에스디 말라리아 항체 엘리자 (SD Malaria Ab ELISA)(수출용) - 의약품 상세정보

1) 검체의 준비 및 보관, 재사용

(1) 혈청만 검체로 사용할 수 있다.

(2) 정맥 천자로 채혈한 혈액을 항응고제가 들어 있지 않은 튜브에 수집한다.

(3) 실온에 약 30분간 방치해 응고가 일어나도록 한 후 원심분리에 의해 상청의 혈청을 분리시킨다.

(4) 용혈이 심하거나 미생물에 오염된 검체의 경우는 부정확한 결과를 나타낼 수 있으므로 주의한다.

(5) 분리된 혈청은 2 ~ 8℃에서 보관 시 3일간, -20℃ 이하에서 냉동 보관 시 1년간 사용 가능하다.

(6) 검체는 사용 전에 충분히 혼합한다. 특히 동결되었던 시료는 반드시 혼합기를 이용하여 균질화 시킨 후 사용한다.

2) 시약의 준비 및 보관

[시액의 조제]

1) 세척액의 준비

농축 세척액 (10배 농축액)을 정제수 (탈이온수나 증류수) 로 10배 희석한다. 세척액은 한 well 당 약 350㎕가 소요된다. (예 : 증류수 450ml에 농축세척액 50ml을 첨가하여 세척액을 조제한다.)

2) 기질용액의 준비

기질용액을 사용하고자 하는 well 수에 따라 기질액 A와 기질액 B를 1:1의 비율로 잘 섞은 후 기질반응에 사용한다. (예 : 기질액 A 5ml과 기질액 B 5ml을 잘 섞어 기질용액을 조제한다.)

[조제한 시액의 보관조건 및 사용기간]

[개봉한 시약의 보관조건 및 사용기간]

3) 키트의 보관

(1) 키트는 2 ~ 8℃에서 냉장 보관한다.

(2) 키트는 밀봉된 상태에서 패키지 또는 각 시약의 라벨에 인쇄된 사용기간까지 안정하 다.

[검사방법 요약표]

[검사방법]

1)검사에 필요한 well 수를 결정(음성 대조액 3 wells, 양성 대조액 2 wells 및 검사하고자 하는 시료) 하고 사용하고 남은 well 은 자체 은박포에 실리카겔과 함께 밀봉하여 2 ~ 8℃에 보관한다.

2) 음성 대조액, 양성 대조액 및 검사하고자 하는 시료를 항원이 코팅된 플레이트 각 well에 10㎕씩 분주하고 잘 혼합한다.

3) 상기 2)의 시료가 분주된 플레이트에 검체 희석액을 플레이트 각 well에 100㎕씩 분주하고 잘 혼합한다.

4) 첨부된 밀봉테이프로 밀봉하여 37±1℃ 항온기에서 60분 간 반응시킨다.

5) 세척액을 ‘시액의 조제’항에 따라 조제한다.

6) 반응 후 각 well의 내용물을 흡입하고 세척액으로 다음과 같은 방법으로 5회 세척한다. 우선 well 내의 내용물을 흡입장치로 제거한 후, 세척액을 well에 완전히 채우고 (well당 약 350㎕씩) 약 10초 정도 방치한 후, 용액을 흡입하는 방법으로 5회 반복한 다음, well 내에 남아있을 수 있는 잔여 용액을 완전히 제거한다.

6-1) 세척 과정

가. 자동 세척

(1) 자동 세척기를 이용하여 5회 세척한다.

(2) 5회의 세척 과정이 끝나면, 플레이트를 뒤집어 흡습타월에 대고 털어서, 완전히 세척액이 제거될 수 있도록 한다 .

나. 수동 세척

(1) 적당한 용기를 사용하여 각 well의 잔여 용액을 완전히 제거한다.

(2) 각 well에 희석된 세척액 350 ㎕씩 분주한다. 이 때, 세척액에 거품이 생기지 않도 록 주의한다. 분주 후 즉시 세척액을 제거한다.

(3) 위 (2)번 과정을 4번 더 반복하여, 총 5회 세척한다.

(4)마지막 세척 과정이 끝난 후, 플레이트를 뒤집어 흡습지에 대고 털어서, 완전히 세 척액이 제거될 수 있도록 한다 .

7) 세척이 끝난 플레이트에 효소표지 항원액을 흡착 플레이트 각 well에 100㎕씩 분주하고, 잘 혼합한다.

8) 첨부된 밀봉테이프로 밀봉하여 37±1℃ 항온기에서 30분 간 반응시킨다.

