마이코스크린플러스 - 의약품 상세정보

1) 자궁경부 및 질

Dacron 또는 레이온스왑 또는 사이토블러쉬로 검체를 얻는다.

자궁경부의 경우 검체 채집 전에 분비물을 제거하기 위하여 다른 스왑으로 주의하여 닦아낸 후 새 스왑으로 검체를 채취한다.

마이코플라즈마는 점막세포에 강하게 붙어 있으므로, 채취시 좋은 검체를 얻기 위하여 점액층을 잘 긁어내야 한다.

2) 요도

요도 부위를 깨끗이 한 후 스왑이나 스크레이프로 세포를 얻는다.

3) 정액, 뇨

멸균 튜브나 병에 정액이나 최초 배뇨물을 얻는다.

4) 위분비물

신생아로부터 카테타를 통해 위분비물을 흡인하여 멸균병에 옮긴다.

스왑 검체 : UMMt 바이알에 스왑을 넣는다.

액체 검체 : UMMt 바이알에 검액 200㎕를 접종한다.

접종된 UMMt는 실온(18~25℃)에서 8시간 또는 2~8℃에서는 16시간 동안 보관할 수 있다.

- 모든 시약은 바로 사용할 수 있도록 준비한다. 각 바이알은 키트의 사용기한까지 원포장 안에 2~8℃에서 보관한다.

- 트레이에서 1줄, 2줄 또는 3줄만 사용했다면, 나머지는 원래의 알루미늄포장 안에 넣고 밀봉하면 2~8℃에서 3주까지 보관할 수 있다.

- M.h. supplement는 개봉 후 3개월간 안정하다.

검체 채집 기구(스왑, 사이토블러쉬, 액체검체를 위한 멸균용기 등)

피펫 및 팁

감염 폐기물을 위한 휴지통

파라핀 오일

37±1℃ 배양기

A7 한천배지 (#00079 또는 #00090)

1) 시약 준비

모든 시약은 실온이 되게 한다.

검사할 검체의 수에 맞춰 트레이를 준비하여 각각 라벨링한다.

2) UMM배지에의 접종

검체 스왑 또는 액체 검체 200㎕를 UMMt배지에 접종하여 잘 섞고 UMMt배지 전체를 UMMlyo바이알에 넣고 잘 섞는다. 빈 UMMt 바이알을 버리지 않는다.

3)트레이 웰로의 접종

- (U.u.)웰과 (M.h.)웰에 다음의 순서로 배분한다.

(U.u.)웰 : 접종된 UMMlyo 100㎕

(M.h.)웰 : 접종된 UMMlyo 100㎕

M.h. Supplement 50㎕

- 각각의 웰에 파라핀오일 2방울을 가한다.

- 접종된 UMMlyo배지에서 500㎕를 취하여 빈 UMMt바이알로 옮긴다.

- 양성 스크리닝/검출 결과의 경우 A7 한천배지 배양을 시행 할 수 있게 하기 위해, 바이알에 남은 접종된 UMMlyo는 2~8℃에서 보관한다.

주의 : 어떤 M. hominis 균주는 약한 효소활성을 나타낸다. 10⁴CCU/mL 이상의 농도를 가진 균주에 M.h. Supplement 한방울을 가하면 24시간 내에 색의 변화를 눈으로 볼 수 있다.

4) 트레이 배양

트레이 웰과 UMMt바이알을 37±1℃에서 24시간 동안 배양한 후 결과를 읽는다.

계수를 하기 위해서는 24시간 이내에 결과를 읽는다.

10⁴CCU/mL보다 낮은 농도를 갖거나 약한 효소활성을 갖는 균주를 확인하기 위해서는 48시간까지 배양시간을 연장한다.

1)밸리데이션

(U.u.)웰 및 (M.h.)웰이 모두 투명한지 검사한다. 웰에 혼탁이 있다면 세균감염이 있음을 나타낸다. 이 경우 시험을 반복한다.

2)판독 및 해석

서로 다른 웰의 색깔로 결과를 판독한다.

비뇨생식기계의 마이코플라스마 증식은 배지의 알칼리화, 즉 웰의 색깔이 노란색에서 빨간색으로 변하는 것으로 확인된다.

배지가 노란색으로 남아있는 경우는 비뇨생식계의 마이코플라스마 증식이 없음을 나타낸다.

오렌지색인 경우 양성으로 간주해야 한다.

