플루오로 엔디엔에이테스트(FLUORO nDNA TEST) - 의약품 상세정보

항DNA항체는 2가닥의Chain DNA에 대한 항체(항 native DNA 항체 또는 항 double stranded DNA항체)와 1가닥의 Chain DNA에 대한 항체(항 denatured DNA항체)의 2종류가 있고 항n(ds)DNA항체는 SLE에 특이적이라 말할 수 있습니다. 한편 항ssDNA항체는 만성관절 류마치스, 만성 활동성 간염, 강피증에서도 발견될 수 있기 때문에 항ds DNA 항체와 항ss DNA항체를 명확히 구별하여 검출하는 것이 SLE의 진단에는 극히 중요합니다.

FLUORO nDNA Test 는 Crithidia luciliae을 핵 재료로 한 형광항체간접법의 시약입니다. Crithidia luciliae 기질 슬라이드에 검체(1차 항체)를 적하하여 항원-항체반응을 실시한 후 항인 Immunoglobulin 에 형광색소(FITC)를 표식한 FITC항인 lmmunoglobulin(2차 항체)을 적하하여 다시 항원-항체 반응을 실시하여 형광현미경하에서 관찰하여 판독합니다.

1) 기질로서 Crithidia luciliae 을 이용하였기 때문에 특이성이 우수합니다.

2) 조작이 간단하고 단 시간 내에 판정결과가 나옵니다.

3) 판정이 용이하고 고감도입니다.

4) 항 dsDNA 항체의 보체결합능 및 항 ds DNA 항체의 면역글로블린의 결정 등에도 응용할 수 있습니다.

1) Crithidia luciliae 기질슬라이드--------------------10장 (4홀 x 2)

2) FITC(Fluorescein isothiocyanate)표식 항인 Immunoglobulin---- 4.5ml x 1

3) PBS분말--------------------------------------------7장

4) 대조양성 혈청-------------------------------------0.3ml x 1

5) 대조음성 혈청-------------------------------------0.3ml x 1

6) 봉입제------------------------------------------- 3ml x 1

7) Cover slip ----------------------------------------20개

8) 흡수지 -------------------------------------------40장

1) Crithidia luciliae 기질 슬라이드를 잠시 동안 실온에 방치한 후 개봉한다.

2) PBS 분말 1장을 탈이온수 1000ml에 가하여 용해한다.(pH 7.2-7.4)

1) 검체혈청을 PBS용해액을 사용하여 5배 10배 희석을 한다.

2) 희석된 검체혈청을 각각1방울 (20ul-30ul)씩 슬라이드 원내에 적하합니다.

3) 실온의 습윤상자 안에서 30분간 1차 반응을 실시한다.

4) 세척

(1) 습윤 상자에서 슬라이드를 꺼내서 검체 혈청을 PBS용해액으로 깨끗이 세척해낸다.

(2) 세척된 슬라이드를 슬라이드 고정 랙에 고정시킨 후 PBS용해액이 들어있는 비커(500ml)에 장착하여 약15분정도 Stirring하면서 충분히 세척해낸다.

5) 세척이 끝난 슬라이드를 평평한 곳에 놓고 여과지로 세포면 이외의 수분을 제거한다.

위 그림 B의 상태로 된 슬라이드를 습윤 상자에 평행하게 표지항체(FITC표지항인Ig)를 슬라이드의 1테두리에 각각 1방울씩 적하한다.

6) 습윤 상자속에 실온30분간 2차 반응을 시킨다.

7) 4)와 같은 방법으로 세척한다.

8) 봉입제로 봉입한다.

9) 형광현미경의 BV system에서 400배로 관찰하여 판정한다.

앞에 설명한 형광상을 판정하는 방법대로 판정한다. 5배 이상에서 양성(+,++)으로 된 검체는 항nDNA 항체 양성으로 판정한다. 또한, 동일한 검체를 2개의 희석배수로 놓고 5배에서 음성, 10배에서 양성이 나온 경우는 염색 Miss(건조)일 경우이기 때문에 다시 시험하여야 한다.

1) 피검혈청은 가능한 한 신선한 것을 사용한다.

2) 피검혈청의 동결융해는 항체가의 저하 비특이반응의 원인이 되므로 반복하지 않는다.

3) 반응 중에 세포면을 절대로 건조시켜서는 안 된다. 염색상의 현저한 불량 혹은 정량치의 부정확함과 관계가 있다

4) 반응은 실온, 습윤상자속에서 실시한다.

5) 혼탁한 혈청은 비특이반응의 원인이 되므로 지질이 많은 검체는 되도록 금한다.

6) Crithidia luciliae 핵의 염색 상태는 일반적인 ANA 검사결과와는 상관이 없다.

4-8℃에서 보존하며 제조 후 3개월 유효하다.