| 성상 | 제조방법 뒤 별첨 |
|---|---|
| 업체명 | (주)웅비메디텍 |
| 전문/일반 | 전문의약품 |
| 허가일 | 2010-01-13 |
| 품목기준코드 | 201000346 |
| 표준코드 | 8806868001706, 8806868001713, 8806868001720 |
조회 결과가 없습니다.
사람의 혈청.혈장에서 자가면역성 간질환(LKM-1, LC-1, SLA/LP)의 정성측정
1. 측정원리
이 유로어세이(EUROASSAY) 검사 키트는 3가지의 다른 항체들: LKM-1 (liver kidney microsomes, Cytochrome P450 II D6), LC-1 (liver cytosolic antigen 1, formiminotransferase-cyclodeaminase)과 SLA/LP (soluble liver antigen/liver-pancreas antigen) 에 대한 면역글로불린 클래스 IgG의 사람 자가항체를 위한 정성 체외 진단을 제공한다. 이 테스트 키트는 각 테스트 영역에 고정된 두 개의 면역불롯(immunoblot)을 포함하는 현미경 슬라이드를 포함한다. 이것은 정제된 항체와 컨트롤의 역할을 하는 항-사람 IgG가 병렬 선으로 코팅되어 있다. 첫 번째의 반응단계에서는, 희석된 환자 검체가 면역불롯 스트립에서 배양된다. 양성 검체의 경우에는, 특이적인 IgG항체가 일치된 항원성의 부위에 결합한다. 항체의 결합을 검출하기 위해서, 색깔 반응을 유도하기 위한 효소 표지된 항 - 사람 IgG (효소 접합체)를 사용하여 두 번째 배양을 실행한다.
검사의 특성: TITERPLANE 기술은 면역 분석(immunological analyses)을 표준화 하기 위해 EUROIMMUN에 의해 개발되었다 : 검체는 처음 reagents’ support의 반응 영역에 바른다. 슬라이드는 reagents’ support의 함요(陷凹, recess, 한 슬라이드의 모든 테스트 스트립이 용액과 접촉하는 위치)로 옮긴 다음, 개별적인 반응이 동시에 시작된다. 소적(小滴, droplets)의 위치와 높이는 시스템의 기하학에 의해 정확하게 결정된다. 용액은 폐쇄 공간에 제한함으로써, 전통적인 “humidity chamber”가 필요 없게 되었다. 이것은 많은 수의 검체와 다음의 다른 샘플을 동시에 동일 조건에서 incubate하는 것을 가능하게 하였다.
2. 측정방법
1) 검체의 준비 및 안정성
(1) 검체 : 사람 혈청이나 혈장
(2) 검체 희석
환자 검체를 검체 완충액으로 1:101 희석한다. 예를 들면, 10 μl 검체를 1.0 ml 검체 완액에 희석하고 볼텍싱(voltexing)으로 충분하게 혼합 시킨다. 파이펫으로 혼합하는 것은 합하지 않다.
(3) 안정성 : 혈청과 혈장 검체는 일반적으로 +2℃~+8℃에서 14일 안에 저장된 것이 검사되어진다. 희석된 검체는 하룻동안 안에 사용하여야 한다.
2) 시약의 준비와 안정성
* 주(註) : 모든 검사 시약은 사용 전 약 30분 동안 반드시 실온(+18℃~+25℃)에 꺼내 놓아야 한다. 처음 사용 이후에 +2℃~+8℃에 보관되고 오염으로부터 보호된다면 표기된 유효기한 동안 안정하다.
(1) 슬라이드 : 바로 사용 가능. 코팅된 표면에 응축을 방지하기 위해서 오직 실온에 도달하였을 때에만 보호 커버를 제거한다. 테스트 스트립은 만지지 않는다. 테스트 스트립은 만지지 않는다. 만약 보호막이 손상을 입었다면 그 슬라이드는 사용하지 않는다.
(2) 효소 접합체 : 효소 접합체는 10배로 농축되어있다. 필요한 양만큼 병에서 꺼내어 깨끗한 파이펫을 이용하여 1:10의 비율로 검체 완충액과 희석한다. 예를 들면, 각 슬라이드를 위해서는 30 μl 효소 접합체와 270 μl 검체 완충액을 희석한다. 희석된 효소 접합체는 희석한 하룻동안 사용 가능하다.
