| 성상 | 제조방법 별첨 뒤에 작성 |
|---|---|
| 업체명 | (주)에스디 |
| 전문/일반 | 전문의약품 |
| 허가일 | 2011-11-07 |
| 품목기준코드 | 201109728 |
| 표준코드 | 8806618019302, 8806618019319, 8806618019326 |
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사람 혈청 중의 뎅기바이러스에 특이적인 IgM 항체를 진단하는 정성 검사
1. 검체 및 시액의 준비
1) 검체의 채취 및 보관
(1) 정맥천자로 채혈한 전혈 검체를 응고가 일어나도록 실온(20-25℃)에 정치시킨 후 CLSI(Clinical and Laboratory Standards Institute)에서 권고한 정맥천자 방법을 이용한 진단 혈액 검체 채취 방법의 기준(H3-A5,2003)에 따라 원심 분리하여 혈청을 얻는다.
(2) 혈청을 분리한 후 즉시 검사하지 않는 경우 냉장(2-8℃) 보관하고, 2일 이상 보관이 필요한 경우 냉동(-20℃이하)보관한다.
(3) 자동 서리제거가 되는 냉동장치는 사용하지 않는다.
(4) 황달검체, 지방혈 검체, 용혈된 검체 및 미생물에 오염된 검체는 사용하지 않는다. CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute)에서 권고한 혈액 검체 보관에 대한 지침서(H18-A3,2004)를 참고 한다.
2) 시액의 조제
[준비 과정]
(1) 검사를 시작하기 전에 키트 내의 모든 시약 성분을 꺼내어, 실온(20-25℃)의 온도와 동일하게 될 때까지 실온에 둔다.
(2) 지정된 온도 범위 및 시간을 벗어나는 경우 부정확한 결과를 초래할 수 있다. 이 경우 재시험을 해야 한다.
(3) 혈청 희석 전 준비
① 검사에 필요한 웰(well)수를 결정하고 스트립 고정판에 삽입 한다.
② 음성대조액(N) 및 양성대조액(P)용 각각 1개의 웰(well)과 3개의 교정물질(CAL)용 웰(well)이 요구 된다.
③ 사용하지 않는 남은 웰(well)은 자체 은박포에 단단히 밀봉하여 2~8℃ 에 보관한다.
④ 적절한 검액 조제용으로 시험관 또는 마이크로 플레이트를 사용하여 음성 및 양성 대조액과 교정물질, 환자 검체를 희석한다.
a) 10ul의 혈청과 1,000ul의 검체 희석액을 혼합한다.
또는,
b) 10ul의 혈청과 90ul의 검체 희석액을 혼합한 뒤, 희석된 검체 20ul를 검체희석액 180ul와 혼합한다.
(4) 세척액 준비(20배 농축액)
① 농축 세척액(20배 농축액)과 증류수를 1:19의 비율로 튜브에 넣고 잘 혼합한다.
2. 시약의 보관조건 및 사용기간
1) 키트는 2 ~ 8℃에서 냉장 보관한다. 키트는 밀봉된 상태에서 패키지 또는 각 시약의 라벨에 인쇄된 사용기간까지 안정하다.
