| 성상 | 제조방법 별첨 뒤에 작성 |
|---|---|
| 업체명 | (주)에스디 |
| 전문/일반 | 전문의약품 |
| 허가일 | 2011-11-15 |
| 품목기준코드 | 201110065 |
| 표준코드 | 8806618019609, 8806618019616 |
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사람 혈청 중의 뎅기 NS1 항원을 진단하는 정성검사
1. 검체 준비 및 저장방법
(1) 정맥천자로 채혈한 검체를 응고가 일어나도록 실온(20-25℃)에 30분 정치시킨 후에 3000 rpm에서 10분 동안 원심분리하여 혈청을 얻는다.
(2) 혈청을 분리한 후 즉시 검사하지 않는 경우 냉장(2-8℃) 보관하고, 2일 이상 보관이 필요한 경우 냉동(-20℃이하)보관한다.
※ 자동 서리제거가 되는 냉동장치는 사용하지 않는다.
2. 검사 전 준비과정
(1) 검사 시작 전에 키트 내의 플레이트 및 시약을 꺼내어 실온(20-25℃)에 둔다.
(※ 지정된 온도 범위 및 시간을 벗어나는 경우 부정확한 결과를 초래할 수 있다. 이 경우 재시험을 해야 한다.)
(2) 검체 및 대조액 준비
① 검사에 필요한 웰(well)수를 결정하고 스트립 고정판에 삽입 한다.
② 시험관 또는 마이크로 플레이트를 준비하고, 음성대조액(1 well), 양성대조액(1 well), 교정물질(3 wells) 및 검사하고자 하는 환자의 검체를 각각 75㎕를 취하여 검체 희석액에 1:1로 희석한다.
예) 음성대조액/양성대조액/교정물질/환자의 혈청 검체 75㎕ + 검체 희석액 75㎕ (1:1)
※ 대조액을 볼텍싱(Vortex)하지 않는다. 대조액에는 글리세롤이 포함되어 있다. 희석된 대조액을 위아래로 하여 섞거나 파이펫팅으로 섞는다.
(3) 세척액(20배 농축액) 준비
농축 세척액(20배 농축액)과 증류수를 1:19의 비율로 튜브에 넣고 잘 혼합한다. (예 : 농축 세척액 10 ml에 증류수 190 ml을 첨가하여 세척액을 조제한다.)
3. 개봉된 시약의 저장방법 및 유효기간
(1) 시약의 개봉 후 안정성
| 시약 |
상태 |
보관조건 |
사용기간 |
| 항체 흡착 플레이트 |
개봉 후 |
2 ~ 8℃, 밀봉 |
개봉 후 1개월 |
| 농축세척액 |
개봉 후 |
2 ~ 8℃, 밀봉 |
키트의 사용기간 이내 |
| 희석된 세척액 |
1:20 희석 |
2~25℃ |
조제 후 일주일 이내 |
| 검체희석액 |
개봉 후 |
2 ~ 8℃, 밀봉 |
개봉 후 3개월 |
| 효소표지 항체액 |
개봉 후 |
2 ~ 8℃, 밀봉 |
개봉 후 3개월 |
| 기질액(TMB Chromogen) |
개봉 후 |
2 ~ 8℃, 밀봉 |
개봉 후 3개월 |
| 양성 대조액 |
개봉 후 |
2 ~ 8℃, 밀봉 |
개봉 후 3개월 |
| 교정물질 |
개봉 후 |
2 ~ 8℃, 밀봉 |
개봉 후 3개월 |
| 음성대조액 |
개봉 후 |
2 ~ 8℃, 밀봉 |
개봉 후 3개월 |
| 반응정지액 |
개봉 후 |
2~25℃, 밀봉 |
키트의 사용기간 이내 |
4. 검사과정
1) 희석한 검체과 대조액, 그리고 교정물질을 각각의 해당 웰에 100㎕씩 분주한다.
2) 플레이트를 밀봉하여 37±1℃에서 1시간 동안 반응시킨다.
3)희석된 세척액으로 6회 세척한다.(3)-1. 세척 과정 참조)
3)-1. 세척 과정
가. 자동 세척
(1)각 웰(wells)의 잔여물을 완전히 제거한다.
(2)희석된 세척액을 각 웰(wells)에 채운다.(웰(wells)당 350 ㎕)
(3)6회의 세척 과정이 끝나면, 플레이트를 뒤집어 흡습타월에 대고 털어서, 완전히 세척액이 제거될 수 있도록 한다.
(4)자동 세척기는 효율적인 세척이 되도록 잘 유지되어야 한다. 항상 제조사의 청소방법에 따라야한다.
