항원-항체는 세척을 통하여 제거한다.

5) 감마카운터로 radioactivity를 측정하여 튜브에 있는 Thyroperoxidase autoantibodies(TPO Ab)의 농도를 측정한다.

6) 검체내에 TPO 항체의 농도가 낮으면 방사능 표지된 항원이 튜브에 있는 TPO 항체와 결합을 더 잘하게 되어 cpm 값이 높게 나오고, cpm 값이 낮으면 검체내에 TPO Ab가 많이 존재하여 방사능 표지된 TPO 항원의 침전이 줄어든 것이다.