2) 시약의 개봉 후 안정성
| 시약 |
상태 |
보관조건 |
사용기간 |
| 항원 흡착 플레이트 (12x8웰) |
개봉 후 |
2 ~ 8℃, 밀봉 |
키트의 사용기간 이내 |
| 뎅기바이러스 1-4 항원 |
개봉 후 |
2 ~ 8℃ |
키트의 사용기간 이내 |
| 희석된 뎅기바이러스 1-4 항원 |
1:250희석 후 |
2 ~ 8℃ |
즉시 |
| 항원희석액 |
개봉 후 |
2 ~ 8℃ |
키트의 사용기간 이내 |
| 농축세척액(20배농축액) |
개봉 후 |
2 ~ 25℃ |
키트의 사용기간 이내 |
| 세척액 |
1:20희석 후 |
2 ~ 25℃ |
조제 후 1주 이내 |
| 검체희석액 |
개봉 후 |
2 ~ 8℃ |
키트의 사용기간 이내 |
| 효소표지항체액 |
개봉 후 |
2 ~ 8℃ |
키트의 사용기간 이내 |
| 기질액(TMB Chromogen) |
개봉 후 |
2 ~ 8℃ (밀봉, 암소) |
키트의 사용기간 이내 |
| 양성대조액 |
개봉 후 |
2 ~ 8℃ |
키트의 사용기간 이내 |
| 교정물질 |
개봉 후 |
2 ~ 8℃ |
키트의 사용기간 이내 |
| 음성대조액 |
개봉 후 |
2 ~ 8℃ |
키트의 사용기간 이내 |
| 반응 정지액 |
개봉 후 |
2~25℃ |
키트의 사용기간 이내 |
3. 검사과정
1) 뎅기 바이러스 1-4 항원
(1) 검사에 필요한 웰(well)의 수량만큼 항체 흡착 플레이트 웰(well)을 은박포로부터 꺼낸다.
(2) 항원희석액을 사용하여 뎅기 바이러스 1-4 항원을 250배 희석한다.
; 2.5 ml의 항원희석액과 10ul의 뎅기 바이러스 1-4 항원을 혼합하면, 5 스트립(40 웰(wells))에 사용 가능한 분량 이다.
(3) 스트립 당 0.5ml의 희석된 뎅기 바이러스 1-4항원이 사용된다.
(4) 항원 희석액과 뎅기바이러스 1-4 항원을 혼합하면, 혼합용액은 옅은 파란색을 띈다.
(5) 사용하지 않은 뎅기바이러스 1-4 항원은 2 ~ 8℃에 보관한다.
(6) 깨끗한 용기 또는 폴리프로필렌 용기를 이용하여 희석된 뎅기바이러스 1-4항원과 동량의 효소표지항체액을 혼합한다.
(7) 충분히 혼합한 용액을 사용하기 전까지 실온(20 ~ 25℃)에 둔다. 사용하지 않는 혼합액은 폐기한다.
2) 항체흡착플레이트
(1) 뎅기바이러스 1-4 항원-효소표지 항체액을 혼합하고 10분 내에 파이펫을 이용하여 희석된 검체, 양성 및 음성 대조액, 교정물질을 각각 100ul씩 취하여 항원흡착플레이트 각 웰(well)에 넣는다.
(2) 플레이트를 밀봉하여 37±1℃에서 30분간 반응 시킨다.
(3) 희석된 세척액으로 6회의 세척과정을 진행 한다. [3) 세척과정 참고]
(4) 혼합된 뎅기바이러스 1-4 항원-효소표지 항체액은 사용하기 전에 충분히 혼합하고, 100ul씩 취하여 항원흡착플레이트 각 웰(well)에 넣는다.
(5) 플레이트를 밀봉하여 37±1℃에서 30분간 반응 시킨다.
(6) 희석된 세척액으로 6회의 세척과정을 진행 한다. [3) 세척과정 참고]
(7) 기질액(TMB Chromogen)을 100ul씩 취하여 항원흡착플레이트 각 웰(well)에 넣는다.
(8) 기질액(TMB)를 첫 웰(well)에 분주 한 시점으로부터 10분동안 실온(20-25℃)에서 반응 시킨다. 웰(well) 의 반응용액이 파란색으로 발색 된다.
(9) 반응 정지액 100ul를 기질액(TMB)을 넣었던 순서대로 각 웰에 넣고 잘 혼합하면 파란색이 노란색으로 변한다.
(10) 30분 이내에, 측정파장 450nm, 참조 파장은 620nm로 하여 각 웰(well)의 흡광도를 측정한다.