9) 반응 후 각 well의 내용물을 흡입하고 세척액으로 다음과 같은 방법으로 5회 세척한다. 우선 well 내의 내용물을 흡입장치로 제거한 후, 세척액을 well에 완전히 채우고 (well당 약 350㎕씩) 약 10초 정도 방치한 후, 용액을 흡입하는 방법으로 5회 반복한 다음, well 내에 남아있을 수 있는 잔여 용액을 완전히 제거한다.

10) 기질액 A, B용액을‘시액의 조제’항에 따라 조제한다.

11) 조제한 기질용액을 모든 well에 100㎕씩 분주한 후, 첨부된 밀봉테이프로 밀봉하고, 실온(15~30℃) 에서 10분 동안 반응시킨다.

*주의) 기질액 A, B용액의 혼합 과정 중에 작은 결정이 생기면, 다시 한 번 잘 섞어준다.

12) 반응 정지액을 모든 well 에 각 well 당 100㎕씩 넣고 잘 혼합하여 청색이 노란색으로 완전히 변하도록 한다.

13) 공기를 맹검으로 하여(Air blank) 음성 대조액, 양성 대조액 그리고 각 시료의 흡광도를 반응 정지액 주입 후, 30분 이내에 측정한다. 이때 흡광도의 측정 파장은 450 nm로 하고, 이중파장흡광도측정기 (dual wavelength reader) 를 사용할 경우 참조파장은 620 nm로 하여 측정 한다.

(1) 정도관리

가. 음성 대조액의 흡광도 값은 0.005 이상 0.150 이하이어야 하며, 만약 1개의 값이 위 범위를 벗어났을 경우 나머지 2개 값의 평균값으로 산출한다. 만약 2개 이상의 값이 위 범위를 벗어났을 경우 재실험을 하여야 한다.

나. 양성 대조액의 흡광도 값은 1.000 이상이어야 한다. 양성 표준액의 평균 흡광도 값이 위 범위를 벗어난 경우에는 검사과정이나 시약에 문제가 있는 것이므로 그 원인을 확인한 후 재검사 하여야 한다.

(2) 판정 기준값 (Cut-off) 계산 및 판정

가. 음성 대조액 평균값 계산 : 상기 검사방법에 따라 음성 대조액의 흡광도를 얻은 다음 그 세 값의 평균값을 산출한다.

예)

*음성 대조액의 평균 흡광도 : NCx = 0.143/3 = 0.047

나. 양성 대조액 평균값 계산 : 상기 검사방법에 따라 양성 대조액의 흡광도를 얻은 다음 그 두 값의 평균값을 산출한다.

예)

*양성 대조액의 평균 흡광도 : PCx = 4.338/2 = 2.169

다. 판정 기준값 (Cut-off) 계산

음성 대조액 평균흡광도(NCx)값에 0.100 을 더하여 판정 기준값을 구한다.

예) NCx + 0.100 = 0.047 + 0.100 = 0.147

(3)결과의 판정

가) 음성 : 판정 기준값 미만의 흡광도값을 나타내는 검체는 음성으로 판정한다.

검체 내에 검출 가능한 말라리아 항체가 없음을 의미한다.

나) 양성 : 판정 기준값 이상의 흡광도값을 나타내는 검체는 양성으로 판정한다.

검체 내에 검출 가능한 말라리아 항체가 존재함을 의미한다.

*주의 1) O.D 값이 0.1 이상 0.3 이하이면, 해당 샘플은 재검사한다.

2) 1차 검사에서 판정 기준값과 동등 이상의 결과를 나타낸 검체는 2 wells 이상 재검사하고, 재검시에도 판정 기준값과 동등 이상의 결과를 나타낸 검체는 다른 검사법을 이용하여 확진 후, 최종 판정한다.

(1) 시험 방법, 주의 사항, 결과 판정을 반드시 숙지한 후, 실험을 진행하여야 한다.

(2) 검체 취급 관련 주의사항

1) 검체에 함유된 아지드화 나트륨은 시험 결과에 영향을 미치지 않는다.

2) 저온 살균된 시료(60℃에서 10 시간 이상)는 반응성이 저하될 수 있으므로 사용하지 않는다

3) 열처리에 의한 불활화 (56℃에서 1 시간) 는 시험 결과에 영향을 미치지 않는다.

4) 검체 채취 시 넣어주는 전형적인 항응고제 (EDTA, citrate, 헤파린) 는 실험 결과에 영향을 미치지 않는다.

5) 용혈이 심하거나 미생물에 오염된 검체의 경우는 부정확한 결과를 나타낼 수 있으므로 주의한다.

6) 시료에 포함된 류머티즘인자나 황달 치료제는 시험 결과에 영향을 미치지 않는다.

(3) 실험 중 시료가 제대로 들어가지 않으면 음성 결과를 나타낼 수 있으므로, 임상적으로 양성이 의심되는 시료가 음성 결과를 나타낸 경우 재시험 해야 한다.