| 성상 | 제조방법 뒤 별첨 |
|---|---|
| 업체명 | (주)웅비메디텍 |
| 전문/일반 | 전문의약품 |
| 허가일 | 2010-01-13 |
| 품목기준코드 | 201000347 |
| 표준코드 | 8806868001201, 8806868001218 |
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사람 혈청에서 nRNP/Sm, Sm, SS-A, SS-B, Scl-70, Pm-Scl, Jo-1, CENP B, PCNA, dsDNA, Nucleosomes, Histones, rib. P-Protein, AMA-M2에 대한 자가항체의 정성측정.
1. 측정원리
이 유로라인(EUROLINE) 검사 키트는 14개의 다른 항체들: nRNP/Sm, Sm, SS-A, SS-B, Scl-70, PM-Scl, Jo-1, CENP B, PCNA, dsDNA, Nucleosomes, Histones,rib. P-Protein, AMA-M2 에 대한 면역 클래스 IgG의 사람 자가항체를 위한 정성 체외진단을 제공한다.
이 테스트 키트는 고순도 정제된 항원의 병렬 선으로 테스트 스트립이 코팅되어 있다. 첫 번째의 반응단계에서는, 희석된 환자 검체가 면역불롯 스트립에서 배양된다. 양성 검체의 경우에는, 특이적인 IgG항체가 일치된 항원성 부위에 결합한다. 결합된 항체를 검출하기 위해서, 색깔 반응을 유도하기 위한 효소 표지된 항 - 사람 IgG (효소 접합체)를 사용하여 두 번째 배양을 실행한다.
2. 측정방법
1) 검체의 준비 및 안정성
(1) 검체 희석
혈청 검체를 검사하려면 검체 완충액으로 1:101 희석한다. 예를 들면, 15ul 검체를 1.5ml 검체 완충액에 희석하고 충분하게 혼합 시킨다.
(2) 안정성 : 환자의 검체는 일반적으로 +2℃~+8℃에서 14일 안에 저장된 것이 검사되어진다. 희석된 검체는 일주일안에 검사한다.
2) 시약의 준비와 안정성
* 주(註) : 모든 검사 시약은 사용 전 반드시 실온에 도달해야 한다. 처음 사용 후, +2℃~+8℃에서 보관되고 오염으로부터 보호된다면 키트에 표시된 유효기간 동안 안정하다.
(1) 코팅된 테스트 스트립 : 바로 사용 가능. 스트립에 응축을 방지하기 위해서 오직 실온에 도달하였을 때에만 패키지를 개봉한다. 패키지로부터 스트립을 꺼낸 후에는 단단하게 봉인하여 2 ~ 8℃에 보관한다.
(2) 양성 컨트롤 : 양성 컨트롤은 검체 완충액으로 1:101희석한다. 예를 들면, 양성 컨트롤 15 ul를 검체 완충액 1.5 ml에 더하여 충분하게 혼합한다.
(3) 효소 접합체 : 효소 접합체는 10배로 농축되어있다. 필요한 양만큼 병에서 꺼내어 깨끗한 파이펫을 이용하여 1:10의 비율로 검체 완충액과 희석한다. 하나의 테스트 스트립을 위해서는 0.15 ml의 효소 접합체를 1.35 ml 검체 완충액에 희석한다. 희석한 효소 접합체는 검사 당일에 사용되어야 한다.
(4)검체 완충액 : 바로 사용 가능.
(5) 세척 완충액 : 세척 완충액은 10배로 농축되어있다. 필요한 양만큼 병에서 꺼내어 깨끗한 파이펫을 이용하여 1:10의 비율로 증류수와 희석한다. 하나의 테스트 스트립을 위해서는 1 ml을 증류수 9 ml에 희석한다. 이 작업농도 완충액은 검사 당일에 사용되어야 한다.
(6) 기질액 : 바로 사용 가능. 내용물은 빛에 민감하므로 사용 후 바로 병을 닫는다.
3) 시험 방법
(1) Pretreat : 패키지로부터 필요한 만큼의 테스트 스트립을 꺼내서 Incubation tray의 비어있는 채널에 각각 놓는다. 테스트 스트립상의 숫자가 보여야 한다. 혈청 검체의 수에 해당하는 Incubation tray의 채널에 각각 1.5 ml의 검체 완충액을 채운다. 흔들리는 교반기(rocking shaker)상의 실온에서 5분간 incubation한다. 그 후에 모든 용액을 빨아낸다.
(2) Incubate (1ststep) : 각 채널에 희석 검체 1.5 ml를 채운 후 흔들리는 교반기(rocking shaker)상의 실온에서 30분간 incubation한다.
(3) Washing : 각 채널로부터 용액을 빨아낸 후 흔들리는 교반기상에서 1.5 ml의 세척 완충액을 이용하여 5분씩 3회세척한다.
(4) Incubation (2ndstep):희석된 효소 접합체 1.5 ml을 각 채널에 분주하고 나서 흔들리는 교반기(rocking shaker)상의 실온에서 30분간 incubation한다.