* 주의 : 이중파장의 분광 광도계 (Dual wavelength spectrophothmeter)를 사용하는 경우, 참조 필터를 600-650nm로 설정 한다. 참조 필터 없이 마이크로웰을 450nm에서 읽으면 바탕(background)에 영향을 받아 실제보다 높은 흡광도 결과를 초래할 수 있다.
3)세척 과정
각 웰(well)의 미반응 물질을 제거하기 위해 충분히 세척하는 것이 중요하다.
가. 자동 세척
(1) 각 웰(well)의 잔여물을 완전히 제거 한다.
(2) 세척액을 각 웰(well)에 채운다. (웰(well)당 350ul)
(3) 6회의 세척 과정이 끝나면, 플레이트를 뒤집어 흡습 타월에 대고 털어서, 완전히 세척액이 제거될 수 있도록 한다.
(4) 자동 플레이트 세척기는 제조소측의 세척 지침서에 따라 항상 깨끗한 상태를 유지하여야 한다.
나. 수동 세척
(1) 각 웰(well)의 잔여물을 완전히 제거 한다.
(2) 세척액을 각 웰(well)에 채운다. 이 때, 세척액에 거품이 생기면 세척이 제대로 되지 않을 수 있으므로 주의한다. 세척 후 즉시 세척액을 제거한다.
(3) 각 웰(well)을 세척액으로 다시 채우고, 즉시 버린다.
(4) 위 (3)번 과정을 추가적으로 4번 더 반복하여, 총 6회 세척한다.
(5) 마지막 세척 과정이 끝난 후, 플레이트를 뒤집어 흡습 타월에 대고 털어서, 세척액이 완전히 제거될 수 있도록 한다.
4. 결과 판정
1) 결과값 계산
* 주의 : 교정 인자(Calibration factor)는 Batch별로 다르게 규정되어 있으며, 자세한 사항은 동봉된 규격서에서 확인할 수 있다. 결과값 계산 전에, 교정 인자를 확인한다.
(1) 교정물질을 세 번 반복 측정한 흡광도 평균치에 교정 인자를 곱하여 나온 값이 판정 기준값(Cut-off)이다.
(2) 결과값(Index Value)은 검체의 흡광도를 판정 기준값(Cut-off)으로 나눈 값이다.
결과값(Index Value) = 검체 흡광도 / Cut-off 값
또는,
(3) 팬바이오 환산값(Panbio unit)은 결과값(Index Value)에 10을 곱한 값이다.
팬바이오 환산값 = 결과값 x 10
[예시]
예) 검체 A 흡광도 = 0.949
검체 B 흡광도 = 0.070
교정물질 흡광도 평균값 = 0.802
교정 인자 = 0.62
판정 기준값(Cut-off) = 0.802 x 0.62 = 0.497
검체 A (0.949/0.497) = 1.91 (결과값)
검체 B (0.070/0.497) = 0.14 (결과값)
검체 A 1.91 x 10 = 19.1 (팬바이오 환산값)
검체 B 0.14 x 10 = 1.4 (팬바이오 환산값)
2) 결과 해석
(1) 뎅기 감염의 진단 : 본 제제는 환자 혈청에 항 뎅기 IgM 항체의 역가에 따라서 결과를 판정한다. 양성 결과(팬바이오 환산 값 : 11 이상)는 1차 또는 2차 댕기 감염을 나타낸다. 만약 1차 댕기 감염 과 2차 댕기 감염의 구별이 필요하다면, 팬바이오 댕기 듀오 엘리자 제품 사용을 권고한다.
