제네디아 유구낭미충 고충 항체 엘리자 - 의약품 상세정보

1) 혈청(serum)을 검체로 사용한다.

2) 정맥천자로 채취한 혈액을 항응고제가 들어있지 않은 튜브에 수집한다.

3) 실온에 30분간 방치하여 응고가 일어나도록 한 후 원심분리에 의해 상청의 혈청을 분리시킨다.

4) 분리된 혈청은 곧바로 검사에 사용하며, -20℃ 이하에서 보관 시 최대 6개월까지 사용가능하다.

※ 용혈된 검체는 위양성을 보일 수 있으므로 사용하지 않는다.

1) 동결되었던 검체는 실온(15~25℃)에 두어 완전히 해동하고, 해동된 검체 및 실온 검체는 가볍게 흔들어 혼합하여 사용한다.

2) 모든 시약은 실험 시작 30분전에 상온(15~25℃)에 두고 가볍게 흔들어 균질화 한 후 사용한다.

3) 밀봉된 마이크로 플레이트를 꺼내어 필요한 만큼의 스트립을 꺼내고 보관하고자 하는 스트립은 프레임에서 빼내어 첨부된 은박포에 실리카겔과 함께 넣어 2 ~ 8℃에 보관한다.

※ 보관중인 은박포 내에 습기가 들어가면 항원역가의 저하를 일으킬 수 있으니 주의한다.

4) 세척액의 조제 : 농축세척액을 증류수나 이온정제수로 20배 희석하여 필요한 양만큼 준비한다.

예) 필요한 세척액량이 200㎖일 경우 농축 세척액 10㎖에 증류수나 이온 정제수 190㎖을 넣어 총 부피가 200㎖이 되도록 한 다음 잘 섞는다.

※ 농축 세척액은 냉장보관 상태에서 결정이 생길 수도 있다. 이 경우에는 37±1℃ 항온수조에서 녹인 다음 사용한다.

5) 접합체액의 조제 : 사용하기 5 ~ 10분전에 농축접합체액을 접합체희석액으로 101배의 비율로 필요한 양만큼 희석한다.

예) 한 개의 스트립 (8 웰(Well))당 농축접합체액 10 ㎕에 접합체희석액 1 ml를 혼합하여 조제한다.

※ 접합체희석액은 침전이 있을 수 있으니 충분히 혼합하여 사용한다.

6) 기질액의 조제 : 사용하기 5 ~ 10분전에 기질액과 기질용완충액을 101배의 비율로 필요한 양 만큼 혼합하여 사용한다.

예) 한 개의 스트립 (8 웰) 당 기질액 10㎕에 기질용완충액 1 ㎖을 혼합하여 조제한다.

※ 혼합된 기질액은 직사광선을 피하여 보관한다.

※ 기질액은 냉장에서 얼어 있으니 반드시 37±1℃ 수조에서 녹여 균질화 한후 사용하여야 한다. (기질액의 어는점 : 18℃)

<유구낭미충항체 검사과정>

1) 시험에 필요한 만큼의 스트립을 유구낭미충항원흡착플레이트에서 꺼내어 프레임에 고정시킨다.

2) 유구낭미충항원흡착플레이트의 각 웰에 검체희석액을 200㎕씩 넣고, 음성대조액을 10㎕씩 2 웰(A1-B1), 양성대조액을 10㎕씩 2 웰(C1-D1) 나머지 웰에 검체를 10㎕씩 차례대로 넣는다.

그림 : 검사 시 마이크로 플레이트 모식도

3) 검체를 넣고 플레이트 교반기로 3 ~ 5초 교반 후 마이크로 플레이트를 첨부된 밀봉테이프로 밀봉한 다음 37±1℃에서 60분간 반응시킨다.

4) 3)의 반응이 끝나기 5 ~ 10분 전에 II. 검사전 준비과정, 5) 접합체액의 조제 항에 따라 농축접합체액을 접합체희석액으로 101배의 비율로 필요한 만큼 희석한다.

