| 성상 | 제조방법 별첨 뒤에 작성 |
|---|---|
| 업체명 | (주)에스디 |
| 전문/일반 | 전문의약품 |
| 허가일 | 2011-11-15 |
| 품목기준코드 | 201110066 |
| 표준코드 | 8806618020001, 8806618020018 |
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사람 혈청 중의 뎅기바이러스에 특이적인 IgG 항체를 진단하는 정성 검사
1. 검체준비 및 저장방법
(1) 정맥천자로 채혈한 검체를 응고가 일어나도록 실온(20-25℃)에 30분 정치시킨 후에 3000rpm에서 10분 동안 원심 분리하여 혈청을 얻는다.
(2) 혈청을 분리한 후 즉시 검사하지 않는 경우 냉장(2-8℃) 보관하고, 2일 이상 보관이 필요한 경우 냉동(-20℃이하)보관한다.
※ 자동 서리제거가 되는 냉동장치는 사용하지 않는다.
2. 검사 전 준비과정
(1) 검사 시작 전에 키트 내의 플레이트 및 시약을 꺼내어 실온(20-25℃)에 둔다. (※ 지정된 온도 범위 및 시간을 벗어나는 경우 부정확한 결과를 초래할 수 있다. 이 경우 재시험을 해야 한다.)
(2) 검체 및 대조액 준비
① 검사에 필요한 웰(well)수를 결정하고 스트립 고정판에 삽입 한다.
② 시험관 또는 마이크로 플레이트를 준비하고, 음성대조액(1 well), 반응대조액(1 well), 교정물질(3 wells) 및 검사하고자 하는 검체를 검체 희석액으로 100배 희석한다.
(예 1) 음성대조액/반응대조액/교정물질/혈청 검체 10㎕ + 검체 희석액 1000㎕
(예 2) 음성대조액/반응대조액/교정물질/혈청 검체 10㎕ + 검체 희석액 90㎕ 를 혼합 → 희석된 검체 20㎕ + 검체희석액 180㎕로 한번 더 혼합
③ 사용하지 않는 남은 웰(well)은 자체 은박포에 단단히 밀봉하여 2~8℃ 에 보관한다.
(3) 뎅기 바이러스 항원 및 효소표지 항체액 준비
① 항원희석액을 사용하여 뎅기 바이러스 항원을 250배 희석한다.
; (예) 항원 희석액 2.5 ml + 10㎕의 뎅기 바이러스 항원
→ 40 웰(wells)에 사용 가능한 분량 이다.
→ 스트립 당 0.5ml의 희석된 뎅기 바이러스 항원이 사용된다.
※항원 희석액과 뎅기바이러스 항원을 혼합하면, 혼합용액은 옅은 붉은색을 띈다.
※사용하지 않는 뎅기바이러스 항원은 2 ~ 8℃에 보관한다.
② 깨끗한 용기 또는 폴리프로필렌 용기를 이용하여 희석된 뎅기바이러스 항원과 동량의 효소표지항체액을 혼합한다.
※충분히 혼합한 용액을 사용하기 전까지 실온(20 ~ 25℃)에 둔다. 사용하지 않는 혼합액은 폐기한다.
(4) 세척액 준비(20배 농축액)
① 농축 세척액(20배 농축액)과 증류수를 20배 희석한다. (예: 농축세척액 10ml에 증류수 190ml을 첨가하여 세척액을 조제한다.)
3. 개봉 후 저장방법 및 사용(유효)기간
(1) 시약의 개봉 후 안정성
| 시약 |
상태 |
보관조건 |
사용기간 |
| 항체 흡착 플레이트 |
개봉 후 |
2 ~ 8℃, 밀봉 |
개봉 후 1개월 |
| 뎅기바이러스 항원 |
개봉 후 |
2 ~ 8℃ |
개봉 후 3개월 |
| 항원 희석액 |
개봉 후 |
2 ~ 8℃ |
개봉 후 3개월 |
| 농축세척액(20배 농축액) |
개봉 후 |
2 ~ 8℃ |
키트의 사용기간 이내 |
| 세척액 |
1:20 희석 후 |
2 ~ 25℃ |
조제 후 1주일 이내 |
| 검체 희석액 |
개봉 후 |
2 ~ 8℃ |
개봉 후 3개월 |
| 효소표지 항체액 |
개봉 후 |
2 ~ 8℃ |
개봉 후 3개월 |
| 기질액(TMB Chromogen) |
개봉 후 |
2 ~ 8℃ |
개봉 후 3개월 |
| 반응대조액 |
개봉 후 |
2 ~ 8℃ |
개봉 후 3개월 |
| 교정물질 |
개봉 후 |
2 ~ 8℃ |
개봉 후 3개월 |
| 음성대조액 |
개봉 후 |
2 ~ 8℃ |
개봉 후 3개월 |
| 반응 정지액 |
개봉 후 |
2~25℃ |
키트의 사용기간 이내 |
4. 검사과정
(1) 뎅기바이러스 항원과 효소표지 항체액을 혼합하고 난 뒤 10분 이내에 희석된 음성대조액, 반응대조액, 교정물질 및 검사하고자 하는 검체를 플레이트 각 웰(well)에 100㎕씩 분주한다.