(1) 24시간 이내의 판독

U.u.웰이 빨간색으로 변색 : 검체 내 Ureaplasma urealyticum이 발병가능비율 이상(≥10⁴CCU/mL)으로 존재할 가능성이 큼

M.h.웰이 빨간색으로 변색 : 검체 내 Mycoplasma hominis가 발병가능비율 이상(≥10⁴CCU/mL)으로 존재할 가능성이 큼

U.u.웰과 M.h.웰이 빨간색으로 변색 : 검체 내 U.u. 및 M.h.가 발병가능비율 이상(≥10⁴CCU/mL)으로 존재할 가능성이 큼

주의 : U.u. 또는 M.h.의 농도가 매우 진하면 두 웰의 배지 색을 변화시킬 수 있다.

U.u.웰 및 M.h.웰은 노란색이고 UMMt바이알은 빨간색 : 마이코플라스마가 10⁴CCU/mL보다 낮은 비율로 존재함. 이 경우 자궁경부 또는 요도에서 채집한 검체를 제외한 관련검체를 A7 한천배지에 접종한다.

U.u.웰 및 M.h.웰이 노란색이고 UMMt바이알도 노란색 : 마이코플라스마가 존재하지 않거나 10³CCU/mL보다 낮은 비율로 존재함.

트레이와 바이알을 재배양한다.

(2) 48시간 이내의 판독

U.u.웰 및 M.h.는 노란색이고 UMMt바이알은 빨간색 : 검체 내 마이코플라스마가 10²CCU/mL보다 낮은 비율로 존재할 가능성이 있음.

U.u.웰 및 M.h.는 노란색이고 UMMt바이알도 노란색 : 마이코플라스마가 없음.

스크리닝이 양성이면 2~8℃에서 보관하고 있던 접종된 UMMlyo배지를 균질하게 현탁하여 100㎕를 취해 A7 한천배지에 접종한다.

37±1℃에서 혐기 조건으로 48시간 동안 배양한다.

1) 형태학적 확인

Ureaplasma urealyticum : 흑갈색(brown-black) 침전물의 형태 (다양한 크기의 성게모양). 콜로니가 작다.

Mycoplasma hominis : 달걀후라이 모양의 형태. 콜로니는 U.u.보다 크다.

2) 계수

한천배지를 뒤집어 10배율 광학현미경으로 계수한다. 보이는 필드당 콜로니 수를 기록한다 :

- 1개/필드 이하 : ≤10³CFU/mL

- 1~5개/필드 : 약 10⁴CFU/mL

- 5~10개/필드 : 약 10⁵CFU/mL

- 10~20개/필드 : 약 10⁶CFU/mL

- 20개/필드 초과 : >10⁶CFU/mL

* CFU : colony forming units

액체검체(정액, 뇨, 위분비물, 혈액배양물)에 대해서는 스크리닝 결과를 기다릴 것 없이 접종된 UMMlyo배지를 A7 한천배지에 접종하는 것이 더 바람직하다. 최초배뇨물, 정액 또는 기관내 검체에서의 U.u.농도는 보통 10³CCU/mL 이다.

- 매우 높은 농도로 존재하는 U.u. 또는 M.h.는 두 웰 중의 배지 색을 변하게 할 수 있다.

- 10^6-7CFU/㎖보다 많은 양으로 존재하고 urease를 갖고 있는 세균이 있는 경우 두 웰의 색을 변하게 할 수 있다.

- pH가 8보다 큰 알칼리성 검체는 UMM 배지의 색을 변하게 할 수 있다.

- 다른 모든 세균 동정 방법과 같이 검체의 질이 시험결과에 영향을 줄 수 있다. 음성결과가 나왔다고 반드시 감염이 없음을 나타내지는 않는다.

- 품질관리는 동결건조한 표준균주를 사용한다 (Ureaplasma urealyticum ATCC 27618)

- UMM배지(UMMt+UMMlyo)에 재생된 균주 100㎕를 접종한 다음 예비배양물을 조제한 다음 37±1℃에서 6시간 배양한다.

- 초기 배양액을 골고루 섞은 후 새로운 UMM배지에 200㎕를 접종한다.

- 마이코스크린플러스 트레이의 두 웰에 접종한 다음 위의 용법용량에 따라 시험한다.

예측되는결과 :

주의 : 동결건조된 균주가 낮은 urease 활성을 나타내는 경우 배양시간을 18~24시간 까지 지속할 수 있다. 배양액에는 예비배양물 20㎕가 접종되어야 한다.