(3) 양성 및 음성 대조혈청 : 바로 사용 가능.
* 주(註) : 대조혈청은 이미 희석되어 있으므로 그대로 사용한다.
(4) 검체 완충액 : 바로 사용 가능.
(5) 세척 완충액 : 세척 완충액은 10배로 농축되어있다. 필요한 양만큼 병에서 꺼내어 깨끗한 파이펫을 이용하여 1:10의 비율로 증류수와 희석한다. 예를 들면, 하나의 슬라이드를 위해서는 20 ml을 180 ml 증류수에 희석한다. 이 작업농도 완충액은 2 ~ 8℃에서 최대 1주일간 안정하다.
* 주(註) : 만약 농축된 완충액에 결정체가 생겼으면, 37℃에 따뜻하게 녹여서 희석 전에 충분하게 혼합한다.
(6) 기질액 : 바로 사용 가능. 내용물은 빛에 민감하므로 사용 후 바로 병을 닫는다.
(7) Reagent tray : Reagent tray는 시약키트에는 포함되어 있지 않지만 실험을 위해서는 꼭 필요하다. Reagent tray의 기능을 검사한다. 반응영역이 친수성이며 주위의 코팅은 소수성인가· 세척은 일반적인 가정용 세제를 사용한다. 필요하다면, 종이 타월에 Extran MA 01 (Merck)를 이용하여 문지르고 충분한 양의 물로 씻는다. 가끔 소독을 위하여 3% Sekusept Extra (Henkel)에 1시간 정도 담가둔다.
3) 시험 방법
(1) 준비(Prepare) : Reagent support를 점검한다. 시약과 검체에 대한 준비는 앞 페이지에 이미 기술하였다.
(2) 분주(Pipette) : 희석 검체 50 μl를 reagents’ support의 각 반응 영역에 떨어뜨린다. 이때 공기 방울은 피한다. Incubation을 시작하기 전에 모든 검사할 검체를 바른다. pipetting template를 사용한다.
(3) 배양-Incubation (1) : 슬라이드가 reagents’ support와 대응되는 함요(陷凹, recess)와 합치됨으로써 반응이 시작된다. 각 검체는 슬라이드상의 테스트 스트립과 접촉을 확실하게 하여 개별적인 검체가 다른 검체와는 접촉되지 않게 한다. 300 rpm순환 교반기상에서 30분간실온배양 한다.
(4) 세척(Wash) : 슬라이드의 각 단일 필드를 비이커를 사용해서 세척 완충액을 흘려 씻어 내리고 큐벳의 유리 용기 안에 슬라이드를 담근다. 모든 슬라이드를 흘려 씻어 내리고 큐벳의 유리 용기 안에 옮긴 다음, 15분간세척한다.
(5) 분주(Pipette) : 세척된 reagents’ support의 각 반응 영역에 50 μl 효소 접합체를 떨어뜨린다. 실온배양을 시작하기 전에 모든 검사할 검체를 바른다.
(6) 배양-Incubation (2):세척 완충액으로부터 슬라이드를 꺼낸 다음, 오직 뒷면과 바닥 테두리 부분을 닦아내고 reagents’ support의 함요(陷凹, recess)에 슬라이드를 놓는다. 테스트 스트립에 용액이 접촉되도록 조절한다. 300 rpm순환 교반기상에서 30분간실온배양 한다.
(7) 세척(Wash) : 슬라이드의 각 단일 필드를 비이커를 사용해서 세척 완충액을 흘려 씻어 내리고 큐벳의 유리 용기 안에 슬라이드를 담근다. 모든 슬라이드를 흘려 씻어 내리고 큐벳의 유리 용기 안에 옮긴 다음, 15분간세척한다.
(8) 분주(Pipette) : 세척된 reagents’ support의 각 반응 영역에 50 μl 기질액을 떨어뜨린다. 실온배양을 시작하기 전에 모든 검사할 검체를 바른다.