(2) 플레이트를 밀봉한 후, 37±1℃에서 1시간동안 반응 시킨다.
(3) 희석된 세척액으로 6회 세척과정을 진행 한다.
(3)-1. 세척 과정
※ 각 웰(well)의 미반응 물질을 제거하기 위해 충분히 세척하는 것이 중요하다.
가. 자동 세척
① 각 웰(well)의 잔여물을 완전히 제거 한다.
② 희석된 세척액을 각 웰(well)에 채운다. (웰(well)당 350㎕)
③ 6회의 세척 과정이 끝나면, 플레이트를 뒤집어 흡습 타월에 대고 털어서, 완전히 세척액이 제거될 수 있도록 한다.
※ 자동 플레이트 세척기는 제조소의 세척 지침서에 따라 항상 깨끗한 상태를 유지하여야 한다.
나. 수동 세척
① 각 웰(well)의 잔여물을 완전히 제거 한다.
② 희석된 세척액을 각 웰(well)에 채운다. (웰(well)당 350㎕) ※ 이 때, 세척액에 거품이 생기면 세척이 제대로 되지 않을 수 있으므로 주의한다.
③ 세척 후 즉시 세척액을 제거한 뒤 각 웰(well)을 세척액으로 다시 채우고, 즉시 버린다.
④ 위 ③ 번 과정을 추가적으로 4번 더 반복하여, 총 6회 세척한다.
⑤ 마지막 세척 과정이 끝난 후, 플레이트를 뒤집어 흡습 타월에 대고 털어서, 세척액이 완전히 제거될 수 있도록 한다.
(4) 뎅기바이러스 항원-효소표지 항체액 혼합액을 사용하기 전에 충분히 혼합하고, 100㎕씩 취하여 항원흡착플레이트 각 웰(well)에 넣는다.
(5) 플레이트를 밀봉하여 37±1℃에서 1시간동안 반응 시킨다.
(6) 희석된 세척액으로 6회의 세척과정을 진행 한다. ((3)-1. 세척 과정 참고)
(7) 기질액(TMB Chromogen)을 항체흡착플레이트 각 웰(well)에 100㎕씩 분주한다.
(8) 기질액(TMB Chromogen)을 첫 웰(well)에 분주 한 시점으로부터 10분 동안 실온(20-25℃)에서 반응 시키면, 파란색으로 발색 된다.
(9) 기질액(TMB Chromogen)을 분주했던 순서대로 반응 정지액을 각 웰(well)당 100㎕씩 넣고 잘 혼합하면, 파란색이 노란색으로 변한다.
(10) 30분 이내에, 측정파장 450nm, 참조 파장은 620nm로 하여 각 웰(well)의 흡광도를 측정한다.
※ 이중파장의 분광 광도계 (Dual wavelength spectrophothmeter)를 사용하는 경우, 참조 필터를 600-650nm로 설정 한다. 참조 필터 없이 마이크로웰을 450nm에서 읽으면 바탕(background)에 영향을 받아 실제보다 높은 흡광도 결과를 초래할 수 있다.
5. 결과 판정
※ 교정 인자(Calibration factor)는 뱃지(Batch)별로 다르게 규정되어 있으며, 자세한 사항은 동봉된 규격서에서 확인할 수 있다. 인덱스 값(Index Value) 계산 전에, 교정 인자를 확인한다.
1) 컷오프 값(Cut-off) 계산
교정물질(Calibrator)를 세 번 반복 측정한 흡광도 평균치를 계산한 후, 교정 인자(Calibration factor)를 곱한다.
: 교정물질 평균 흡광도 x 교정 인자 = 컷오프 값(Cut-off)
2) 인덱스 값(Index Value) 계산
인덱스 값(Index Value)은 검체의 흡광도를 컷오프 값(Cut-off)으로 나눈 값이다.
: 인덱스값(Index Value) = 검체 흡광도 / 컷오프 값(Cut-off)
3) 팬바이오 환산값(Panbio unit) 계산
팬바이오 환산값(Panbio unit)은 인덱스 값(Index Value)에 10을 곱한 값이다.
