파스토렉스크립토플러스 - 의약품 상세정보

Pastorex Crypto Plus(파스토렉스 크립토 플러스)는 간단한 응집반응을 이용하여 생체액(혈청, 뇌척수액, 기관지폐포세척액, 뇨) 중에서 Cryptococcus neoformans의capsular polysaccharide인 glycuronoxylomannan(GXM)를 정성, 반(半)정량 분석하는 테스트이다. 이 테스트는 anti-glycuronoxylomannan 단일클론성 항체로 코팅된 입자와 Cryptococcus neoformans capsule의 주요 구성물질인 glycuronoxylomannane을 이용한다. 이 입자들은 GXM과의 응집 반응을 일으켜 육안으로 확인이 가능하게 된다. 민감도는 혈청에 대해 50ng/mL이다.

이 검사는 HIV의 오염 위험성을 피하기 위하여 56℃에서 30분간 열처리하여 불활성화 한 검체를 사용한다. 뇨를 제외한 모든 검체는, 방해물을 제거하고, 검출 감도를 높이기 위하여 효소 전처리가 필요하다. 검사 결과, 양성인 검체의 경우, 완충액으로 일정하게 희석하여 검사한다.

항원역가는 감염의 단계와 전파를 나타낸다.

질병의 단계 중에 항원의 동태(動態)를 보는 것은 치료 효과를 평가하는 데에 이용될 수 있다.

ㆍ 정교한 피펫

ㆍ 완전히 차단되는 마이크로튜브

ㆍ 수평 회전 교반기(160rpm)

ㆍ 볼텍스(Voltex) 믹서

ㆍ 56℃ 수욕조 (water bath)

ㆍ 100℃ 수욕조 (water bath)

ㆍ 소독조 (disinfectant tank)

1) pronase 효소의 준비

pronase 1개의 플라스크를 1mL의 증류수 또는 탈염수로 재조제한다.

재조제하는 동안 거품이 생기지 않도록 하고, 동결 건조 분말이 완전히 용해하도록 한다. 1개월에 검사 회수가 30~40회 정도이면, pronase를 2~8℃(4주간 안정하다.)에 보관한다. 검사 회수가 그 이하인 경우, 20㎕씩 각각의 튜브에 담아 -20℃에 보관한다.

2) 검체 처리

■ 보관

검체는 채취 후 가능한 한 빨리 처리해야 한다. 만약 이렇게 하지 못한다면 2-8℃에서 몇 시간동안 보관할 수 있다.

주의) 혈청 검체는 건조된 튜브만 사용한다. 알부민, 지질, 헤모글로빈, 빌리루빈이 과도하여 나타나는 간섭은 테스트되지 않았다.

■ 작업

a) 혈청, 기관지폐포세척액

ㆍ 검체 120㎕를 마개가 잘 맞는 분석할 튜브에 담은 후, pronase 20㎕를 가한다.

ㆍ 잘 혼합한 후, 56 ℃에서 30분간 가온한다.

ㆍ 수욕조로부터 튜브를 꺼내어 정지액(효소 반응 억제제)을 1방울 가한다.

ㆍ 잘 혼합한다.

ㆍ 주의) 수욕조를 사용할 때는 물이 튜브로 들어가 잘못된 결과를 야기하지 않도록 한다.

b) 뇌척수액

ㆍ 만일 뇌척수액이 매우 탁하거나 적혈구를 포함하고 있다면, 350g(2000 rev/min)으로 5분간 원심분리하여 상청액을 취한다.

ㆍ 검체 120㎕를 꼭 맞는 마개가 있는 튜브에 넣고 pronase 20㎕을 가한다.

ㆍ 잘 섞고 56 ℃에서 30분간 가온한다.

ㆍ 56 ℃ 수욕조로부터 튜브를 꺼낸다.

ㆍ 100℃의 수욕조에 5분간 가온하여 pronase의 효소 활성을 정지시킨다.

ㆍ 잘 혼합한다.

ㆍ 응집 반응을 시작하기 전 3-4분간 식힌다.

ㆍ (주의) 수욕조를 사용할 때는 튜브에 물이 들어가지 않도록 한다.

c) 뇨

ㆍ 글리신 완충액을 사용하여 1:2의 비율로 희석한다.

3) 응집 반응

ㆍ 전처리한 검체 40㎕를 응집 카드의 원(circle) 안에 가한다.

ㆍ Cryptococcus 라텍스 1 방울을 나란히 가한다.

ㆍ 막대로 잘 혼합한다.

ㆍ 희석 완충액 40㎕와 라텍스 1방울을 섞어서 음성 대조시험을 실시한다.

ㆍ 실온(18-30℃)에서 교반기(160rpm)에 응집 카드를 5분간 놓아둔다.

4) 결과 확인 및 해석

시험 검체에서는 응집 입자가 관찰되고 음성 대조 시험(라텍스+희석 완충액)에서는 응집 입자가 관찰되지 않은 경우, 이 검사 결과 양성이다.

5) 적정 (반-정량 검사)

글리신 완충액으로 다음과 같이 희석한다.

마지막 양성 튜브에서 시작하여 2배 계대 희석을 이용하여 정밀한 적정을 실시한다. : 마지막 양성 튜브 50 ㎕+ 완충액 50㎕

주: 고도로 희석하였을 때의 응집 여부에 대한 해석은 검사자의 판단에 따라 차이가 날 수 있다. 동일한 환자로부터 새로운 다른 검체로 적정하는 경우, 이전 검체의 역가를 확정하는 것이 추천된다.

라텍스의 민감도(sensitivity)는 주기적으로 킷트에 제공되는 양성 대조액을 사용하여 검사할 수 있다. 양성 대조물질에 들어있는 GXM의 농도는 200 ng/mL이다.

응집반응은 고농도의 GXM에 의해 방해 받을 수 있다(hook effect). 반응의 해석에 의심이 나는 경우, 검체를 1/100으로 희석하여 재검사를 실시한다. 결과는 환자의 임상 병력 측면에서 해석하여야 한다.

검체의 항원 농도가 이 제품(Pastorex Crypto Plus)의 검출 한계보다 낮은 경우 잘못된 결과를 얻을 수 있다. 이러한 경우 나중에 검체를 재 테스트하는 것이 유용하다.

라텍스 시약을 이용해 기관지폐포세척액과 뇨에서 GXM 항원을 검출하는 것에 관한 임상적, 문헌적 데이터는 현재 제한되어 있다.

Cryptococcus 외막(capsules)과 Trichosporon beigelii의 벽이 유사 항원이어서 트리코스포론증(trichosporosis) 환자에게서 위양성의 결과가 나올 수 있다. 모든 면역학적 기술과 마찬가지로, 교차 반응의 가능성이 항상 고려되어야 한다.