| 성상 | 1. 시약1, R1: 흔들었을 때 균질한 흰색 현탁액이 담긴 적색뚜껑의 점적병 2. 시약2, R2: 흔들었을 때 균질한 흰색 현탁액이 담긴 흰색뚜껑의 점적병 3. 시약3, R3: 투명한 액이 담긴 녹색 뚜껑의 점적병 4. 시약4, R4: 투명한 액이 담긴 황색 뚜껑의 점적병 5. 일회용 카드 30개 6. 일회용 막대 110개 |
|---|---|
| 업체명 | (주)비오메리으코리아 |
| 전문/일반 | 전문의약품 |
| 허가일 | 2010-01-25 |
| 품목기준코드 | 201000821 |
| 표준코드 | 8806593004607 |
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라텍스 응집반응을 이용한 메치실린-내성 황색 포도상 구균(MRSA)의 동정
가. 측정원리
MRSA 동정을 위한 디스크 감수성 시험등 기존의 방법은 충분히 특이적이지 않으므로, 최근의 연구들은 메치실린 내성을 위한 유전자 코드화(mecA)검사나, 이의 산물인 PBP2’(penicillin-binding protein2’)의 측정이 더 적합함을 보여주고 있다. 이 제품은 PBP2’에 대한 단일클론 항체 처리가 된 라텍스 입자를 함유하므로 MRSA와 특이적으로 반응하여 육안관찰이 가능한 응집을 일으킨다.
나. 용법 및 용량
1. 검체의 준비
35℃, 18-24시간 동안 blood agar plate에서 배양한 S.aureus의 집락으로 다음의 검사 방법을 따른다.
2. 검사 방법
(1) 각 시약을 실온화하고 잘 흔들어 섞는다.
(2) PBP2’ 추출과정
1) microcentrifuge tube에 추출시약1(R3)을 4방울 떨어뜨린다.
2) 배양된 집락을 루프의 내부에 완전히 채운 후 (멸균된 1.5 uL (내부 직경 1mm) 루프 채운 용량 2번, 또는 멸균된 1 uL (내부 직경 0.91mm) 루프 채운 용량 3번) 배지 표면을 눌러 루프 외부의 여분 물질은 제거한다. 균으로 채워진 각 루프를 R3를 함유하는 tube에 넣고, 루프로부터 모두 떨어져 나갈 때 까지 균일하게 섞는다.
* 주의: 내부는 cells로 반드시 채워져야 한다. 루프 2개를 채우는 데 필요한 집락의 량은 집락 직경크기에 따라 (0.5-2.5mm) 약 5-30집락으로 다양하다. tube 내 총 세포량은 1.5x109 __ 4x109 cells 해당량이어야 한다.
3) 뚜껑을 덮고 끓는 water bath나 95℃ 이상 heating block에 3분간 둔다. (5분을 초과하지 않는다)
4) 실온으로 식힌다.
5) tube에 추출시약2 (R4) 1방울 떨어뜨리고 잘 섞는다.
6) 5분간 1500xg에 해당하는 조건, 즉, 15cm rotation radius에서 3000rpm, 또는 4.5cm rotation radius 에서 4500rpm 에서 원심분리한다. 상등액을 검체로 사용하며, 이는 반드시 맑아야 한다.
(3) 라텍스 응집 과정
1) 각 검체당, R1 시험용 및 R2 시험용으로 반응영역 1영역씩 할당하고 검체 번호를 기록한다.
2) 반응판 두 군데에 R1시약 1방울 및 R2시약 1방울씩 각각 떨어뜨리고 여기에 검체 50 uL 각각 떨어뜨려, 혼합막대로 잘 섞으며 반응판의 둥근영역 전체에 걸쳐 펴준다.
3) 손으로 또는 카드믹싱장치를 사용하여 3분간 카드를 돌리며 응집반응을 관찰한다.
3. 검사 시 주의사항
(1) S.aureus로 동정된 검체만 사용한다.
(2) blood agar에서 분리된 집락만 사용한다.
(3) 순수배양의 집락만 사용한다.
(4) 만약 처음 플레이트가 접종에 필요한 집락을 불충분하게 가졌다면 subculture 하도록 추천한다.
(5) 시약병 노즐의 검체 접촉에 따른 시약 오염에 주의한다.
(6) 오염 및 건조되지 않도록 사용 후 뚜껑을 확실하게 닫는다.
(7) 가열시간 3분을 지킨다. 5분 초과 가열 시 감수성이 감소될 수 있고, 1분 이하 가열시 비특이성 응집을 일으킬 수 있다.
(8) 원심분리 후 상등액 취할 때, 피펫팅을 피하여 조심스럽게 취한다.
(9) 균질한 현탁액이 되도록 사용 전에 라텍스 시약을 잘 섞어준다.
4. 검사 결과의 판독 및 해석
(1) 양성반응: PBP2’ 존재 (MRSA로 판독)
시약1에서 응집이 나타나고, 시약2에서 응집이 나타나지 않은 경우
(2) 음성반응: PBP2’ 존재치 않음 (MRSA로 판독)
시약1과 시약2에서 모두 응집이 일어나지 않은 경우이다.
(3) 시약2에서 응집이 나타나면 이 시험 결과는 판독자료가 될 수 없다. 결과를 판독할 수 없을 때는 가열 및 원심분리단계에서 정해진 과정을 잘 지켜서 재시험한다. 재시험에서도 판독불가일 때 항생제 감수성 검사로 메치실린 내성여부를 결정한다.
5. 검사의 한계
MRSA중 너무 적은 량의 PBP2a를 생산하는 어떤균은 이 라텍스법으로 검출되지 않을 수 있어 위음성 결과를 보일 수 있다.
1. 체외진단용외 사용 금지
2. 피부, 눈, 옷에 시약이 묻지않도록 할 것
만일 접촉시 다량의 물로 씻어내고 적당한 치료를 받을 것
3. 사용전 실온화 (18-25℃)하고, 균질한 현탁액이 되도록 시약을 잘 흔들것
4. 일단 동결된 적이 있는 시약은 사용치 말 것
5. 유효기간 지난 시약 사용 금지
6. 로트 번호 다른 시약 혼용 금지
7. 일회용 카드 재사용 금지.
8. 시약병 뚜껑이 서로 바뀌지 않도록 할 것
9. 소디움 아자이드 처리에 주의할 것
10. 모든 환자의 가검물 및 미생물학적 배양물은 전염성이 있을 수 있으므로 일반적 안전주의사항 하에서 취급할 것
11. 결과의 해석은 충분히 자격이 있는 사람이 할 것
12. 검사가 끝나면 검사에 사용된 모든 물품은 다음 중 한가지를 사용하여 멸균 후 폐기할 것
- 2% glutaraldehyde 용액에 1시간 이상 담글 것
- 0.1% hydrochlorite에 1시간 이상 담글 것
- 121℃에서 20분 이상 autoclave할 것
| 저장방법 | 밀폐용기, 냉장(2-8℃)보관 |
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| 사용기간 | 제조일로부터 10개월 |
| 재심사대상 | |
| RMP대상 | |
| 포장정보 | 제조원의 포장단위에 의함 |
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