(5) Washing : 각 채널로부터 용액을 빨아낸 후 흔들리는 교반기상에서 1.5 ml의 세척 완충액을 이용하여 5분씩 3회세척한다.
(6) Incubation (3rdstep):incubationtray의 채널에 1.5 ml 기질액을 파이펫한다. 흔들리는 교반기(rocking shaker)상의 실온에서 10분간 incubation한다
(7) Stop : 각 채널로부터 용액을 빨아내고 증류수를 이용하여 1분씩 3회각 스트립을 세척한다.
(8) Evaluate : evaluation protocol상에 검사 스트립을 놓고 공기 건조시키고 평가한다.
4) 결과의 해석
Incubation이 끝난 후 젖은 스트립을 “Evaluation protocol” 종이 위에 위치시킨 다음 표시 선을 일치시킨다. 흡수지를 이용하여 조심스럽게 스트립을 두드린다. 스트립이 완전하게 마른 후 플라스틱 호일을 붙인다. evaluation 행렬(matrix)의 표시(mark)와 일치되는 건조된 블랏 스트립(blot strips)상에 뚜렷하게 분별할 수 있는 밴드를 evaluation protocol에 기입한다. 항원의 위치에 흰색의 밴드가 나타나면 음성으로 해석한다.
만약 EUROLINEScan 소프트웨어를 사용하면 평가가 디지털적으로 수행된다. 블랏 스트립을 위에서 설명한 work sheet 에 일치하게 위치시킨다. 테스트 스트립을 보다 오랜 기간 안정성을 유지하기 위해서는 접착력이 있는 플라스틱 호일을 덮는다. EUROLINEScan의 검사 코드에 Ana3b(Ana Profile 3 (14 Ag, PCNA))를 입력한다.
스트립상에는 컨트롤 밴드가 있으며, 이 컨트롤 밴드상에 강한 색깔 반응이 보이면 배양(incubation)이 잘 실행되었음을 나타낸다.
다음 그림은 스트립상의 각 항체와 그 배열순서를 나타낸다.
signal intensity에 의하여 다음과 같은 결과를 얻는다.
만약, 컨트롤밴드가 강하게 나타나지 않거나 Borderline의 판정을 받으면 재검을 실시한다.
| Signal |
Result |
| No signal |
Negative |
| Very weak band |
Borderline |
| Medium to strong band |
Positive |
| Very strong with an intensity comparable to the control band |
Strong Positive |
5) 임상적 의의
| Antibodies to |
Associated Disease |
Frequency |
| nRNP |
Mixed Connective Tissue Disease (MCTD, Sharp syndrome) Disseminated lupus erythematodes |
95 - 100 % 30 - 40 % |
| Sm |
Disseminated lupus erythematodes |
20 - 40 % |
| SS-A |
Sjogren’s syndrome Disseminated lupus erythematodes Primary biliary cirrhosis Chronically active hepatitis Neonatal lupus erythematodes |
40 - 80 % 30 - 40 % 20 % occasionally 100 % |
| SS-B |
Sjogren’s syndrome Disseminated lupus erythematodes |
40 - 80 % 10 - 20 % |
| Scl-70 |
Progressive systemic sclerosis (diffuse form) |
25 - 75 % |
| PM-Scl |
Overlap syndrome |
50 - 70 % |
| Jo-1 |
Polymyositis |
25 - 35 % |
| Centromeres |
Progressive systemic sclerosis |
70 - 90 % |
| PCNA |
Systemic lupus erythematosus |
only 3 % |
| dsDNA |
Systemic lupus erythematosus |
40 - 90 % |
| Nucleosomes |
Systemic lupus erythematosus |
up to 70 % |
| Histones |
lupus erythematosus Disseminated lupus erythematodes rheumatoid arthritis |
95 % 30 - 70 % 15 - 50 % |
| Rib. P-Proteins |
Systemic lupus erythematosus |
|
| AMA-M2 |
Primary biliary liver cirrhosis Progressive systemic sclerosis |
30 % 7 - 25 % |
(1)체외진단용외 사용금지.
(2)대조검체(control sera)는 적절한 ELISA나 간접적 면역형광법 검사에 의해서 HBsAg이나 HIV-1/HIV-2, HCV에 대한 항체가 검출되지 않은 것이다. 그럼에도 불구하고, 모든 검사 시스템의 구성 요소는 잠재성 감염 물질로 취급하여야 한다.
(3)시약의 일부(버퍼, 기질액)는 또한 독성이 있는 아지화나트륨(sodium azide)를 포함하여 피부 접촉을 피해야 한다. 피부에 닿았을 때는 비누와 충분한 물로 씻는다.
| 저장방법 | 냉장보관(2~8℃), 기밀용기 |
|---|---|
| 사용기간 | 제조일로부터 12개월 |
| 재심사대상 | |
| RMP대상 | |
| 포장정보 | 제조원 포장단위(16테스트 스트립/ 키트) |
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