팬바이오 엡스타인-바 바이러스 브이씨에이 아이지엠 엘리자 (Panbio Epstein-Barr Virus VCA IgM ELISA)(수출용) - 의약품 상세정보

(1) 정맥천자로 채혈한 검체를 응고가 일어나도록 실온(20-25℃)에 30분간 정치시킨 후3,000rpm에서 10분간 원심 분리하여 혈청을 얻는다.

(2) 혈청을 분리한 후 즉시 검사하지 않는 경우 냉장(2-8℃) 보관하고, 2일 이상 보관이 필요한 경우 냉동(-20℃이하)보관한다.

※ 자동 서리제거가 되는 냉동장치는 사용하지 않는다.

(1) 검사 시작 전에 키트 내의 플레이트 및 시약을 꺼내어 실온(20-25℃)에 둔다.

※ 지정된 온도 범위 및 시간을 벗어나는 경우 부정확한 결과를 초래할 수 있다. 이 경우 재시험을 해야 한다.

(2) 검체 및 대조액 준비

① 검사에 필요한 웰(well)수를 결정하고 스트립 고정판에 삽입 한다.

② 시험관 또는 마이크로 플레이트를 준비하고, 음성대조액(1 well), 양성대조액(1 well), 교정물질(3 wells) 및 검사하고자 하는 검체를 검체 희석액으로 10배 희석한다.

예) 음성대조액/양성대조액/교정물질/혈청 검체 10㎕ + 검체 희석액 100㎕

③ 위 ②에서 희석된 음성대조액, 양성대조액, 교정물질 및 혈청 검체를 검체 흡착액과 1:10 비율로 혼합한다.

예)희석된 음성대조액/양성대조액/교정물질/혈청 검체 20㎕ + 검체 흡착액 180㎕

④ 사용하지 않는 남은 웰(well)은 자체 은박포에 단단히 밀봉하여 2~8℃ 에 보관한다.

(3) 세척액 준비(20배 농축액)

농축 세척액(20배 농축액)과 증류수를 1:19의 비율로 튜브에 넣고 잘 혼합한다. (예 : 농축 세척액 10 ml에 증류수 190 ml을 첨가하여 세척액을 조제한다.

(1) 시약의 개봉 후 안정성

1) 흡착된 환자 검체와 대조액, 그리고 교정물질을 각각의 준비된 해당 웰에 100㎕씩 분주한다.

2) 플레이트를 밀봉하여 37±1℃에서 30분 동안 반응시킨다.

3) 희석된 세척액으로 6회 세척한다.((3)-1. 세척 과정 참고).

(3)-1. 세척 과정

※ 각 웰(well)의 미반응 물질을 제거하기 위해 충분히 세척하는 것이 중요하다.

가. 자동 세척

① 각 웰(well)의 잔여물을 완전히 제거 한다.

② 희석된 세척액을 각 웰(well)에 채운다. (웰(well)당 350㎕)

③ 6회의 세척 과정이 끝나면, 플레이트를 뒤집어 흡습 타월에 대고 털어서, 완전히 세척액이 제거될 수 있도록 한다.

※ 자동 플레이트 세척기는 제조소의 세척 지침서에 따라 항상 깨끗한 상태를 유지하여야 한다.

나. 수동 세척

① 각 웰(well)의 잔여물을 완전히 제거 한다.

② 희석된 세척액을 각 웰(well)에 채운다. (웰(well)당 350㎕)

※ 이 때, 세척액에 거품이 생기면 세척이 제대로 되지 않을 수 있으므로 주의한다.

③ 세척 후 즉시 세척액을 제거한다.

④ 각 웰(well)을 세척액으로 다시 채우고, 즉시 버린다.

⑤ 위 (2)번 과정을 추가적으로 4번 더 반복하여, 총 6회 세척한다.

⑥ 마지막 세척 과정이 끝난 후, 플레이트를 뒤집어 흡습 타월에 대고 털어서, 세척액이 완전히 제거될 수 있도록 한다.

