리아키티지아이알엠에이 - 의약품 상세정보

가. 혈청을 검체로 하며, 혈구나 혈액응고 성분, 지방질이 많은 경우 원심하여 완전히 제거 한다. 또한 심하게 용혈된 검체는 위양성을 보일 수 있으므로 사용하지 않는다.

나. 검체내 보존제 중 질화나트륨이 함유되어 있을 경우 위양성을 보일 수 있으므로 주의한 다.

가. 모든 시약은 실험 시작 30분전 실온에 둔다.

나. 세척액의 조제

농축 세척액을 증류수 또는 이온 정제수로 50배 희석하여 필요한 양만큼 준비한다.

예) 필요량이 1000ml일 경우 농축 세척액 20ml에 증류수나 이온 정제수 980ml를 넣어 총 부피가 1000ml가 되도록 한 다음 잘 섞는다.

※ 농축 세척액은 냉장 보관 상태에서 결정이 생길 수도 있다. 이 경우에는 37℃ ± 1℃ 항온 수조에서 녹인 다음 사용한다.

다. Recovery buffer는 TgAb가 양성이 나온 검체에 한해 TgAb의 영향을 확인하기 위해 검 체와 recovery buffer(농도 200ng/ml)를 1:1로 혼합하여 검사를 진행시 사용한다.(실험 방법은 기존의 검사방법과 같으며 사용 검체만 희석한 검체를 사용한다.)

예) recovery buffer 100uL+ 검체 100uL로 희석 : 희석한 검체

recovery buffer와 희석하지 않은 검체 : 희석하지 않은 검체

TgAb가 양성이 나온 검체의 경우 Recovery test를 실시하였을 경우 Recovery rate 가 80%미만이면 TgAb가 존재하는 것이며, 125%이상이면 그 외의 것에 영향을 받는다.

가. 검사 전 준비사항

1) 모든 시약은 실험 시작 30분전에 실온에 두고 사용 전 가볍게 흔들어 잘 섞은 후 사용 한다.

2) 사용 후 남은 튜브는 첨부된 비닐포에 방습제와 함께 잘 밀봉하여 2~8℃에 보관한다.

3) 검체는 사용 전에 충분히 혼합한 다음 사용한다. 특히 동결되었던 검체는 반드시 균질 화시킨 후 사용한다.

나. 검사 방법

1) 시험에 필요한 양만큼 튜브를 꺼내어 튜브 홀더에 고정시킨다.

2) 시험할 코티드 튜브를 표준액은 각 농도마다 2개 , 정도관리 혈청 2개 , 그리고 검체는 각 2개를 기준으로 준비한다.

3) 각 농도의 표준액과 검체 그리고 정도관리혈청을 각각의 코티드 튜브에 100㎕씩 가한다.

4) 모든 코티드 튜브에 검체 희석액 100㎕ 을 가한다.

5) 잘 혼합하고 실온 200rpm shaking으로 2시간동안 반응시킨다.

6) 모든 코티드 튜브의 시약을 주의하여 흡입 제거한다.

7) 각 코티드 튜브당 세척액 2ml을 가하고 흡입ㆍ제거하는 과정을 2회 반복한다.

8) 모든 코티드 튜브에 Tracer 250㎕ 을 가한다.

단, 이 과정에서 코티드 튜브 벽면에 액이 묻지 않도록 주의한다.

9) 잘 혼합하고 실온 200rpm shaking으로 18시간동안 반응시킨다.

10) 모든 코티드 튜브의 시약을 주의하여 흡입 제거한다.

11) 각 코티드 튜브당 세척액 2ml을 가하고 흡입ㆍ제거하는 과정을 2회 반복한다.

12) 감마카운터에서 1분간 각 표준액과 정도관리혈청 그리고 검체 코티드 튜브의 반응 방사 능량(cpm)을 측정한다.

이때 Tracer액의 유효기간을 확인하기위해 Total activity측정용 튜브에 Tracer액 250㎕ 넣고 전체 방사능량을 측정한다.

< 검사과정 요약 >

4. 결과 계산 및 판정

가. 각 표준액과 검체에 대한 cpm값을 계산한다.

나. 표준곡선 작성을 위하여 X축을 표준액 농도(ng/ml)로, Y축을 표준액의 cpm값으로 하 여 표준곡선을 그린다.

다. 표준 곡선을 이용하여 검체의 cpm 값을 대입하여 농도값을 산출한다.

라. 정도관리혈청의 농도값이 20~30ng/ml 범위의 값을 만족하는지 확인한다.

마. 검체의 농도값 50ng/ml 이하의 농도값을 정상범위로 산출한다.

바. 결과 계산의 예

※ 아래 값은 실험 결과의 예를 나타낸 단순한 실례이므로 실제 실험시 적용해서는 안 된다.

1) 실험 결과

2) 표준 곡선 그래프

: 0.40~600ng/ml