에스디 에치비에스에이지 엘리자 3.0 테스트 키트 (SD HBsAg ELISA 3.0 test kit) (수출용) - 의약품 상세정보

1) 검체의 채취 및 보관

(1) 적당한 항응고제를 이용하여 전혈 검체를 채취한다.

(2) 혈장 또는 혈청 검체를 얻기 위해 채혈한 혈액을 원심분리 한다.

(3) 검체 채취 후, 즉시 검사하지 않는 경우 2∼8℃에서 보관되어야 하고, 3일 이상 보관하는 경우 냉동 보관한다. 단, 냉장 또는 냉동 보관한 검체는 검사 전에 반드시 실온으로 옮겨야 한다.

2) 검체 관련 주의사항

(1) 저온 살균된 시료(60℃에서 10 시간 이상)는 반응성이 저하될 수 있으므로 사용하지 않는다.

(2) 열처리로 불활성화 된 검체는 (56℃에서 1 시간) 검사 결과에 영향을 미치지 않는다.

(3) 검체 채취 시 넣어주는 전형적인 항응고제 (EDTA, citrate, 헤파린)는 본 검사 결과에 영향을 미치지 않는다.

(4) 침전물이 생긴 검체의 경우는 부정확한 결과를 나타낼 수 있으므로 반드시 검사 전에 침전물을 제거해야 한다.

(5) 용혈된 검체는 세포내 성분에 의해 부정확한 결과를 나타낼 수 있으므로 원심분리 후, 검사를 수행한다.

3) 시약의 준비 및 보관

[시액의 조제]

(1) 세척액의 준비

농축 세척액 (20배 농축액)을 증류수로 20배 희석한다. 세척액은 한 well 당 약 350㎕가 소요된다. (예 : 증류수 450ml에 농축세척액 50ml을 첨가하여 세척액을 조제한다.)

(2) 기질용액의 준비

기질액 A와 기질액 B를 1:1의 비율로 잘 섞는다. (예 : 기질액 A 5ml과 기질액 B 5ml을 잘 섞어 기질용액을 조제한다.)

[시약의 보관조건 및 사용기간]

(1) 키트는 2 ~ 8℃에서 냉장 보관한다.

(2) 키트는 밀봉된 상태에서 패키지 또는 각 시약의 라벨에 인쇄된 사용기간까지 안정하 다.

(3) 시약의 개봉 후 안정성

1) 검사에 필요한 음성 대조액 (3 well), 양성 대조액 (2 well) 및 검사하고자 하는 시료를 준비한다.

2) 음성 대조액 (3 wells), 양성 대조액 (2 wells) 및 검사하고자 하는 시료를 플레이트 각 well에 100㎕ 씩 분주한다.

3) 효소표지항체액을 플레이트 각 well에 25㎕씩 분주한다.

4) 첨부된 밀봉테이프로 밀봉한 후, 믹서를 이용하여 잘 혼합한다. 정확한 결과를 얻기 위해 잘 섞어주어야 한다.

5) 37±1 ℃ 항온기에서 60분 간 반응시킨다.

6) 희석된 세척액(well 당 350 ㎕)을 이용하여 5회 세척한다. 이때, 매 회 세척액을 well에 완전히 채우고 약 10초 정도 방치한 후, well 내의 잔여 용액을 흡입해야한다. (아래 6-1) 세척 과정 참조)

6-1) 세척 과정

가. 자동 세척

(1) 각 well 의 잔여물을 완전히 제거한다.

(2) 세척 과정 동안, 희석된 세척액을 well에 채운다.(well 당 350 ㎕)

(3) 5회의 세척 과정이 끝나면, 플레이트를 뒤집어 흡습타월에 대고 털어서, 완전히 세척액이 제거될 수 있도록 한다.

나. 수동 세척

(1) 각 well 의 잔여물을 완전히 제거한다.

(2) 희석된 세척액을 well에 채운다.(well 당 350 ㎕) 이 때, 세척액에 거품이 생기면 세척이 제대로 되지 않을 수 있으므로 주의한다. 분주 후 세척액을 제거한다.

(3) 위 (2)번 과정을 4번 더 반복하여, 총 5회 세척한다.

(4)마지막 세척 과정이 끝난 후, 플레이트를 뒤집어 흡습 타월에 대고 털어서, 세척액 이 완전히 제거될 수 있도록 한다 .

7) 기질액 A 와 B를 1:1의 비율로 잘 혼합한 후, 혼합된 기질액을 각 well에 100㎕씩 분주한다.

8) 첨부된 밀봉테이프로 밀봉하고, 실온에서 10분 간 반응시킨다.

9) 반응 정지액을 각 well 당 100㎕씩 넣고 잘 혼합한다.

10) 이중파장흡광도측정기(Bichromatic spectrophotometer)를 사용하여, 측정파장은 450 nm, 참조파장은 620 nm로 하여 각 well의 흡광도를 측정한다. 이때 반응 정지액을 넣고 1시간 이내에 흡광도 값을 측정하여야 한다.

1) 정도 관리

음,양성 대조액 및 검체의 흡광도 값은 다음 범위에 포함되어야 한다.

(1) -0.005 ≤ 흡광도 (음성) ≤ 0.200

(2) 흡광도 (양성) ≥ 1.000

만약 음성 대조액 중 1개의 값이 위 범위를 벗어났을 경우, 해당 흡광도 값은 무시한다. 양성 대조액의 흡광도 값은 2개 모두 1.000 이상이어야 한다. 위의 범위를 벗어났을 경우, 재시험 하여야한다.

2) 판정 기준값 (Cut-off) 계산

음성 대조액의 평균값을 계산한 후, 0.050을 더한다.

: 음성 대조액의 평균 흡광도 + 0.050 = 판정 기준값 (Cut-off)

3)결과의 판정

검체는 아래의 기준에 따라 결과를 판정한다.

(1) HBsAg 항원 음성 : 판정 기준값 미만의 흡광도 값을 나타내는 검체

검체에 판정 기준값 이하의 B형 간염 표면 항원이 포함되어 있는 경우, 위음성 결과를 나타낼 수 있다.

(2) HBsAg 항원 양성 : 판정 기준값 이상의 흡광도 값을 나타내는 검체

검사 결과가 판정 기준값과 같거나 그 이상인 경우, 검체 내에 검출 가능한 B형 간염 표면 항원이 존재함을 의미한다. 그러나 최종 결과 판정을 위해서는 반드시 추가적인 확진 검사가 필요하다.