세로디아ㆍHIV(관납용)SerodiaㆍHIV - 의약품 상세정보

본 시험은 젤라틴을 입자 화 한 새로운 인공담체(젤라틴 입자)에, Human Immunodeficiency Virus ; HIV(사람면역 결핍 바이러스)^주1)를 계면활성제로 처리하여 얻어진 불활성화 처리 항원을 흡착시킨 것으로, 이 감작입자가 혈중의 HIV 항체에 의해 응집하는 것을 응용한 입자응집반응(Particle Agglutination)시약입니다.

^주1) 바이러스 생산균주의 배양 상청을 농축하여 자당밀도구배원심분리법에 의해 얻을 수 있는 비중 1.16의 바이러스분획방법입니다.

1) 시험 조작이 매우 간단(microtiter법)하고 대량 검체의 스크리닝에 최적입니다.(특별한 검사기구가 필요하지 않습니다)

2) 반응시간이 짧고, 2시간 후에 육안으로 판정할 수 있습니다.

3) 담체에 유래하는 비특이응집을 가능한 한 제거할 목적으로 새로이 개발한 인공담체(Fuji Particle : 세계특허)를 이용하였습니다.

Serodia-HIV 키트의 구성은 아래와 같습니다.

** 복원 후

A) 복원용액(액상) : 인산수소이나트륨, 인산이수소칼륨, 염화나트륨. 이 시약에는 0.10%(w/v)의 아지드나트륨이 보존제로 함유되어 있습니다. 감작입자(C)와 미감작입자(D)의 복원에 사용합니다.

B) 검체희석용액(액상) : 인산수소이나트륨, 인산이수소칼륨, 염화나트륨. 이 시약에는 0.10%(w/v)의 아지드나트륨이 보존제로 함유되어 있습니다. 검체의 희석에 사용합니다.

C) 감작입자 : 불활성화 처리된 HIV-1 항원이 감작된 젤라틴 입자의 동결건조품으로 병(vial)의 라벨에 적힌 소정의 복원용액으로 복원하여 사용합니다. 복원 후의 1% 불활성화 처리된 HIV 항원이 감작된 젤라틴 입자는 보존제로 0.12%(w/v)의 아지드나트륨을 함유하게 됩니다.

D) 미감작입자(동결건조) : 탄닌산으로 처리된 젤라틴 입자의 동결건조품으로 병(vial)의 라벨에 적힌 소정의 복원용액으로 용해 복원하여 사용합니다. 복원 후에는 보존제로 0.12%(w/v)의 아지드나트륨을 함유하게 됩니다.

E) 양성컨트롤 : 비활성 된 HIV 항원 면역 토끼혈청으로 항체 역가가 1:128이 되도록 희석되어 있습니다. 이 제품은 0.10%(w/v)의 아지드나트륨을 보존제로 함유하고 있습니다.

악세사리 : 드로퍼(Dropper) 약 25㎕용(2개)

감작입자, 미감작입자의 적하에만 사용합니다.

Serodia-HIV 사용 시 다음과 같은 기구를 준비하십시오.

(1) Microplate U형

(2) 파이펫

- 마이크로파이펫(팁 포함)

검체의 분주 및 희석을 위한 25㎕용

흡수조작시의 검체의 분주를 위한 50㎕용

(3) 시약 복원을 위한 1㎖, 5㎖용 파이펫

(4) 복원 된 감작입자 및 미감작입자의 적하를 위한 드로퍼 약 25㎕용

(5) 25㎕ 마이크로타이터(microtiter) - 다일루터(Diluter ; 선택사항)

(6) 트레이 믹서(Tray Mixter ; automatic vibrator shacker ; 선택사항)

(7) 트레이 뷰어(Tray Viewer ; 선택사항)

만약 마이크로파이펫 대신 마이크로타이터-다일루터(Microtiter-diluter)를 검체 희석시에 사용할 경우 사용상의 주의사항 5와 같은 과정을 거친 후 사용하여야 합니다.

가. 검체 준비

혈청이나 혈장 내에 적혈구, 기타 유형성분이 함유되어 있으면 시험 결과에 지장이 있으므로 원심분리하여 제거한 후 검사하십시오. 혈청의 비동화(비활성화 ; 56℃에서 30분간 가온)는 반드시 요구되는 사항이 아닙니다. 시험 결과에 영향을 주지 않습니다.

나. 정성법

시험방법(표1 참조)

1) 마이크로플레이트 (Microplate)에 검체희석용액을 드로퍼 (Dropper)로 제 1well에 75㎕, 제 2, 제 3well에 25㎕(1방울)씩 적하합니다.

2) 마이크로 파이펫(Micropipette)으로 검체를 25㎕ 취하여 제 1well에 넣고 파이페팅을 3-4회 실시하여 well 내부의 검체희석용액과 혼합합니다. 이렇게 희석된 제 1well의 검체 25㎕를 2번째 well에 넣고 1well과 같은 방법으로 혼합합니다. 이 과정을 3well까지 반복하여 2^N 희석을 실시합니다.

3) 키트에 포함된 드로퍼(Dropper)를 이용하여 미감작입자 1방울(25㎕)를 2well에 넣고 감작입자 1방울(25㎕)를 3well에 넣습니다.