4) 각 웰에 효소표지항체액을 100㎕씩 분주한다.

5) 플레이트를 밀봉하여 37±1℃에서 30분 동안 반응시킨다.

6) 희석된 세척액으로 6회 세척한다 ((3)-1. 세척 과정 참고)

7) 기질액(TMB)을 각 웰(wells)에 100㎕씩 분주한다.

8) 실온(20~25℃)에서 10분간 반응시키면, 파란색으로 발색된다.

9) 반응정지액을 각 웰(wells)당 100㎕씩 넣고 잘 혼합하면 파란색이 노란색으로 변한다.

10) 30분 이내에, 측정파장 450 nm, 참조파장은 600~650 nm로 하여 각 웰(wells)의 흡광도를 측정한다.

※ 이중파장의 분광 광도계 (Dual wavelength spectrophothmeter)를 사용하는 경우, 참조 필터를 600-650nm로 설정 한다. 참조 필터 없이 마이크로웰을 450nm에서 읽으면 바탕(background)에 영향을 받아 실제보다 높은 흡광도 결과를 초래할 수 있다.

※ 교정 인자(Calibration factor)는 뱃지(Batch)별로 다르게 규정되어 있으며, 자세한 사항은 동봉된 규격서에서 확인할 수 있다. 인덱스 값(Index Value) 계산 전에, 교정 인자를 확인한다.

1) 컷오프 값(Cut-off) 계산

교정물질(Calibrator)를 세 번 반복 측정한 흡광도 평균치를 계산한 후, 교정 인자(Calibration factor)를 곱한다.

: 교정물질 평균 흡광도 X 교정 인자 = 컷오프 값(Cut-off)

2) 인덱스 값(Index Value) 계산

인덱스 값(Index Value)은 검체의 흡광도를 컷오프 값(Cut-off)으로 나눈 값이다.

: 인덱스값(Index Value) = 검체 흡광도 / 컷오프 값(Cut-off)

3) 팬바이오 환산값(Panbio unit) 계산

팬바이오 환산값(Panbio unit)은 인덱스 값(Index Value)에 10을 곱한 값이다.

: 팬바이오 환산값 = 인덱스 값(Index Value) x 10

[예시]

예) 검체 A 흡광도 = 0.949

검체 B 흡광도 = 0.070

교정물질 흡광도 평균값 = 0.802

교정 인자 = 0.62

컷오프 값(Cut-off) = 0.802 x 0.62 = 0.497

검체 A (0.949/0.497) = 1.91 (인덱스 값)

검체 B (0.070/0.497) = 0.14 (인덱스 값)

검체 A 1.91 x 10 = 19.1 (팬바이오 환산값)

검체 B 0.14 x 10 = 1.4 (팬바이오 환산값)

4) 결과 해석

검체는 아래의 기준에 따라 결과를 판정하며, 해석을 한다.

(1) 음성

인덱스 값이 0.9 미만이거나 팬바이오 환산 값이 9 미만인 검체 검체 :

엡스타인-바 바이러스 캡시드 항원 아이지엠 항체 음성

(2) 양성

인덱스 값이 1.1 초과이거나 팬바이오 환산 값이 11초과인 검체 :

엡스타인-바 바이러스 캡시드 항원 아이지엠 항체 음성

(3) 재시험

인덱스 값이 0.9 이상이고 1.1 이하이거나 팬바이오 환산값이 9 이상 11이하인 검체 : 음, 양성을 판정하기 어려우므로 재시험을 한다. 재시험 후에도 같은 결과를 보이면 다른 검사방법을 이용하여 재검하거나, 검체 채취를 다시 진행하여 재검 한다.

(1) 각각의 키트는 교정물질, 양성대조액 및 음성 대조액을 포함한다. 각 물질에 대한 적합 기준은 동봉된 규격서에서 확인할 수 있다.

(규격서 예시)

(2) 양성 및 음성대조액과 교정물질의 흡광도 규격에 맞지 않을 경우, 재시험해야 하며 이 경우 환자 검체의 검사 결과는 보고하지 않는다.