리아키TgAb RIA - 의약품 상세정보

가. 혈청을 검체로 하며, 혈구나 혈액 응고 성분, 지방질이 많은 경우 원심하여 완전히 제거한다. 또한 심하게 용혈된 검체는 위양성을 보일수 있으므로 사용하지 않는다. 검체내 보존제 중 아지드나트륨이 함유되어 있을 경우 위양성 또는 위음성을 보일 수 있으므로 주의한다.

가. 모든 시약은 실험 시작 30분전 실온에 둔다.

나. 세척액의 조제

농축 세척액을 증류수로 50배 희석하여 필요한 양만큼 준비한다.

예) 필요량이 1000ml일 경우 농축 세척액 20ml에 증류수나 이온 정제수 980ml를 넣어 총 부피가 1000ml가 되도록 한 다음 잘 섞는다.

※ 농축 세척액은 냉장 보관 상태에서 결정이 생길 수도 있다. 이 경우에는 37℃ ± 1℃ 항온 수조에서 녹인 다음 사용한다.

가. 검사 전 준비사항

1) 모든 시약은 실험 시작 30분전에 실온에 두고 사용 전 가볍게 흔들어 잘 섞은 후 사용한다.

2) 사용 후 남은 튜브는 첨부된 비닐포에 방습제와 함께 잘 밀봉하여 2~8℃에 보관한다.

3) 검체는 사용 전에 충분히 혼합한 다음 사용한다. 특히 동결되었던 검체는 반드시 균질화시킨 후 사용한다.

나. 검사 방법

1) 시험에 필요한 양만큼 튜브를 꺼내어 튜브 홀더에 고정시킨다.

2) 시험할 항체흡착 튜브를 표준액은 각 농도마다 2개 , 정도관리 혈청2개, 그리고 검체는 각 1개를 기준으로 준비한다.

3) 각 농도의 표준액과 검체 그리고 정도관리혈청을 각각의 항체흡착 튜브에 20㎕씩 가한다. 단, 이 과정에서 항체흡착 튜브 벽면에 액이 묻지 않도록 주의한다.

4) 모든 항체흡착 튜브에 tracer액 200㎕ 을 가한다.단, 이 과정에서 항체흡착 튜브 벽면에 액이 묻지 않도록 주의한다.

5) 잘 혼합하고 실온 200rpm Shaking에 90분동안 반응시킨다.

6) 모든 항체흡착 튜브의 반응 후 남은 시약을 주의하여 흡입 후 버린다.

7) 각 항체흡착 튜브당 세척액을 2ml 가하고 다시 흡입하여 버린다.

8) 감마카운터에서 1분간 각 표준액과 정도관리혈청 그리고 검체 항체흡착튜브의 반응 방사능량(cpm)을 측정한다. 이 때 tracer액의 유효기간을 확인하기위해 Total activity측정용 일반 시험용 튜브에 tracer액 200㎕넣고 전체 방사능량을 측정한다.

< 검사과정 요약 >

가. 각 표준액과 검체에 대한 cpm값을 계산한다.

나. 표준 곡선 작성을 위하여 X축을 표준액 농도(IU/ml)로, Y축을 표준액의 cpm값으로 하여 표준 곡선을 그린다.

다. 표준 곡선을 이용하여 검체의 cpm 값을 대입하여 농도값을 산출한다.

라. 검체의 농도값 30 IU/ml 이하는 음성, 70 IU/ml이상은 양성으로 판정하고 30~70 IU/ml 사이의 값은 2회 재검 후에도 동일한 범위일 경우 “판정불가”로 판정한다.

마. 결과 계산의 예

※ 아래 값은 실험 결과의 예를 나타낸 단순한 실례이므로 실제 실험시 적용해서는 안 된다.

1) 실험 결과

2) 표준 곡선 그래프

가. 검체의 희석농도가 표준액의 최고 농도인 2000 IU/ml보다 높을 경우, 검체를 희석(10배,50배,100배)하여 검사를 수행하며, 희석된 검체인 경우 계산 된 농도 값에 희석배수를 곱하여 최종농도를 결정한다.

나. 상기 검사에서 양성반응을 보인 경우 두 개의 tube를 반복검사하여 하나 이상 양성 반응을 보이면 최종 양성으로 판정한다

동 제품의 반응 원리는 방사성 동위원소를 붙인 항원에 검체에 있는 티로글로불린 자가항체(Thyroglobulin autoantibodies, Tg Ab)와 튜브에 코팅된 티로글로불린 항체가 서로 결합하려고 하는 경쟁적 방사성 면역 측정법이다.

1) 쥐 모노클로날 티로글로불린 (Mouse monoclonal Tg) 항체가 흡착된 튜브에 검체인 티로글로불린 항체를 넣어준다.

2) I-125가 표지된 Tg항원을 넣어준다.

3) 검체에 있는 Tg Ab와 튜브에 흡착된 Tg Ab가 항원과 결합하기 위하여 경쟁적으로 반응한다.

4) 결합하지 못한 항원-항체는 세척을 통하여 제거한다.

5) 감마카운터로 방사능(radioactivity)를 측정하여 튜브에 있는 티로글로불린 자가항체(Tg Ab)의 농도를 측정한다.

6) 검체내에 Tg 항체의 농도가 낮으면 방사능 표지된 항원이 튜브에 있는 Tg 항체와 결합을 더 잘하게 되어 cpm값이 높게 나오고, cpm값이 낮으면 검체내에 Tg Ab가 많이 존재하여 방사능 표지된 Tg항원의 침전이 줄어든 것이다.