에스디 치쿤군야 아이지엠 엘리자 (SD Chikungunya IgM ELISA)(수출용) - 의약품 상세정보

1) 검체 준비

(1) 혈청만 검체로 사용할 수 있다.

(2) 정맥 천자로 채혈한 혈액을 항응고제가 들어 있지 않은 튜브에 수집한다.

(3) 실온에 약 30분간 방치해 응고가 일어나도록 한 후 원심분리에 의해 상청의 혈청을 분리시킨다.

(4) 분리된 혈청은 2 ~ 8℃에서 보관 시 2주간, -20℃ 이하에서 냉동 보관 시 1년간 사용 가능하다.

(5) 용혈이 심하거나 미생물에 오염된 검체의 경우는 부정확한 결과를 나타낼 수 있으므로 주의한다.

2) 검사 과정

[주의사항]

(1) 시약을 약 30분 전에 실온에 둔다.

(2) 시험 후 남은 항원 흡착플레이트는 자체 은박포에 실리카겔 포와 함께 잘 밀봉하여 2∼8℃에서 냉장 보관한다.

(3) 검체는 사용 전에 충분히 혼합하여 균질화시킨 후 사용한다.

(4) 5회 세척 완료 후 well 내에 남아있을 수 있는 잔여 용액을 완전히 제거한 후 기질반응을 진행한다.

[검체의 준비]

검체의 희석

음성대조액, 양성대조액 및 검사하고자 하는 시료를 희석하기 위하여 테스트 튜브 또는 마이크로 튜브를 준비하고 검체 희석액으로 100배 희석한다. (예 : 혈청검체 10㎕ 와 검체 희석액 990㎕ 을 넣고 잘 섞어준다.)

[시액의 조제]

1) 효소표지항체액 준비

농축 효소표지항체액 (101배 농축액)과 효소표지항체 희석액을 사용하고자 하는 well 수에 따라 필요한 양만큼 1 : 100 으로 혼합한다. (예 : 효소표지항체액 1000ml 에 농축 효소표지항체액 (101배 농축액) 10ml을 첨가하여 효소표지항체액을 조제한다.)

2) 세척액의 준비

농축 세척액 (20배 농축액)을 정제수 (탈이온수나 증류수) 로 20배 희석한다. 세척액은 한 well 당 약 350㎕가 소요된다. (예 : 증류수 950ml에 농축세척액 50ml을 첨가하여 세척액을 조제한다.)

3) 기질용액의 준비

기질용액을 사용하고자 하는 well 수에 따라 기질액 A와 기질액 B를 1:1의 비율로 잘 섞은 후 기질반응에 사용한다. (예 : 기질액 A 5ml과 기질액 B 5ml을 잘 섞어 기질용액을 조제한다.)

[조제한 시약의 보관조건 및 사용기간]

[개봉한 시약의 보관조건 및 사용기간]

[검사방법 요약표]

[검사방법]

1) 검사를 시작하기 약 30분전에 시약 구성물 들을 상온에 방치시키고, 사용 전 가볍게 흔들어 잘 섞어준 후 사용하고, 플레이트는 상온이 된 후에 개봉하여 사용한다.

2) 검사에 필요한 well 수를 결정하고 사용하고 남은 well 은 자체 은박포에 실리카겔과 함께 밀봉하여 2 ~ 8℃에 보관한다.

3) 음·양성 대조액 및 검사하고자 하는 시료를 검체 희석액으로 100배 희석하여 준비한다.

4) 상기 3)에서 100배로 희석한 음성 대조액 (3 wells), 양성 대조액 (2 wells) 및 검사하고자 하는 시료를 항체가 코팅된 플레이트 각 well에 100㎕씩 분주하고 잘 혼합한 후 첨부된 밀봉테이프로 밀봉하여 37±1℃ 항온기에서 30분 간 반응시킨다.

5) 효소표지항체액의 제조를 위해 농축 효소표지항체액 (101배 농축액)과 효소표지항체 희석액을 1 : 100 으로 혼합하여 준비한다.

