플루오로헤파나 테스트(Fluoro HEPANA Test) - 의약품 상세정보

항핵항체(ANA)는 핵에 존재하는 여러 종류의 항원에 대한 자기항체군을 총칭하는 것으로 다양한 장기 장해와 면역이상을 특징으로 하는 교원병의 혈청중에서 높은 빈도로 검출되고 있습니다.

ANA의 검출은 교원병의 진단, 치료법의 선택, 치료효과의 모니터 등에 아주 유용합니다.

최근, 미국을 중심으로 인 배양세포를 핵재료로한 ANA연구에서 염색체상의 Centromere/Kinefochore나 핵분열기에서 볼 수 있는 Mitotic Apparatus Spindle과 반응한 새로운 ANA가 보고되었습니다. 항 Centromere항체로 불리우는 본 ANA는 HEp-2 등의 배양세포에서 처음으로 검출되고, 그 패턴은 산재반점형(Discrete Speckled형)을 나타냅니다. 임상적으로는 강피증의 아형인 CREST 또는 CRST증후근에서 높은율로 검출되고, SLE, MCTD, RA, 피부근염, 다발성근염 등에서는 검출되지 않는다고 보고되고 있습니다.

FLUORO HEPANA Test는 HEp-2세포(후두암유래)를 핵 재료로한 형광항체 간접법의 시약입니다. HEp2-슬라이드에 검체(1차항체)를 적하하여 항원-항체반응을 실시하고 항 인 Immunoglobulin에 형광색소(FITC)를 표식한 FITC 항 인 Immunoglobulin(2차 항체)을 적하하여 다시 항원-항체반응을 실시하여 항핵항체(ANA)를 형광현미경하에서 관찰 판독합니다.

1) 핵이 크고 염색형의 판별이 용이합니다.

2) 시약 lot간의 차가 없고 안정한 정량치, 염색패턴을 얻을 수 있다.

3) 표지항체는 특이성이 우수합니다.

4) 항 Centromere항체의 검출이 가능합니다.

5) 정성시험을 2점법으로 할 수 있는 시약으로 구성되어 있습니다.

6) 2차반응으로 2차항체의 반응과 대비염색을 동시에 행하기 때문에 나중에 염색할 필요가 없습니다.

1) HEp2-세포기질 슬라이드---------------------------------20장(4홀)

2) FITC(fluorescein isothiocyanate)표식 항인 immunoglobulin------4.5mlx1

3) PBS (분말)----------------------------------------------5장

4) 대조 양성 혈청-----------------------------------------0.5ml x1

5) 대조 음성 혈청-----------------------------------------0.5ml x1

6) 봉입제------------------------------------------------3mlx1

7) Cover slip----------------------------------------------20개

8) 흡수지------------------------------------------------40장

1) HEp2-세포기질 슬라이드를 잠시 동안 실온에 방치한 후 개봉합니다.

2) PBS분말 1포를 탈 이온수 1000ml에 가하여 용해합니다. (pH 7.2-7.4)

1) 검체혈청을 PBS완충액을 사용하여 20배, 40배 희석을 합니다.

2) 희석된 검체혈청을 각각 1방울(20㎕)씩 슬라이드 원안에 적하합니다.

3) 37℃ 습윤 상자안에서 30분간 반응시킵니다.

4) 세척

(1) 습윤상자에서 슬라이드를 꺼내서 검체혈청을 PBS용해액으로 깨끗이 세척해냅니다.

(2) 세척된 슬라이드를 슬라이드 고정랙에 고정시킨후 PBS용해액이 들어있는 비이커(500ml)에 장착하여 약 15분정도 stirring하면서 충분히 세척합니다.

5) 세척이 끝난 슬라이드를 평면위에 올려 놓고 흡수지를 사용하여 슬라이드 위의 수분을 제거해냅니다.

6) 수분이 제거된 슬라이드 글래스의 각 홀에 FITC표식 항 인- Immunoglobulin을 1방울씩 적하합니다.

7) 37℃ 습윤상자에서 30분간 반응시킵니다.

8) 상기의 절차 4)-5)와 동일한 방법으로 세척을 합니다.

9) 봉입제를 사용하여 봉입을 합니다.

10) 형광현미경 200배수에서 판정을 합니다.

1) (－) : 세포핵에 특이형광체가 보이지 않는 것

2) (±) : 세포핵에 희미하게 특이형광항체가 보이는 것

3) (＋) : 핵전체 또는 일부에 특이형광항체가 잘 보이는 것

4) (＋＋) : 핵전체 또는 일부에 특이형광항체가 강하고 또렷이 보이는 것

5) 판정

20배 희석에서 양성(＋)(＋＋) 판정한 검체를 항핵항체 양성으로 합니다.

6) 정량치

검체를 20배수에서 배수희석하여 ANA가 양성으로 판정된 최고 희석배수를 정량치로 합니다.

7) Patterns판별

ANA가 양성으로 판정된 경우 검체의 20배 희석에서의 Pattern을 판독합니다. Pattern은 Shaggy, Diffuse, Necleolar, Discrete Speckled중 하나이던지 또는 그들의 혼합형입니다.

1) 피검혈청은 신선한 혈청을 사용해야 합니다.

2) 피검혈청을 동결융해를 반복하지 마시오. 항체가의 저하 및 비특이 반응의 원인이 됩니다.

3) 핵제의 세포고정면에 손을 대거나 수분을 흡수하여 건조시키지 마시오. 비특이 반응의원인이 됩니다.

4) 반응은 반드시 실온의 습윤상자 안에서 실시해야 합니다.

40 Test(80wells), 80 Test(160wells)

4-8℃

제조 후 5개월