| 결과값(Index value) |
팬바이오 환산 값 (Panbio Unit) |
결과 |
| <0.9 |
<9 |
음성 |
| 0.9-1.1 |
9-11 |
재시험(Equivocal) |
| >1.1 |
>11 |
양성 |
표 1. 결과값 (또는 팬바이오 환산 값) 판정 결과
표 2. 결과 해석
| 결과 |
해석(Interpretation) |
| 음성 |
항 뎅기 IgM 항체가 측정되지 않음. 그러나 이 결과가 댕기 감염을 완전히 배제하지는 못하므로, 초기 감염이 의심된다면 7~14일 후 검체를 채취하여 재검사를 진행하여야 한다. 추가적인 검사를 통해 확진하여야 한다. |
| 재시험(Equivocal) |
Equivocal 결과를 보인 검체는 재시험해야 한다. 재시험 후에도 같은 결과가 나오면 다른 검사방법을 이용하여 재검하거나, 검체 채취를 다시 진행하여 재검한다. |
| 양성 |
항 뎅기 IgM 항체가 측정됨. 댕기 감염 확진을 위해 추가적인 혈청학적 검사방법을 이용하여 확진하여야 한다. |
(2) 본 제제의 결과를 보고할 시에 다음을 참고 한다.
“ 본 제제를 사용하여 얻은 검사 결과는 다른 검사방법으로 얻은 결과값과 호환되지 않는다. 본 제제의 기준판정값 이상으로 측정된 결과값은 실제 체내에 존재하는 항체의 총 수량을 의미하지는 않는다.”검사 결과는 양성, 음성 또는 Equivocal로 보고해야 하며 정확한 수치로 보고하지 않는다.
5. 정도 관리
(1) 각각의 키트는 교정물질, 양성 및 음성 대조액을 포함한다. 적합 기준은 동봉된 규격서에서 확인할 수 있다.
(2) 음성 및 양성 대조액은 시약 검증용으로 사용되며, 양성 대조액은 판정 기준값(Cut-off)에 대한 정확성을 보증하지 않는다.
(3) 양성 및 음성대조액과 교정물질의 흡광도 규격에 맞지 않을 경우, 재시험해야 하며 이 경우 환자 검체의 검사 결과는 보고하지 않는다.
(4) 정도 관리는 해당 지역의 규정 및 검사실의 표준 정도관리 규정에 따라 진행한다.
(5) 검사자는 정도관리 지침인 CLSI C24-A 및 42CFR493.1256을 참조할 것을 권고한다.
1) 본 제제는 체외 진단용 시약으로만 사용한다.
2) 대조액에 사용되는 인체 유래 물질은 Anti-HIV 1 & 2, Anti-HCV 및 B형간염바이러스 표면항원을 포함하고 있지 않다. 그러나 어떤 검사방법도 완전하게 보장할 수는 없으므로, 모든 대조액 및 항원은 잠재적 감염 가능 물질로 여기고 폐기해야 한다. 질병관리예방본부 및 국립보건원의 권고에 따라 본 제제는 잠재적 감염성이 있는 시약으로 생물학적 안전성 Level 2에 준수하여 다루어야 한다.
3) 검체는 혈청에 한하며 사용하며 전혈, 혈장 및 다른 형태의 검체는 사용하지 않는다.
4) 황달 혈청, 지질이 많이 함유된 혈청, 용혈된 혈청 및 미생물에 감염된 혈청은 사용하지 않는다.
5) 열에 의해 불활화된 혈청은 사용하지 않는다.
6) 본 제제는 온도 변화에 민감하므로, 본 제제의 모든 시약은 실험 시작 전에 실온(20-25℃)에 둔다. 밀봉되어 있는 항체흡착플레이트의 경우, 항체흡착플레이트의 온도가 실온(20-25℃)에 맞추어지지 전에 개봉하지 않는다.
7) 시약을 사용할 때는 깨끗한 Micro pipette용 Tip을 이용해야 하며, 시약을 분주할 때 오염이 일어나지 않도록 주의한다.
8) 사용하지 않은 마이크로플레이트웰은 즉시 건조제가 포함된 밀봉팩(closed bag)에 넣는다. 이 과정이 제대로 수행되지 않으면, 잘못된 결과를 초래할 수 있다.
