| 성상 | 맑은 유리병속의 백색 또는 미색의 현탁액 |
|---|---|
| 업체명 | 신양화학약품(주) |
| 전문/일반 | 전문의약품 |
| 허가일 | 2010-03-03 |
| 품목기준코드 | 201001787 |
| 표준코드 | 8806539004203, 8806539004210 |
총량 : 1바이알(10밀리리터 중) | 성분명 : 고초균 ATCC 6633 아포 100,000 x 100,000 개 함유액 | 분량 : 10 | 단위 : 밀리리터 | 규격 : 체외진단용 | 성분정보 : | 비고 : 단위(10ml/1vial)
혈중의 아미노산(페닐알라닌, 메치오닌, 히스티딘)의 측정
1. 측정 원리
고초균 발육에 필요한 아미노산의 대사길항 저해제의 일정량 함유된 한천배지에서는 균의 아미노산 대사가 억제되어 균의 발육이 저해된다.
그러나 아미노산이 다량 존재하면 균이 발육하고 그 성장정도는 존재하는 아미노산의 량에 비례한다는 원리를 근거로 하고 있다. 실제로는 측정하려고 하는 아미노산에 대하여 그 저해제가 함유된 한천배지에 검체 여과지 디스크와 표준 여과지 디스크를 놓고 그것들의 성장대를 비교 판정하는 것이다.
저해제를 선택하는 것에 의해 아미노산 반정량이 가능하다.
2. 용법 및 용량(조작법)
1) 필요한 기구 및 자재
(1) 플라스크 배양 접시(170㎜ x 235㎜)
(2) 3㎜ 디스크 타공 펀치
(3) 배양기
2) 시약의 조제법
이하 (1) - (4)의 저해제 액은 검사 자가 직접 화학 천평을 이용하여 조제하여 사용한다.
(1) PKU(Phenylalaine)의 측정
PKU 저해제액의 조제 : β-2-Thienylalanine -------------- 171㎎/㎗
(2) MSUD(Leucine)의 측정
MSUD 저해제액의 조제 : 4-Aza-D.L-leucine ----------- 2240 ㎎/㎗
(3) HCU(Methionine)의 측정
HCU 저해제액의 조제 : L-Methionine-D.L-Sulfoximine ----- 18 ㎎/㎗
(4) HE(Histidine)의 측정
HE 저해제액의 조제 : 1,2,4-Triazole-3-alanine ---------- 31.2 ㎎/㎗
3) 측정 조작법
(1) 검체 디스크의 제작법
① 대사 이상 검사용 여지에 필요한 인적 사항을 기입한다.
② 신생아(생후 5-7일간)의 발뒤꿈치를 천자하여 여지상의 표시된 곳에 충분히 흡수시킨다.
③ 채혈된 여지는 냉암소에서 충분히 건조시킨다.
④ 직경 3㎜ 펀치 기를 이용하여 검체 디스크를 제작한다.
(2) 플레이트(배지량 150㎖분)의 제작 방법
① 박토 한천(Difco社 제품)의 2.0g을 멸균 증류수 135㎖에 넣어 용해시킨 후 115℃에서 3-5분간 증기가압 멸균한다.
② 용해 후 60℃로 식힌 후 디메인 수정 배지 15㎖를 넣어 혼합하고 각종의 고초균 아포액 및 저해제 액을 표1)에 따라 기포가 생기지 않도록 주의하여 충분히 혼합한다.
③ 플라스크 배양 접시(170㎜ x 235㎜)를 수평한 곳에 올려놓고, ②항에서 조제한 배지를 분주하여 평판이 되도록 응고시킨다.
④ 펀치한 검체디스크와 표준 디스크를 소정의 위치에 심는다.