나. 수동 세척
(1)각 웰(wells) 의 잔여물을 적절한 용기를 이용하여 완전히 제거한다.
(2)희석된 세척액을 각 웰(wells)에 채운다.(웰(wells)당 350 ㎕) 이 때, 세척액에 거품이 생기면 세척이 제대로 되지 않을 수 있으므로 주의한다. 세척 후 즉시 세척액 을 제거한다.
(3) 다시 웰에 세척액을 체워 세척 후 즉시 세척액을 제거한다.
(4) (3)번 과정을 4번 더 수행하여 총 6회 세척을 한다.
(5) 마지막 세척 과정이 끝난 후, 플레이트를 뒤집어 흡습 타월에 대고 털어서, 세척액이 완전히 제거될 수 있도록 한다.
4) 각 웰에 효소표지항체액를 100㎕씩 분주한다.
5) 플레이트를 밀봉하여 37±1℃에서 1시간 동안 반응시킨다.
6) 희석된 세척액으로 6회 세척한다.(3)-1.세척 과정 참조)
7) 기질액(TMB)을 각 웰(wells)에 100㎕씩 분주한다.
8) 실온(20~25℃)에서 10분간 반응시키면, 파란색으로 발색된다.
9) 반응정지액을 각 웰(wells)당 100㎕씩 넣고 잘 혼합하면 파란색이 노란색으로 변한다.
10) 30분 이내에, 측정파장 450 nm, 참조파장은 600-650 nm로 하여 각 웰(wells)의 흡광도를 측정한다.
※ 이중파장의 분광 광도계 (Dual wavelength spectrophothmeter)를 사용하는 경우, 참조 필터를 600-650nm로 설정 한다. 참조 필터 없이 마이크로웰을 450nm에서 읽으면 바탕(background)에 영향을 받아 실제보다 높은 흡광도 결과를 초래할 수 있다.
5. 결과 판정
※ 교정 인자(Calibration factor)는 뱃지(Batch)별로 다르게 규정되어 있으며, 자세한 사항은 동봉된 규격서에서 확인할 수 있다. 인덱스 값(Index Value) 계산 전에, 교정 인자를 확인한다.
1) 컷오프 값(Cut-off) 계산
교정물질(Calibrator)를 세 번 반복 측정한 흡광도 평균치를 계산한 후, 교정 인자(Calibration factor)를 곱한다.
: 교정물질 평균 흡광도 X 교정 인자 = 컷오프 값(Cut-off)
2) 인덱스 값(Index Value) 계산
인덱스 값(Index Value)은 검체의 흡광도를 컷오프 값(Cut-off)으로 나눈 값이다.
: 인덱스값(Index Value) = 검체 흡광도 / 컷오프 값(Cut-off)
3) 팬바이오 환산값(Panbio unit) 계산
팬바이오 환산값(Panbio unit)은 인덱스 값(Index Value)에 10을 곱한 값이다.
: 팬바이오 환산값 = 인덱스 값(Index Value) x 10
[예시]
예) 검체 A 흡광도 = 0.949
검체 B 흡광도 = 0.070
교정물질 흡광도 평균값 = 0.802
교정 인자 = 0.62
컷오프 값(Cut-off) = 0.802 x 0.62 = 0.497
검체 A (0.949/0.497) = 1.91 (인덱스 값)
검체 B (0.070/0.497) = 0.14 (인덱스 값)
검체 A 1.91 x 10 = 19.1 (팬바이오 환산값)
검체 B 0.14 x 10 = 1.4 (팬바이오 환산값)
4) 결과 해석
검체는 아래의 기준에 따라 결과를 판정하며, 해석을 한다.
(1) 음성 기준
인덱스 값이 0.9 미만이거나 팬바이오 환산 값이 9 미만인 검체
: 검출할 수 있는 뎅기 NS1 항원이 없음.
(2) 양성 기준
인덱스 값이 1.1 초과이거나 팬바이오 환산 값이 11 초과인 검체
: 검출할 수 있는 뎅기 NS1 항원이 있음.
(3) 재시험 기준
인덱스 값이 0.9 이상이고 1.1 이하이거나 팬바이오 환산값이 9 이상 11이하인 검체
: 인덱스 값이 0.9 이상이고 1.1 이하인 검체는 음/양성을 판정하기 어려우므로 재시험해야 한다. 재시험 후에도 같은 결과를 보이면 다른 검사방법을 이용하여 재검하거나, 검체 채취를 다시 진행하여 재검 한다.
6. 정도 관리
(1) 각각의 키트는 교정물질, 양성 및 음성 대조액을 포함한다. 적합 기준은 동봉된 규격서에서 확인할 수 있다.