9) [기질 반응계]
a) 기질액(TMB Chromogen)은 금속성의 이온 물질에 감염되기 쉬우므로, 금속성의 물질과 닿지 않도록 주의해야한다.
b) 장시간 직사광선에 노출되지 않도록 주의한다.
c) 일부 계면 활성제는 기질액의 성능에 영향을 미칠 수 있으므로 주의한다.
d) 기질액의 색상은 옅은 청색이며, 이는 기질액의 활성이나 본 제제의 검사 결과에 영향을 미치지는 않는다.
10) 본 제제의 일부 시약은 아지드화나트륨을 포함하고 있는데, 이 성분은 납이나 구리 배관에 반응하여 폭발하기 쉬운 금속성의 아지드화물을 형성할 수 있다. 그러므로 배관을 통해 시약을 처리할 때는, 과량의 물로 씻어내어 폭발 위험으로부터 예방하도록 한다.
11) 아지드화 나트륨은 접합체액의 활성도를 저해하므로 접합체액을 사용할 경우 깨끗한 Miropipette용 tip을 이용하여 분주하도록 한다.
12) 본 제제의 결과만을 기초로 최종 진단을 해서는 안 되며 다른 검사방법과 임상소견에 근거한 전문의의 판단에 의하여 최종 진단을 내려야 한다.
13) 본 제제의 cut-off치는 지역 인구 성향이 반영되었으므로 상이할 수 있다. 따라서 각 지역의 인구 성향에 맞추어 조정 할 수 있다.
14) 일반적인 인구 집단에 대해서는 검사를 하지 않으며 임상적 증상이 있거나 병원체에 노출된 것으로 의심 되는 환자를 대상으로 검사 하도록 한다.
15) 댕기바이러스 1,2,3 및 4, 머레이 계곡 뇌염, 일본뇌염, 황열 및 웨스트 나일 바이러스와 같은 플라비바이러스 속 바이러스와 혈청학적인 교차반응이 있을 수 있으므로 진단을 확정하기 전에, 나열된 질병들이 제외되었는지에 대해서 확인해야 한다.
16) 이종친화성 항체는 면역검사에서 간섭반응의 원인으로 잘 알려져 있다. 동물 면역글로불린 G에 대한 항체는 시약항체와 교차반응을 일으킬 수 있으며, 이는 위양성의 원인이 될 수 있다. 그러므로 진단을 확정하기 전에 이종친화성 항체가 제외되었는지에 대해서 확인해야 한다.
17) 본 제제에서 혈청 양성 반응이 나왔을 경우, 양성 진단 확정 및 역학적 기록을 위해 확인 검사를 진행해야 한다.
포장단위
| 포장단위 원료약품 |
96 tests/kit |
480 tests/kit |
| 항체 흡착 플레이트 |
1장 (96웰(well)/장) |
5장(96웰(well)/장) |
| 뎅기바이러스 항원 |
1병(150 ul/병) |
5병(150 ul/병) |
| 항원희석액 |
1병(50 ml/병) |
5병(50 ml/병) |
| 농축세척액(20배 농축액) |
1병(60 ml/병) |
5병(60 ml/병) |
| 검체희석액 |
2병(50 ml/병) |
10병(50 ml/병) |
| 효소표지항체액 |
1병(7ml/병) |
5병(7ml/병) |
| 기질액(TMB Chromogen) |
1병(15 ml/병) |
5병(15 ml/병) |
| 양성대조액 |
1병(200 ul/병) |
5병(200 ul/병) |
| 교정물질(Calibrator) |
1병(400 ul/병) |
5병(400 ul/병) |
| 음성대조액 |
1병(200 ul/병) |
5병(200 ul/병) |
| 반응정지액 |
1병(15 ml/병) |
5병(15 ml/병) |
| 저장방법 | 기밀용기, 냉장 보관(2~8°C) |
|---|---|
| 사용기간 | 제조일로부터 15개월 |
| 재심사대상 | |
| RMP대상 | |
| 포장정보 | 사용상의 주의사항 별첨 뒤에 작성 |
| 보험코드 | |
| 보험약가 | |
| 보험적용일 |
| 년도 | 생산실적 |
|---|---|
| 2013 | 1,255 |
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