: 팬바이오 환산값 = 인덱스 값(Index Value) x 10
[예시]
예) 검체 A 흡광도 = 0.949
검체 B 흡광도 = 0.070
교정물질 흡광도 평균값 = 0.802
교정 인자 = 0.62
컷오프 값(Cut-off) = 0.802 x 0.62 = 0.497
검체 A (0.949/0.497) = 1.91 (인덱스 값)
검체 B (0.070/0.497) = 0.14 (인덱스 값)
검체 A 1.91 x 10 = 19.1 (팬바이오 환산값)
검체 B 0.14 x 10 = 1.4 (팬바이오 환산값)
4) 결과 해석
검체는 아래의 기준에 따라 결과를 판정하고 해석한다.
(1) 음성 기준
인덱스 값이 1.8 미만 또는 팬바이오 환산값이 18 미만인 검체
▶항 뎅기 IgG 항체 음성
(2) 양성 기준
인덱스 값이 2.2 초과 또는 팬바이오 환산값이 22 초과인 검체
▶항 뎅기 IgG 항체 양성 : 최근에 뎅기바이러스에 노출된 적이 있었거나, 2차 뎅기 감염이 의심되므로 확진 검사를 시행한다.
(3) 재시험 기준
인덱스 값이 1.8 이상이고 2.2 이하 또는 팬바이오 환산값이 18 이상이고 22 이하인 검체
▶재시험 : 인덱스 값이 1.8 이상이고 2.2 이하 또는 팬바이오 환산값이 18 이상이고 22 이하인 검체는 음/양성을 판정하기 어려우므로 2번 재시험해야 한다.
- 두 번 재시험한 결과 모두 컷오프값(Cut-off)이상으로 나타났다면, 검체는 양성으로 보고한다.
- 두 번 재시험한 결과 모두 컷오프값(cut-off)이하로 나타났다면, 검체는 음성으로 보고한다.
- 하나의 시험 결과는 컷오프값(Cut-off) 이상이고, 또 다른 시험 결과는 컷오프값(Cut-off)이하라면, 음/양성을 판정하기 어려우므로 재시험해야 한다. 재시험 후에도 같은 결과를 보이면 다른 검사방법을 이용하여 재검하거나, 검체 채취를 다시 진행하여 재검 한다.
6. 정도 관리
(1) 각각의 키트는 교정물질, 반응대조액 및 음성 대조액을 포함한다. 각 물질에 대한 적합 기준은 동봉된 규격서에서 확인할 수 있다.
(2) 반응 및 음성대조액과 교정물질의 흡광도 규격에 맞지 않을 경우, 재시험해야 하며 이 경우 환자 검체의 검사 결과는 보고하지 않는다.
1) 본 제제는 체외 진단용 시약으로만 사용한다.
2) 대조액에 사용되는 인체 유래 물질은 Anti-HIV 1 & 2, Anti-HCV 및 B형간염바이러스 표면항원을 포함하고 있지 않다. 그러나 어떤 검사방법도 완전하게 보장할 수는 없으므로, 모든 대조액 및 항원은 잠재적 감염 가능 물질로 여기고 폐기해야 한다. 질병관리예방본부 및 국립보건원의 권고에 따라 본 제제는 잠재적 감염성이 있는 시약으로 생물학적 안전성 Level 2에 준수하여 다루어야 한다.
3) 검체는 혈청에 한하며 사용하며 전혈, 혈장 및 다른 형태의 검체는 사용하지 않는다.
4) 황달 혈청, 지질이 많이 함유된 혈청, 용혈된 혈청 및 미생물에 감염된 혈청은 사용하지 않는다.
5) 열에 의해 불활화된 혈청은 사용하지 않는다.
6) 본 제제는 온도 변화에 민감하므로, 본 제제의 모든 시약은 실험 시작 전에 실온(20-25℃)에 둔다. 밀봉되어 있는 항체흡착플레이트의 경우, 항체흡착플레이트의 온도가 실온(20-25℃)에 맞추어지지 전까지 개봉하지 않는다.
7) 시약을 사용할 때는 깨끗한 Micro pipette용 Tip을 이용해야 하며, 시약을 분주할 때 오염이 일어나지 않도록 주의한다.
8) 사용하지 않은 플레이트웰은 즉시 건조제가 포함된 밀봉팩(closed bag)에 넣는다. 이 과정이 제대로 수행되지 않으면, 잘못된 결과를 초래할 수 있다.