5) 각 웰의 내용물을 제거한 후, 조제한 세척액(300 ~ 400㎕/웰)을 넣고 바로 버리는 과정을 5회 반복한다.

6) 마이크로 플레이트를 뒤집은 상태로 흡습지에 대고 가볍게 쳐서 세척액을 완전히 제거한 다음 4)에서 조제된 접합체액을 각 웰에 100㎕씩 넣는다.

7) 마이크로 플레이트를 밀봉테이프로 잘 밀봉한 후 37±1℃에서 30분간 반응시킨다.

8) 7)의 반응이 끝나기 5 ~ 10분전에 II. 검사전 준비과정, 6)기질액의 조제 항에 따라 기질액을 기질용 완충액으로 101배의 비율로 필요한 만큼 희석하여 기질액을 조제한다.

9) 각 웰의 내용물을 제거하고 조제한 세척액(300 ~ 400㎕/웰)을 넣고 바로 버리는 과정을 5회 반복한다.

10) 마이크로 플레이트를 뒤집은 상태로 흡습지에 대고 가볍게 쳐서 세척액을 완전히 제거한 다음 8)에서 조제한 기질액을 각 웰에 100㎕씩 넣고 실온에서 30분간 반응시킨다. 이때 반응은 직사광선을 피하여 실시하며, 반응액이 음성검체는 무색이며, 양성검체는 연한파란색에서 진한파란색으로 발색한다.

11) 반응정지액을 웰 마다 100㎕씩 넣은 후 청색이 노란색으로 완전히 변하도록 마이크로 플레이트를 가볍게 쳐서 발색물을 균질화한다.

12) 공기를 맹검 (air blank) 으로하고 음성대조액, 양성대조액 및 검체의 흡광도를 측정한다. 흡광도는 반응정지액을 넣은 후 30분 이내에 측정하며, 주파장은 450nm, 보조파장은 620 ~ 650nm로 한다.

<고충항체 검사과정>

1) 시험에 필요한 만큼의 스트립을 고충조항원흡착플레이트에서 꺼내어 프레임에 고정시킨다.

2) 고충조항원흡착플레이트의 각 웰에 검체희석액을 200㎕씩 넣고, 음성대조액을 10㎕씩 2 웰(A1-B1), 양성대조액을 10㎕씩 2 웰(C1-D1) 나머지 웰에 검체를 10㎕씩 차례대로 넣는다.

그림 : 검사 시 마이크로 플레이트 모식도

3) 이하 과정은 IV. <유구낭미충항체 검사과정>, 3) ~ 12)에 따라 시험한다.

<결과 판정>

1) 음성대조액의 평균흡광도값 (NCx) : 음성대조액이 든 2웰(A1-B1)의 흡광도 평균값을 구한다.

※ 만약 흡광도 값이 -0.005 ~ 0.000 사이로 읽혔다면 계산 시 0.000으로 처리한다

2) 판정기준값의 계산 : 판정기준값 (Cut off value) = NCx＋0.200

예) 음성대조액 1의 흡광도 = 0.045

음성대조액 2의 흡광도 = 0.043

음성대조액의 평균흡광도값 (NCx) = (0.043+0.045)/2 = 0.044

판정기준값 (Cut off value) = 0.044＋0.200

= 0.244

<결과 해석>

1) 양성 : 판정기준값 이상의 흡광도 값을 갖는 검체를 양성으로 판정한다.

2) 음성 : 판정기준값 미만의 흡광도 값을 갖는 검체는 음성으로 판정한다.

3) 재시험 : 양성대조액의 흡광도 값이 모두 0.700 이상이고, 2개의 음성대조액의 흡광도 값은 0.100 이하이어야 한다. 만약 이 기준에 적합하지 않을 경우에는 시험 기술 상의 문제나 시약의 변질로 인한 것으로 생각되므로 그 원인을 확인하여 재시험을 실시한다.