(9) 배양-Incubation (3) : 세척 완충액으로부터 슬라이드를 꺼낸 다음, 오직 뒷면과 바닥 테두리 부분을 닦아내고 reagents’ support의 함요(陷凹, recess)에 슬라이드를 놓는다. 테스트 스트립에 용액이 접촉되도록 조절한다. 300 rpm순환 교반기상에서 10분간실온배양 한다.
(10) 세척(Wash) : 증류수로 슬라이드를 씻어 내린다. 수분 동안 공기 중에서 말린다.
(11) 평가(Evaluate) : 테스트 필드의 색깔의 강도를 읽는다. 양성반응의 경우 항원이 없는 영역과 비교하여 항원에 대응하는 라인에 강한 푸른빛 밴드가 나타난다. Anti-Human IgG 라인이 선명한 양성 반응을 보이면 이 실험이 정확하게 실행되었음을 증명한다. 만약, 이 Anti-Human IgG 라인이 약한 강도를 나타내면 이 검사는 재검 해야 한다.
4) 결과의 해석
결과는 면역불롯(immunoblot) 상의 밴드의 색깔의 강도로 해석한다.
주의할 점은 결과를 판독하기 전에 멤브레인은 완전하게 건조되어야 한다.
(1) 양성 결과: 항체가 없는 지역(zone)과 비교하여 항체를 포함한 지역이 푸른 염색이 나타난다.
(2) 음성 결과: 각 항체가 위치한 밴드상에 색깔 반응이 나타나지 않는다.
(3) 재검: 각 항체가 위치한 밴드상에 매우 약한 색깔 반응이 나타나면 재검을 실시한다.
(4) 컨트롤 밴드: 컨트롤 밴드인 Anti-human IgG 라인(오른쪽 스트립의 하단)의 양성 반응은 분석이 정확하게 배양(incubation) 되었음을 나타낸다. Anti-human IgG는 항상 강한 색깔 강도로 염색되어야 한다. Anti-human IgG 지점이 약한 신호를 나타냈다면 배양 기간 동안이 잘못된 것이다.다음의 그림은 각 항체의 위치를 나타낸 레이아웃이다.
(5) 양성 컨트롤: 양성대조 혈청을 이용하여 “용법 및 용량”의 시험방법에 따라 시험할 때 스트립상의 컨트롤 밴드를 나타내는 Anti-human IgG와 LKM-1, LC-1, SLA/LP 항원이 존재하는 밴드에는 양성의 결과를 나타내는 색깔반응을 얻어야 한다.
(6) 음성 컨트롤: 음성대조 혈청을 이용하여 “용법 및 용량”의 시험방법에 따라 시험할 때 스트립상의 컨트롤 밴드를 나타내는 Anti-human IgG 밴드에만 색깔반응을 얻어야 한다.
5) 임상적 의의
| Antibodies against |
Associated Disease |
| LKM-1 |
Autoimmune hepatitis (AIH) |
| LC-1 |
Autoimmune hepatitis (AIH) |
| SLA/LP |
Autoimmune diseases of the liver include: - autoimmune hepatitis (AIH) - primary biliary liver cirrhosis (PBC) - primary sclerosing cholangeitis (PSC) |
1.체외 진단용 외 사용 금지
2.대조검체(control sera)는 적절한 ELISA나 간접적 면역형광법 검사에 의해서 HBsAg이나 HIV-1/HIV-2, HCV에 대한 항체가 검출되지 않은 것이다. 그럼에도 불구하고, 모든 검사 시스템의 구성 요소는 잠재성 감염 물질로 취급하여야 한다.
3.시약의 일부(버퍼, 기질액)는 또한 독성이 있는 아지화나트륨(sodium azide)을 포함하여 피부 접촉을 피해야 한다. 피부에 닿았을 때는 비누와 충분한 물로 씻는다.
| 저장방법 | 냉장보관(2~8℃), 기밀용기 |
|---|---|
| 사용기간 | 제조일로부터 12개월 |
| 재심사대상 | |
| RMP대상 | |
| 포장정보 | 제조원포장단위 (10 슬라이드 x 03필드/키트,10 슬라이드 x 05필드/키트) |
| 보험코드 | |
| 보험약가 | |
| 보험적용일 |
서울 부산 인천 대구 광주 대전 울산 경기 강원 충북 충남 전북 전남 경북 경남 제주 세종시