9) [기질 반응계]
a) 기질액(TMB)은 금속성의 이온 물질에 감염되기 쉬우므로, 금속성의 물질과 닿지 않도록 주의해야한다.
b) 장시간 직사광선에 노출되지 않도록 주의한다.
c) 일부 계면 활성제는 기질액의 성능에 영향을 미칠 수 있으므로 주의한다.
d) 기질액의 색상은 옅은 청색이며, 이는 기질액의 활성이나 본 제제의 검사 결과에 영향을 미치지는 않는다.
10) 본 제제의 일부 시약은 아지드화나트륨을 포함하고 있는데, 이 성분은 납이나 구리 배관에 반응하여 폭발하기 쉬운 금속성의 아지드화물을 형성할 수 있다. 그러므로 배관을 통해 시약을 처리할 때는, 과량의 물로 씻어내어 폭발 위험으로부터 예방하도록 한다.
11) 아지드화 나트륨은 효소표지항체액의 활성도를 저해하므로 효소표지항체액을 사용할 경우 깨끗한 Miropipette용 tip을 이용하여 다른 시약의 아지드화 나트륨이 혼입되지 않도록 주의한다.
12) 환자의 증상이나 임상소견에 근거하여 임상적 진단을 내려야 한다. 본 제제의 결과만을 기초로 최종 진단을 해서는 안 되며 다른 검사방법과 환자의 증상을 고려하여 최종 진단을 내려야 한다.
13) 일반적인 인구 집단에 대해서는 검사를 진행 하지 않으며 양성예측도(Positive Predictive Value)는 바이러스가 존재할 가능성에 따라 달라지므로, 임상적 증상이 있거나 병원체에 노출된 것으로 의심 되는 환자를 대상으로 검사 하도록 한다.
14) 면역이 저하된 환자의 검사 결과는 신중하게 판독하여야 한다.
15) 세인트루이스뇌염, 머레이 계곡 뇌염, 일본뇌염, 황열 및 웨스트 나일 바이러스와 같은 플라비바이러스 속 바이러스와 혈청학적인 교차반응이 있을 수 있으므로, 진단을 확정하기 전에 나열된 질병들이 제외되었는지에 대해서 확인해야 한다.
16) 일반적으로 초기 감염자는 대게 하나의 형에 대해서만 항체 반응을 보이나, 감염이 지속되는 동안에, 다른 플라비바이러스 속의 항원 집단에 대해서 항체 반응성을 보일 수 있으므로 주의한다.
17) 본 제제에서 양성 결과를 보이는 모든 혈청은 확진 검사 및 역학적 기록을 근거하여 최종 진단을 내려야 한다.
18) 뎅기바이러스에 감염 현증을 가진 사람도 본 제제에서 음성 반응을 보일 수 있다. 감염 초기에 채취된 검체을 이용하여 검사하였을 경우, IgG 항체가 측정될 수 있을 만큼의 역가를 보이지 않을 수 있다. 초기 감염이 의심되면, 팬바이오 얼리 엘리자(Panbio Early ELISA) 제품을 이용하거나 다른 검사방법을 이용하여 초기 감염을 진단하도록 한다.
19) 뎅기바이러스에 감염된 후 회복중인 환자 검체의 IgG 항체의 역가는 컷오프값(Cut-off) 이상으로 증가될 수 있다. 그러므로 초기 감염과 2차 감염을 분별하기 위해 6~15일 내로 검사하는 것이 추천된다.
포장단위
| 포장단위 원료약품 |
96 tests/kit |
| 항체 흡착 플레이트 |
1장 (96 wells/장) |
| 뎅기바이러스 항원 |
1병(150 ul/병) |
| 항원희석액 |
1병(50 ml/병) |
| 농축세척액(20배 농축액) |
1병(60 ml/병) |
| 검체희석액 |
2병(50 ml/병) |
| 효소표지항체액 |
1병(7ml/병) |
| 기질액(TMB Chromogen) |
1병(15 ml/병) |
| 반응대조액 |
1병(200 ul/병) |
| 교정물질(Calibrator) |
1병(400 ul/병) |
| 음성대조액 |
1병(200 ul/병) |
| 반응정지액 |
1병(15 ml/병) |
| 저장방법 | 기밀용기, 냉장 보관(2~8°C) |
|---|---|
| 사용기간 | 제조일로부터 24개월 |
| 재심사대상 | |
| RMP대상 | |
| 포장정보 | 사용상의 주의사항 별첨 뒤에 작성 |
| 보험코드 | |
| 보험약가 | |
| 보험적용일 |
| 년도 | 생산실적 |
|---|---|
| 2013 | 60,314 |
서울 부산 인천 대구 광주 대전 울산 경기 강원 충북 충남 전북 전남 경북 경남 제주 세종시
