리아키안티-에취에이브이 아이지엠(RIAKEY Anti-HAV IgM IRMA) - 의약품 상세정보

1) 혈청(Serum)을 검체로 사용한다.

2) 정맥천자로 채취한 혈액을 항응고제가 들어있지 않은 튜브에 수집한다.

3) 실온에 30분간 방치하여 응고가 일어나도록 한 후 원심분리에 의해 상청의 혈청을 분리시킨다.

4) 분리된 혈청은 2~8℃에서 보관시 2주간, -20℃이하에서 보관시 최대 6개월까지 사용가능하다.

※ 용혈된 검체는 위양성을 보일 수 있으므로 주의한다.

1) 냉장보관 또는 동결되었던 검체와 시약은 실험 시작 30분전에 상온(15~25℃)에 두고 완전히 균질화 시킨 후 가볍게 흔들어 잘 섞은 후 사용한다.

2) 검체는 검체와 생리식염수의 비율을 1 : 200 으로 시험전에 미리 희석한다,

( 예) 검체 10ul + 생리식염수 2ml )

※ 검사자의 편의를 위하여 음성 대조액과 양성 대조액은 미리 희석하였으므로 음성 대 조액과 양성 대조액은 희석하지 않는다.

1) 시험할 코티드 튜브를 Blank 1개, 음성대조액 4개, 양성대조액 2개 및 검체수에 맞게 준 비하여 튜브 홀더에 고정시킨다.

2) 음성대조액, 양성대조액, 희석된 검체(검사전 준비사항 참조) 10ul씩 준비된 코티드 각 튜브에 가한 후 생리 식염수 200ul를 각각의 코티드 튜브에 첨가한다.

3) 실온(18℃~25℃)에서 2시간(±10분)동안 교반기에서 200rpm으로 반응 시킨다.

4) 반응 후 코티드 튜브의 남은 시약을 주의하여 제거한다.

5) 각 코티드 튜브당 증류수 2mL을 첨가하고 제거하는 과정을 2회 반복한다.

6) 각각의 코티드 튜브에 항원액 100ul와 ¹²⁵I 표지 항체액 100ul을 첨가한다. 단, 이 과정에서 코티드 튜브 벽면에 액이 묻지 않도록 주의한다.

7) 상온(15℃~25℃)에서 2시간(±10분)동안 교반기에서 200rpm으로 반응 시킨다.

8) 반응 후 코티드 튜브의 남은 시약을 주의하여 제거한다.

9) 각 코티드 튜브당 증류수 2mL을 첨가하고 제거하는 과정을 2회 반복한다.

10) 감마카운터에서 1분 동안 음성 및 양성대조액과 검체 코티드 튜브의 방사능량(cpm)을 측정한다.

※ ¹²⁵I 표지 항체액의 유효기간을 확인하기위해 깨끗한 하나의 튜브에 ¹²⁵I표지 항체액 100㎕를 넣고 총 방사능량(total activity)을 측정한다. 이때, 측정값이 아래의 범위를 벗어난 경우 새로운 키트를 이용하여 재시험한다.

[ 시간(유효기간)의 경과에 따른 총 방사능량의 변화 ]

< 검사과정 요약 >

< 결과 판정 >

1) 음성대조액의 평균값 : 4개의 cpm의 평균값을 구한다. 이때 평균값의 0.5배~1.5배
범위를 벗어나는 값은 제외시키고 다시 평균값을 구한다.

※ 4개의 음성대조액 cpm 값 중 1개의 값이 평균값의 0.5~1.5배 범위를 벗어났을 경우 나머지 3개의 평균값으로 산출한다. 만약 2개 이상의 값이 평균값의 0.5~1.5배 범위를 벗어났을 경우 재시험을 하여야 한다.

2) 양성대조액의 평균값 : 2개의 cpm의 평균값을 구한다.

3) 판정기준값(Cut-off value) 계산 = 음성대조액 평균값 x 5

4) 판정기준값 계산 예

※ 아래 값은 실험 결과의 예를 나타낸 단순한 실례이므로 실제 실험치를

적용해서는 안 된다.

① 음성 대조액 평균 cpm

음성 대조액 1 : 194 cpm

음성 대조액 2 : 224 cpm

음성 대조액 3 : 205 cpm

음성 대조액 4 : 614 cpm

음성 대조액 평균값 : ( 194+224+205+614 )/4 = 309 cpm

음성 대조액 4는 평균값 1.5배 범위를 벗어나므로 음성 대조액 4, 614cpm값을

제외하고 평균값을 다시 계산한다.

즉, 최종 음성 대조액 평균 cpm : ( 194+224+205 )/3= 208 cpm

② 양성 대조액 평균 cpm

양성 대조액 1 : 14869 cpm

양성 대조액 2 : 15024 cpm

양성 대조액 평균값 : ( 14869+15024 )/2=14947 cpm

③ 판정 기준값

판정 기준값(cut-off값) : 음성대조액 평균값 x 5 = 208 x 5 =1040 cpm

< 결과 해석 >

1) 음성 : 검체 cpm값이 판정 기준값보다 작으면 음성으로 판정한다.

① 음성대조액의 각각의 cpm값은 100~400cpm 사이에 있어야 한다.

※ RIA검사는 방사성동위원소(¹²⁵I)의 반감기로 인하여 cpm값이 시간이 경과함에 따라 낮아지기 때문에 시간의 경과에 따라 음성 대조액 값의 변화는 달라질 수 있음에 주 의한다.

② 음성대조액의 평균 cpm값이 위 범위(1)의①)를 벗어난 경우 그 원인을 확인한 후 재 시험을 하여야 한다

2) 양성 : 검체 cpm값이 판정 기준값 보다 같거나 높으면 반응성이 있는 것으로 간주하 고 양성으로 판정한다.

① 양성대조액의 평균 cpm 값의 범위는 시간의 경과에 따라 변하며, 그 범위는 아래의 표와 같다.

② 양성대조액의 평균 cpm값이 위 범위(2)의①)를 벗어난 경우 재시험을 하여야 한다.

③ Cut-off ±10% 이내의 구간에 해당하는 cpm을 나타내는 검체는 재시험을 실시하여 최 종결과를 판정한다. 이때 동일한 결과를 보일 경우 전문의와 상의하여 최종 판정한다.

[ 시간(유효기간)의 경과에 따른 음성ㆍ양성 대조액의 cpm 변화 ]

3) 재시험 : 두 튜브에 반복 재시험하여, 하나 이상에서 양성으로 판정 되었을 경우 최종 양 성으로 판정하고, 두 개 모두에서 음성으로 판정되었을 경우 최종 음성으로 판 정한다.

※결과판정 주의사항

본 제품은 여러 가지 요인으로 위양성 또는 위음성 결과의 가능성을 완전히 배제할 수 없 으므로 본 제품의 결과만을 기초로 최종 진단을 해서는 안되며 다른 검사방법과 임상소견 에 근거한 전문의의 판단에 의하여 최종진단을 내려야 한다.