(규격서 예시)
(2) 양성 및 음성대조액과 교정물질의 흡광도 규격에 맞지 않을 경우, 재시험해야 하며 이 경우 환자 검체의 검사 결과는 보고하지 않는다.
1) 본 제제는 체외 진단용 시약으로만 사용한다.
2) 대조액에 사용되는 인체 유래 물질은 Anti-HIV 1 & 2, Anti-HCV 및 B형간염바이러스 표면항원을 포함하고 있지 않다. 그러나 어떤 검사방법도 완전하게 보장할 수는 없으므로, 모든 대조액 및 항원은 잠재적 감염 가능 물질로 여기고 폐기해야 한다. 질병관리예방본부 및 국립보건원의 권고에 따라 본 제제는 잠재적 감염성이 있는 시약으로 생물학적 안전성 Level 2에 준수하여 다루어야 한다.
3) 검체는 혈청에 한하며 사용하며 전혈, 혈장 및 다른 형태의 검체는 사용하지 않는다.
4) 황달 혈청, 지질이 많이 함유된 혈청, 용혈된 혈청 및 미생물에 감염된 혈청은 사용하지 않는다.
5) 열에 의해 불활화된 혈청은 사용하지 않는다.
6) 본 제제는 온도 변화에 민감하므로, 본 제제의 모든 시약은 실험 시작 전에 실온(20-25℃)에 둔다. 밀봉되어 있는 항체흡착플레이트의 경우, 항체흡착플레이트의 온도가 실온(20-25℃)에 맞추어지지 전에 개봉하지 않는다.
7) 시약을 사용할 때는 깨끗한 Micro pipette용 Tip을 이용해야 하며, 시약을 분주할 때 오염이 일어나지 않도록 주의한다.
8) 사용하지 않은 마이크로플레이트웰은 즉시 건조제가 포함된 밀봉팩(closed bag)에 넣는다. 이 과정이 제대로 수행되지 않으면, 잘못된 결과를 초래할 수 있다.
9) [기질 반응계]
a) 기질액(TMB Chromogen)은 금속성의 이온 물질에 감염되기 쉬우므로, 금속성의 물질과 닿지 않도록 주의해야한다.
b) 장시간 직사광선에 노출되지 않도록 주의한다.
c) 일부 계면 활성제는 기질액의 성능에 영향을 미칠 수 있으므로 주의한다.
d) 기질액의 색상은 옅은 청색이며, 이는 기질액의 활성이나 본 제제의 검사 결과에 영향을 미치지는 않는다.
10) 본 제제의 일부 시약은 아지드화나트륨을 포함하고 있는데, 이 성분은 납이나 구리 배관에 반응하여 폭발하기 쉬운 금속성의 아지드화물을 형성할 수 있다. 그러므로 배관을 통해 시약을 처리할 때는, 과량의 물로 씻어내어 폭발 위험으로부터 예방하도록 한다.
11) 아지드화 나트륨은 접합체액의 활성도를 저해하므로 접합체액을 사용할 경우 깨끗한 Miropipette용 tip을 이용하여 분주하도록 한다.
12) 본 제제의 결과만을 기초로 최종 진단을 해서는 안 되며 다른 검사방법과 임상소견에 근거한 전문의의 판단에 의하여 최종 진단을 내려야 한다.
13)양성 예측 값은 바이러스 존재에 대한 가능성에 따라 달라진다. 검사는 임상적인 증상이 있는 환자나 또는 질병에 대한 노출이 의심될 때에만 시행해야한다.
14) 성능 평가는 육안 결과 측정에 대해서는 수립되지 않았다.
포장단위
| 포장단위 원료약품 |
96 tests/kit |
| 항체 흡착 플레이트 |
1장(96웰(12x8 wells)/장) |
| 효소표지항체액 |
1병(15ml/병) |
| 농축 세척 용액(20배 농축액) |
1병(60 ml/병) |
| 검체희석액 |
1병(22ml/병) |
| 기질액(TMB) |
1병(15 ml/병) |
| 양성대조액 |
1병(1.2 ml/병) |
| 교정물질(calibrator) |
2병(1.5ml/병) |
| 음성대조액 |
1병(1.2 ml/병) |
| 반응 정지액 |
1병(15 ml/병) |
| 저장방법 | 기밀 용기, 2-8도 냉장보관 |
|---|---|
| 사용기간 | 제조일로부터 17개월 |
| 재심사대상 | |
| RMP대상 | |
| 포장정보 | 사용상의 주의사항 별첨 뒤에 작성 |
| 보험코드 | |
| 보험약가 | |
| 보험적용일 |
| 년도 | 생산실적 |
|---|---|
| 2013 | 854 |
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