4) 트레이 믹서(Tray Mixer) 등을 이용하여 잘 혼합하고 뚜껑을 덮은 후, 실온(15-25℃)에 수평으로 방치하고 2시간 후 패턴을 관찰합니다.

표1. 정성법(혈청/혈장 검체)

다. 정량법

정성법에서 양성으로 판정된 피검혈청에 대해서는 확인하는 의미에서 정량법을 실시합니다.

시험방법(표2 참조)

1) 마이크로플레이트(Microplate)에 검체희석용액을 드로퍼(Dropper)로 제 1well에 75㎕, 제 2well부터 최종 well까지 25㎕(1방울)씩 적하합니다.

2) 마이크로 파이펫(Micropipette)으로 검체를 25㎕ 취하여 제 1well에 넣고 파이페팅을 3-4회 실시하여 well 내부의 검체희석용액과 혼합합니다. 이렇게 희석된 제 1well의 검체 25㎕를 2번째 well에 넣고 1well과 같은 방법으로 혼합합니다. 이 과정을 최종well까지 반복하여 2^N 희석을 실시합니다.

3) 키트에 포함된 드로퍼(Dropper)를 이용하여 미감작입자 1방울(25㎕)를 2well에 넣고 감작입자 1방울(25㎕)를 3well부터 최종well에 넣습니다.

4) 트레이 믹서(Tray Mixer) 등을 이용하여 잘 혼합하고 뚜껑을 덮은 후, 실온(15-25℃)에 수평으로 방치하고 2시간 후 패턴을 관찰합니다.

표2 정량법

라. 대조시험

1) 검체와 미감작입자(최종희석배수 1:16)의 반응이 음성(-)임을 확인합니다.

2) 검체희석용액과 미감작입자 또는 감작입자가 반응이 없음(-)을 확인합니다(시약 컨트롤 ; 미디엄 대조).

3) 매 로트(lot)에서 양성컨트롤의 최종 희석배수가 표2의 시험방법에 따라 시험했을 때 1:128배에서 양성임을 확인합니다.

마. 판정기준

마이크로플레이트를 조심스럽게 비간접 광원의 트레이 뷰어(tray viewer)나 밝은 흰 표면위로 옮깁니다. 음성 응집 패턴을 시약 컨트롤(미디엄 대조)와 비교하여 표3의 판정기준에 따라 육안으로 판정합니다.

표3 판정기준

*** 검체가 표1의 시험방법에 따라 시험했을 때 표3의 판정기준에 따라 판정보류(±)의 결과를 나타낸다면 다른 시험법으로 검사하여 정확한 결과를 확인하여야 합니다.

바. 결과 판정

시험 결과 검체의 결과가 미감작입자(최종희석배수 1:16)에서 음성을 나타내지만 감작입자와 응집을 보이면(최종희석배수 1:32 또는 그 이상) 양성으로 판정합니다.

사. 흡수조작

만약 검체가 미감작입자와 응집을 일으킨다면, 다음의 흡수조작 과정을 거친 후 재시험을 실시하여야 합니다. :

1) 1방울(25㎕)의 검체희석용액을 제 3well에 넣습니다.

2) 복원된 350㎕의 미감작입자 용액을 작은 시험관에 넣습니다.

3) 50㎕의 검체를 시험관에 넣고 잘 혼합한 후 실온(15-25℃)에서 20분간 방치합니다(중간 중간 1-2회 혼합해줍니다).

4) 2,000rpm에서 5분간 원심분리한 후 분리된 상층액(혈청희석배수 1:8)을 조심스럽게 50㎕ 취하여 마이크로플레이트의 2well에 넣습니다.

5) 2well의 용액을 마이크로파이펫으로 3, 4회 파이페팅하여 혼합한 다음 25㎕를 제 3well에 넣고 혼합하여 2^N 희석을 실시합니다.

6) 이후의 시험법은 정량 시험 과정과 결과 판독에 따릅니다.

아. 판정기준

본 시험에 있어서 미감작입자가 음성(최종희석배수 1:16)으로, 감작입자(최종희석배수 1:32 이상)가 응집반응을 나타내는 것을 양성으로 하고, 정량법에서는 양성을 나타낸 최종희석배수를 항체가로 합니다.

자. 흡수조작을 필요로 하는 피검혈청과 그 처리방법

미감작입자 및 감작입자의 양성을 나타낸 혈청에 대해서는 다음의 순서에 따라서 흡수조작을 한 후에 재시험 하십시오.

① 소시험관(원심분리관)에 소정 량의 복원용액으로 복원한 미감작입자를 0.35㎖를 넣습니다.

② 피검혈청을 0.05㎖ 가해서 잘 혼합하고 실온(15-25℃)에 20분 이상 방치합니다(도중 1-2회 잘 흔들어줍니다).

③ 원심침전(2,000rpm, 5분)하여 그 상청 액을 주의하여 분취(흡수 후 검체희석비는 1:8)하고, 플레이트의 제 2well에 50㎕ 취합니다.

④ 제 3well 이하는 미리 검체희석용액을 25㎕ 씩 적하하고, 제 2well에 다일루터(Diluter)를 넣고 2^N 희석을 실시합니다.

⑤ 이하 정량시험과 동일조작을 하여 판정합니다.