6) 세척액을 ‘시액의 조제’항에 따라 조제한다.

7) 반응 후 각 well의 내용물을 흡입하고 세척액으로 다음과 같은 방법으로 5회 세척한다. 우선 well 내의 내용물을 흡입장치로 제거한 후, 세척액을 well에 완전히 채우고 (well당 약 350㎕씩) 약 10초 정도 방치한 후, 용액을 흡입하는 방법으로 5회 반복한 다음, well 내에 남아있을 수 있는 잔여 용액을 완전히 제거한다.

8) 세척이 끝난 플레이트에 희석된 효소표지항체액을 흡착 플레이트 각 well에 100㎕씩 분주하고 잘 혼합한 후 첨부된 밀봉테이프로 밀봉하여 37±1℃ 항온기에서 30분 간 반응시킨다.

9) 반응 후 각 well의 내용물을 흡입하고 세척액으로 다음과 같은 방법으로 5회 세척한다. 우선 well 내의 내용물을 흡입장치로 제거한 후, 세척액을 well에 완전히 채우고 (well당 약 350㎕씩) 약 10초 정도 방치한 후, 용액을 흡입하는 방법으로 5회 반복한 다음, well 내에 남아있을 수 있는 잔여 용액을 완전히 제거한다.

10) 기질용액을‘시액의 조제’항에 따라 조제한다.

11) 조제한 기질용액을 모든 well에 100㎕씩 분주하고 첨부된 밀봉테이프로 밀봉하고, 실온(15~30℃) 에서 10분 동안 반응시킨다.

12) 반응 정지액을 모든 well 에 각 well 당 100㎕씩 넣고 잘 혼합하여 청색이 노란색으로 완전히 변하도록 한다.

13) 공기를 맹검으로 하여(Air blank) 음성 대조액, 양성 대조액 그리고 각 시료의 흡광도를 측정한다. 이때 흡광도의 측정 파장은 450 nm로 하고, 이중파장흡광도측정기 (dual wavelength reader) 를 사용할 경우 참조파장은 620 nm로 하며 반응 정지액을 넣고 30분 이내에 흡광도 값을 측정 한다.

[결과판정]

(1) 정도관리

가. 음성 대조액의 흡광도 값은 0.005 이상 0.100 이하이어야 하며, 만약 1개의 값이 위 범위를 벗어났을 경우 나머지 2개 값의 평균값으로 산출한다. 만약 2개 이상의 값이 위 범위를 벗어났을 경우 재실험을 하여야 한다.

나. 양성 대조액의 흡광도 값은 0.500 이상이어야 한다. 양성 표준액의 평균 흡광도 값이 위 범위를 벗어난 경우에는 검사과정이나 시약에 문제가 있는 것이므로 그 원인을 확인한 후 재검사 하여야 한다.

(2) 판정 기준값 (Cut-off) 계산 및 판정

가. 음성 대조액 평균값 계산 : 상기 검사방법에 따라 음성 대조액의 흡광도를 얻은 다음 그 세 값의 평균값을 산출한다.

예)

*음성 대조액의 평균 흡광도 : NCx = 0.143/3 = 0.047

나. 양성 대조액 평균값 계산 : 상기 검사방법에 따라 양성 대조액의 흡광도를 얻은 다음 그 두 값의 평균값을 산출한다.

예)

*양성 대조액의 평균 흡광도 : PCx = 4.338/2 = 2.169

다. 판정 기준값 (Cut-off) 계산

음성 대조액 평균흡광도(NCx)값에 0.3을 더하여 판정 기준값을 구한다.

예) NCx + 0.3 = 0.047 + 0.3 = 0.347

라. 결과의 판정

가) 음성 : 판정 기준값 미만의 흡광도값을 나타내는 검체는 음성으로 판정한다.

나) 양성 : 판정 기준값 이상의 흡광도값을 나타내는 검체는 양성으로 판정한다.

◎ 1차 검사에서 양성 판정 검체는 2 wells 이상 재검사하고 재검결과에서 1 well 이상 양성으로 판정되면 최종양성으로 판정한다.