표1)
| 측정항목 |
고초균 아포액 첨가량 |
발육 저해제액 첨가량 |
||
| Phenylalaine |
고초균6633 10배 희석액(108/㎖) |
0.7 ㎖ |
PKU 저해제액 2배 희석액 |
0.25㎖ |
| Leucine |
고초균6051(109/㎖) |
0.16㎖ |
MSUD 저해제액 2배 희석액 |
0.15㎖ |
| Methionine |
고초균6633 10배 희석액(108/㎖) |
0.7 ㎖ |
HCU 저해제액 2배 희석액 |
0.25㎖ |
| Histidine |
고초균6633 10배 희석액(108/㎖) |
0.65㎖ |
HE 저해제액 2배 희석액 |
0.33㎖ |
표2)
| 측정항목 |
중앙에 위치한 표준디스크 (㎎/㎗) |
발육 저해제액 첨가량 |
||||
| Phenylalaine |
2 |
4 |
6 |
8 |
10 |
4 |
| Leucine |
2 |
4 |
6 |
8 |
10 |
4 |
| Methionine |
1 |
1.5 |
2 |
3 |
4 |
1.5 |
| Histidine |
2 |
4 |
6 |
8 |
10 |
6 |
(1) 배양
① 채혈한 검체 여지의 건조된 혈액이 흡착된 부분을 직경 3㎜의 펀치로 타공하여 평판 배지의 적당한 장소에 놓고 가볍게 누른다. 표준 디스크도 동시에 3㎜로 타공하여 적당한 장소에 놓고 가볍게 누른다.
② 37℃에서 16-18시간 배양시킨다.
4) 판정
배양 후 검체디스크 주위의 균의 발육 정도를 측정하여 표준 디스크 주위의 발육 정도와 비교하여 판정한다.
1) 조작 상의 주의사항
(1) 측정 재료의 성질
혈액을 흡수시킨 검체 여지는 자연 건조 시킨다.
생후 3일 이내의 신생아에서의 채혈은 페닐케톤뇨중 등에서는 측정 물질이 증가되어 있지 않는 경우가 있으므로 검체로는 부적당하다.
(2) 재료의 채취법
채혈은 생후 5-7일째의 신생아 발뒤꿈치에서 특별한 여지로 흡수시킨다.
(3) 방해 물질
무균적으로 조작한 것은 특별한 영향은 확인되지 않는다.
2) 사용상 또는 취급상의 주의
(1) 채혈용 여지는 우유, 아미노산, 약품 등이 오염되어 있지 않은 것을 사용한다.
(2) 혈액을 흡수시킨 여지는 열, 습기, 직사광선을 피하여 냉암소에서 건조한다.
(3) 디메인 수정배지, 고초균 6633, 고초균 6051의 채취는 무균적으로 행한다.
(4) 고초균 6633, 고초균 6051 및 각각의 저해제액의 첨가량은 각각의 조건에 따라 다르므로 표1)을 참조로 하여 미리 최적량을 확인 후 사용한다.
(5) 배지의 두께에 의해서 고초균 발육대의 크기가 변하게 됨으로 조정한 배지를 배양 접시에 흘려 넣을 때는 배양 접시를 2-3회 움직여 균등하게 되도록 한다.
기포를 제거하여 수평 한곳에 방치하여 평판을 응고시킨다.
또, 비뚤어진 배양 접시와 흠집이 있는 배양 접시는 판정에 오차를 나타낼 수 있으므로 사용하지 말 것.
(6) 검체 및 표준 디스크의 타공은 펀치 디스크 기를 사용하면 편리하다.
(7) 타공한 디스크는 핀셋을 이용하여 평판 위에 수평한 상태로 밀착하여 가볍게 눌러 준다.
(8) 검체 및 표준 디스크는 동일한 조건에서 검사한다.
(9) 평판을 제작할 때는 태양 광선을 피하여 제작한다.
(10) 한천은 Bacto Agar(Difco社)를 사용하고, 용해는 필요 이상의 열은 가하지 말 것.
(11) 배양 시는 60% 이상의 습도를 유지하기 위하여 부란기에 배양 접시에 물을 넣어 놓아준다.
또 배양 시간은 17-18시간 이상 두면 발육대의 판정에 영향이 있으므로 엄밀히 지켜 줄 것.
(12) 발육대의 측정에 있어서는 그 크기 및 발육 균량을 비교한다.
일반적으로 Phenylalanine과 Methionine의 측정은 발육대의 크기를 조사하고, Leucine, Histidine의 측정에는 발육 균량에 중점을 두어 판정하면 쉽게 할 수 있다.
| 저장방법 | 기밀용기, 2∼10℃냉장보관 |
|---|---|
| 사용기간 | 제조일로부터 12개월 |
| 재심사대상 | |
| RMP대상 | |
| 포장정보 | 10ml/바이알 |
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