디아키 에이치에이브이 아이지엠 엘라이자 - 의약품 상세정보

1) 혈청(Serum)을 검체로 사용한다.

2) 정맥천자로 채취한 혈액을 항응고제가 들어있지 않은 튜브에 수집한다.

3) 실온에 30분간 방치하여 응고가 일어나도록 한 후 원심분리에 의해 상층의 혈청을 분리시킨다.

4) 분리된 혈청은 2～8℃에서 보관 시 2주간 사용가능하다.

※ 용혈된 검체는 위양성을 보일 수 있으므로 사용하지 않는다.

1) 냉장보관 또는 동결되었던 검체와 시약은 실험 시작 30분전에 상온(15～25℃)에 두고 완전히 균질화 시킨 후 가볍게 흔들어 잘 섞은 후 사용한다.

2) 세척액의 조제

농축 세척액을 증류수 또는 이온 정제수로 20배 희석하여 필요한 양만큼 준비한다.

예) 필요량이 1000ml일 경우 농축 세척액 50ml에 증류수나 이온 정제수 950ml를 넣어 총 부피가 1000ml가 되도록 한 다음 잘 섞는다.

※ 농축 세척액은 냉장 보관 상태에서 결정이 생길 수도 있다. 이 경우 37℃ ± 1℃ 항온 수조에서 녹인 다음 사용한다.

1) 검사 시 1웰의 기질 blank, 3웰의 음성 대조액, 2웰의 양성 대조액과 검사하고자 하는 검체의 수를 결정한 뒤, 필요한 양만큼 스트립을 꺼내어 스트립홀더에 고정시킨다. 이때 사용하지 않는 웰은 첨부된 비닐포에 실리카겔과 함께 밀봉하여 냉장(2～8℃)보관 하며 스트립의 웰 밑바닥은 손으로 만지지 않도록 주의한다.

2) 음성 대조액, 양성 대조액, 검체들을 웰에 가할 위치를 정하여 표시하고, 기질 blank를 제외한 각 웰에 100㎕씩 차례로 분주한다.

3) 플레이트 밀봉 테이프로 웰을 덮어 밀봉하고 37±1℃에서 30±1분 동안 반응시킨다.

4) 반응이 끝난 후, 밀봉 테이프를 제거하고 모든 웰의 내용물을 흡입하여 버리고 미리 제조한 세척액(각 웰당 300㎕이상)으로 5회 세척한다. 세척이 완료되면 플레이트를 흡습지에 뒤집어 적당히 쳐서 제거되지 않는 세척액을 완전히 제거한다.

5) 기질 blank를 제외한 각각의 웰에 접합체액 100㎕를 분주한 뒤, 스트립홀더를 손으로 가볍게 쳐서 잘 혼합시킨다.

6) 플레이트 밀봉 테이프로 웰을 덮어 밀봉하고 37±1℃에서 30분 동안 반응시킨다.

7) 반응이 끝난 후, 밀봉 테이프를 제거하고 모든 웰의 내용물을 흡입하여 버리고 미리 제조한 세척액(각 웰당 300㎕이상)으로 5회 세척한다. 세척이 완료되면 플레이트를 흡습지에 뒤집어 적당히 쳐서 제거되지 않은 세척액을 완전히 제거한다.

8) 기질 blank를 포함한 모든 웰에 기질액을 100㎕씩 넣고 스트립홀더를 가볍게 쳐서 잘 혼합시킨 뒤 실온(18～25℃), 암소에서 20분 동안 반응시킨다.

9) 반응이 완료되면 모든 웰에 반응 정지액을 100㎕씩 분주하고 골고루 섞이도록 스트립 홀더를 가볍게 쳐서 반응이 잘 일어나게 한다.

10) 플레이트 바닥을 부드러운 흡습성 종이로 잘 닦아 습기를 제거하고 측정파장 450nm/620nm에서 흡광도를 측정한다.

* 흡광도 측정은 반응 정지액을 분주한 뒤 30분 이내에 측정해야 한다.

<에이치에이브이 아이지엠 엘라이자 검사과정 요약>

가. 결과 계산법

1) 음성 대조액의 평균 흡광도 값(NCx) : 3개의 음성 대조액 흡광도 평균값을 계산한다. 이때 측정된 각 음성 대조액의 흡광도 값이 0.021～0.033 범위를 벗어나는 값은 제외시키고, 2개 이상의 값이 범위를 벗어났을 경우 재시험을 하여야 한다.

2) 양성 대조액의 평균 흡광도 값(PCx) : 2개의 양성 대조액 흡광도 평균값을 계산한다.

이때 측정된 양성대조액의 흡광도 값이 1.503～1.653을 벗어났을 경우 재시험을 하여야한다.

3) Cut-off value(판정 기준값) 계산 : 음성 대조액 평균 흡광도 값(NCx) + 0.080

4) 결과 계산의 예

* 아래 값은 실험결과의 단순한 실례이므로 실제 실험 시 적용해서는 안 된다.

① 음성 대조액의 평균 흡광도

음성 대조액 1 : 0.025

음성 대조액 2 : 0.029

음성 대조액 3 : 0.031

음성 대조액 평균값 : [(0.025+0.029+0.031)/3] = 0.028

음성 대조액 평균값은 0.028 [(0.025+0.029+0.031)/3]으로 0.021～0.033 범위의 흡광도 값은 만족하므로 여기서는 제외시킬 음성 대조액 값은 없다.

② 양성 대조액의 평균 흡광도

양성 대조액 1 : 1.591

양성 대조액 2 : 1.579

양성 대조액 평균값 : [(1.591+1.579)/2] = 1.585

③ 판정 기준값

(Cut-off value) : NCx + 0.080 = 0.028 + 0.080 = 0.108

나. 결과 판정

1) 음성 판정 : 검체의 흡광도가 cut-off value 기준치보다 낮으면 HAV IgM 항체에 반응성이 없는 것으로 간주하고 음성으로 판정한다.

2) 양성 판정 : 검체의 흡광도가 cut-off value 기준치와 같거나 크면 HAV IgM 항체에 반응성이 있는 것으로 간주하고 양성으로 판정한다.

3) 재시험

① 양성으로 판정된 검체는 2웰씩 재시험한다. 만약 하나 이상에서 계속적으로 양성 결과가 나올 경우 최종적으로 양성으로 판정한다.

② Cut-off value ±10% 사이(gray zone)에 존재하는 검체의 흡광도 값은 불확실하므로 재시험을 해야 한다.